ERG1 mRNA原位杂交试剂盒品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖ERG1 mRNA原位杂交试剂盒品牌在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：ERG1 mRNA原位杂交试剂盒品牌
编号：ZN0478
规格：100T
品牌：百奥莱博
产地：北京
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：human,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.ERG1 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗Digoxi*(代"n") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗Digoxi*(代"n")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
ERG1的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

关于ERG1 mRNA原位杂交试剂盒品牌的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
SV1464 10-beta E. coli 感受态细胞 ( 高效级 )
HR0474 Caspase 2抑制剂 Caspase 2 inhibitors
BTN120310 T7 RNA聚合酶 T7 RNA Polymerase
YT906 D-PBS溶液(含**) Dulbecco"s Phosphate-Buffered Saline(with Ca2+ & Mg2+)
HR0111 线粒体膜蛋白提取试剂盒 Mitochondrial membrane protein extraction kit
KFS289 N-乙酰半胱*酸(抗氧化剂)(NAC) N-acetyl-L-cysteine
SV0024 AflIII限制性内切酶 AflIII Restriction Endonuclease
SY0315 RIPA裂解液(弱) RIPA lysis buffer (Weak)
BTN3130A 三合一RNA上样液(A型,6X) RNA Loading Buffer
YT003 质粒大量抽提试剂盒 Plasmid Maxi Preparation Kit
SV0943 Bst DNA 聚合酶，全长
BTN80903 柱式植物RNA大量提取试剂盒 Plant RNA Column large-scale extraction kit
BTN90510 包涵体大量纯化试剂盒 Inclusion Body Maxiprep Kit
YT356 PI3K抑制剂(Wortmannin) phosphatidylinositol 3 kinase Inhibitor
SV1617 SNAP-Surface 阻断剂
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·人CXCL1重组蛋白
编号：ZN1608
规格：100ng
来源：大肠杆菌
特异性：人
应用：WB 阳性对照
形态：冻干粉
纯度：>98%，RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件：-20℃保存 1 年以上，避免反复冻融。

·浓缩型免疫组化试剂盒 SABC-CY3(POD)(小鼠IgM)
编号：ZN1854
规格：1盒
产品规格：1KIT
保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻。
工作原理
SABC 是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素同亲和素一样，对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，兼具高敏感性，低背景和操作简便的优点。CY3 比传统上的荧光更具有亲水性，因而不会因疏水性而引起非特异性吸附或聚合，从而背景更低。而且其敏感性和稳定性都更好。CY3 在 554nm 激化，在 568-574nm 发射荧光，呈鲜红色。免疫组化双显色试剂盒采用 CY3+过氧化物酶 POD 标记的链酶亲和素(SABC-CY3+POD)，用户根据实验需要，可在同一张切片上用两套显示系统观察。
试剂盒内容：
1．正常山羊血清封闭液(稀释比 1:10)1ml/2ml/5ml
2．生物素化山羊抗小鼠 IgM(参考效价 1：100)0.1ml/0.2ml/0.5ml
3．SABC-Cy3(参考效价 1：100)0.1ml/0.2ml/0.5ml
4．SABC-POD(参考效价 1：100)0.1ml/0.2ml/0.5ml
另有四个滴瓶供稀释试剂用。
石蜡片染色步骤：
1．石蜡切片，常规脱蜡至水。
2．3%H2O2 去离子水室温孵育5-10分钟,以消除内源性过氧化物酶活性.PBS冲洗,5分钟×3次。
3．根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4．封闭。滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比 1:10)，37℃孵育30分钟，甩干，勿洗。
5．滴加一抗(小鼠 IgM)，37℃孵育1-2 小时或 4℃过夜。PBS 冲洗，5分钟×3次。
6．滴加生物素化山羊抗小鼠 IgM，37℃孵育30分钟。PBS 冲洗，5分钟×3次。
7．滴加 SABC-Cy3(参考效价 1:100)或SABC-POD(参考效价 1：100)，37℃孵育30分钟。PBS 冲洗，5分钟×3次。
8．显色液显色，镜下控制反应时间。显色剂可选 DAB。自来水充分冲洗。
9．根据需要进行苏木素复染，染色时间为0.5-2分钟。选用中性树胶，水溶性封片剂或抗荧光衰减封片剂封片。
10．结果观察。荧光显微镜下有黄绿色颗粒者为阳性染色。普通光学显微镜下有棕黄色颗粒者为阳性染色。
建议：
1．热修复可选用枸橼酸盐缓冲液、EDTA 抗原修复液、PBS 缓冲液、TBS 缓冲液等作为抗原修复液。
2．酶修复可选用复合修复液、抗原修复液Ⅰ、胰蛋白酶、胃蛋白酶消化组织。


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KFS191 Annexin V-APC/PI双染双染细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-APC/PI Apoptosis Detection Kit
YT109 FITC抗兔免疫荧光染色试剂盒 Immunol Fluorence Staining Kit with FITC-Labeled Goat Anti-Rabbit IgG
SV1147 HhaI 甲基转移酶 HhaI methyl transferase
BTN121102 柱式鼠尾DNA提取试剂盒 Rat tail DNA column extraction kit
WE0245 1kb DNA Ladder
YT476 N端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白) N-EGFP plasmid（with CMV promoter）
ALH164 λ噬菌体DNA提取试剂盒 Lambda phage genomic DNA Extraction Kit
BTN130559 大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)感受态细胞 E.coli Rosetta-gami(DE3) Rosetta Competent Cell
RFT019 DNA Marker II(100～1200bp)
SY0172 HIF-1-GFP报告基因质粒 HIF-1 GFP Reporter Plasmid
HR0479 Caspase 9抑制剂 Caspase 9 inhibitors
BTN120505 Dam甲基转移酶 Dam Methyltransferase
SV0593 PluTI限制性内切酶 PluTI Restriction Endonuclease
SY0534 细胞消化液
KFS294 H-89(PKA抑制剂)
SV0036 AleI限制性内切酶 AleI Restriction Endonuclease
SV1405 通用 miRNA 克隆接头

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