ZN0074型APCDD1 mRNA原位杂交试剂盒优惠价

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")ZN0074型APCDD1 mRNA原位杂交试剂盒优惠价，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：ZN0074型APCDD1 mRNA原位杂交试剂盒优惠价
编号：ZN0074
规格：100T
品牌：百奥莱博
产地：北京
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液2ml；
3.APCDD1 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；
4.封闭液5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
APCDD1的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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·Western Blotting DAB显色法检测试剂盒(蓝色)(小鼠IgG)
编号：ZN1932
规格：1盒
工作原理：聚合标记法是一种酶标记方法，其敏感性比普通酶标法有明显提高。用于Western Blotting的免疫学检测，更能体现其优点。不仅能大量地节约一抗，更重要的是使条带更清晰，甚至能检测出普通酶标法无法检测出的微量条带。DAB是过氧化物酶最重要的显色剂之一，反应产物为不溶于水、二甲*和醇的棕色沉淀物，适合于免疫印迹的显色反应。本产品采用特殊配方，具有操作简单，储存稳定，信号灵敏度高，持续时间长，背景低，结果易保存等优点。
保存条件：－20℃冷冻保存。DAB显色试剂应避光保存。
有效期：一年。
试剂盒的内容：
(1)封闭试剂：10g蛋白干粉×1包。
(2)浓缩抗体稀释液：20 ml×1瓶，为10倍浓缩液。
(3)过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG，效价1：200-400。
(4)DAB显色试剂，含
显色剂A：DAB×40倍浓缩液，3ml。
显色剂B：H2O2×40倍浓缩液，3ml。
显色剂C：×40倍TBS浓缩缓冲液(含*化镍)，3ml。
使用说明：
需要而未提供的试剂和器材：
1．转印了蛋白样品的NC膜或PVDF膜：通过SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白质抗原，将PAG胶上的蛋白质转印到硝酸纤维素膜(NC膜)或PVDF膜上。
2．稀释缓冲液：使用中性稀释缓冲液即0.02M PBS(AR0030)或0.02M TBS(AR0144)配制封闭液和抗体稀释液。0.02M PBS(pH7.2-7.6)：1000ml蒸馏水加Na2HPO4 2.8g ，NaH2PO4 0.4g，NaCl 8.5g。如果用的是含水磷酸盐，应加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6)：1000ml蒸馏水中加Tris 2.42g,NaCl 9g;纯乙酸或浓盐*(代"酸")调节pH值(7.2-7.6)。
3．洗涤缓冲液：每1000ml中性稀释缓冲液中加入0.5ml Tween20即可。
4．一抗：选择适合的一抗，用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体工作浓度为1μg/ml,具体的稀释度取决于特异性的一抗和膜上的抗原的量。
5．摇床：膜的封闭、抗体孵育和洗涤都需平稳摇晃，需在摇床上操作。
6．相机：记录结果。
操作程序：
1．通过聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳分离蛋白样本和分子量标准。
2．将蛋白样本转移至硝酸纤维素膜或PVDF膜上。
3．封闭硝酸纤维膜：用封闭蛋白干粉2g,加稀释缓冲液100ml，20-37℃封闭1-2小时。用量以浸没整张膜为准。
4．用洗涤缓冲液洗涤硝酸纤维素膜5分钟,1次。
5．配制抗体稀释液：取90ml稀释缓冲液加1g封闭蛋白干粉和10ml浓缩抗体稀释液即可。一抗、二抗均用此稀释液稀释。
6．硝酸纤维膜孵育一抗：用抗体稀释液稀释相应的一抗，一般特异性抗体浓度1μg/ml,20-37℃孵育2小时左右。如果缺乏特异性的条带或阳性不强，应提高一抗的浓度；如果有非特异性的条带，应提高一抗的稀释度。
7．用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维素膜3次,每次5分钟。
8．硝酸纤维膜孵育二抗：用抗体稀释液稀释相应的酶标二抗，效价1：200-400。37℃孵育一个半小时左右。用户可根据实际染色情况对稀释度做适当调整。
9．用洗涤缓冲液振荡洗涤硝酸纤维膜4次,每次5分钟。
10．DAB显色:使用DAB显色试剂。按每2ml蒸馏水加显色剂A，B，C各１滴，混匀。混匀后加至膜上。室温显色。一般显色1－30分钟。
若无背景出现则可继续显色。显色后用蒸馏水洗涤以终止反应。
11．观察，照相。
注意事项：
1．试剂频繁使用时置４℃，不常使用时置－20℃。显色剂A需置－20℃冷冻保存。如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。
2．显色工作液应新鲜配制。


ZN0074型APCDD1 mRNA原位杂交试剂盒优惠价关键词：ZN0074,百奥莱博,APCDD1 mRNA原位杂交试剂盒


·彩色预染超低分子量蛋白质标准(10-20次)
编号：ZN1882
规格：100μl
产品保存：-20℃保存，一年有效。
产品特点:
锐利且稳定的颜色。
多种颜色–易于凝胶中示踪。
即用型上样–无需煮沸。
免疫印迹转膜效果好。
产品应用:
监控SDS-PAGE凝胶中的蛋白迁移。
检验免疫印迹转膜效率。
SDS-PAGE凝胶和免疫印迹杂交膜上蛋白大小的粗略鉴定。
未染色预制胶中待切割目标蛋白的定位。
产品说明:彩色预染超低分子蛋白质marker特异性用于小分子蛋白分析。其含有6种重组的高纯度蛋白，表观分子量范围1.7 - 42 kDa。这些蛋白采用3种不同的染料分别染色。彩色预染超低分子蛋白质marker是即用型产品，使用前无需加热、稀释或变性剂处理。
使用方法：
1.室温或37℃融化Ladder几分钟，确保试管中的固体完全溶解，不要煮沸。
2.轻轻混匀，确保溶液完全混匀。
3.上样：
小凝胶：5μl/泳道，凝胶厚度0.75-1mm。
大凝胶：10μl/泳道，凝胶厚度1-1.5mm。
注意事项：此蛋白mark需用Tricine-SDS-PAGE凝胶跑胶，效果较理想。


ZN0074型APCDD1 mRNA原位杂交试剂盒优惠价关键词：ZN0074,百奥莱博,APCDD1 mRNA原位杂交试剂盒

BTN130805 单细胞悬浮液 Single Cell Suspension Solution
YT204 ARE凝胶迁移探针(10μM) ARE Probe For EMSA(10μM)
SY0119 ATF1-Luc荧光素酶报告基因质粒 ATF1 Luciferase Reporter Plasmid
HR0396 尿蛋白防腐剂 Urinary protein preservative
BTN100213 DNA嵌套缺失试剂盒 DNA Nested Deletion Kit
YT614 RIPA裂解液(强，无抑制剂) RIPA Lysis Buffer without inhibitors
SY0481 地塞米松溶液(10mM in DMSO) Dexamethasone (10mM in DMSO)
KFS241 EGFP标记Annexin V Annexin V-EGFP Reagent
RFT113 JM109化学感受态细胞 JM109 Competent cell
SV1319 ssRNA Ladder
BTN60807 柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒 Endotoxin-free plasmid DNA column extraction kit
WE0296 一步法Western专用封闭液 One Step Western Blocking Buffer 

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