蛋白A 分子生物学试剂

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名称：蛋白A 分子生物学试剂
英文名：Protein A
产地：国产|进口
编号：ZN1998
规格：5mg
保存条件：4℃保存一年
生产方法：重组蛋白 A。A 蛋白是金黄葡萄球菌细胞壁上的成分。由于其可以结合大多数免疫球蛋白的Fc 段，因此 A 蛋白被视为一种广谱二抗。可广泛地应用于免疫学及分子生物学中各个分支学科的研究领域。
试剂内容：
A 蛋白——含 5mg 重组蛋白 A，特异性纯度 98%以上。
使用方法：
试剂稀释：具体浓度由用户自己确定。
0.01M PBS 缓冲液(PH7.0-7.6)，或 1%乙酸*稀释均可。稀释后不能长期保存。

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蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(含EDTA) Inhibitor of protease and phosphatase(with EDTA)  250ul|1ml
ARB10672 人血管紧张素Ⅲ(ANGⅢ)Elisa方法检测 
磷酸二酯酶Ⅰ Span 80 9025-82-5
BTN130809 定影粉 Fixing Solution,Powder 定
DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)   2×3ml|2×10ml
叔丁基*(代"*")乙*(代"腈")肟碳酸酯 L-2-Aminobutyric acid 58632-95-4
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聚尿苷酸 α-Galactosidase preparation from green coffee beans
无机磷检测试剂盒(硫*(代"酸")亚铁钼蓝比色法)   50T|100T
BL1153 50×Denhardt溶液
蛋白A 分子生物学试剂关键词：蛋白A,ZN1998,Protein A

BL0968 封闭用驴血清(冻干粉)
DN2301 粪便基因组DNA快速提取试剂盒
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ARB12879 小鼠丙*酸转*酶/谷丙转*酶(ALT/GPT)Elisa分析 Mouse alanine aminotransferase,alt/gpt ELISA KIT
ARB11290 人*调素(CAM)酶联免疫定量检测 Human calmodulin,cam ELISA KIT
中性红指示剂   100ml
ARB12625 大鼠维生素D2(VD2)酶标法分析 Rat vitamin d2,vd2 ELISA KIT
ARB10417 人丙二醛(MDA)含量测试 Human malondialchehyche,mda ELISA KIT
麦芽糖溶液 Maltose Solution 20% 100ml
咖啡酸 DMBA 331-39-5
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L-苏*酸 Oxacillin sodiu*(代"m") salt 72-19-5
72-19-5 L-Threonine L-苏*酸
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64485-93-4 噻孢霉素 Cefotaxime,Sodium Salt
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ARB10096 人EB病毒IgA(EBv IgA)ELISA代测服务 Human epstein-barr virus iga,ebv iga ELISA KIT
F010102 小鼠抗乙肝e抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBeAg
甲壳胺 Sodium metavanadate dihydrate 9012-76-4
蛋白A 分子生物学试剂关键词：蛋白A,ZN1998,Protein A


·小鼠MMP3重组蛋白
编号：ZN1785
规格：100ng
来源：大肠杆菌
特异性：小鼠
应用：WB 阳性对照
形态：冻干粉
纯度：>98%，RP-HPLC&SDS-PAGE
保存条件：-20℃保存 1 年以上，避免反复冻融。

·防脱片玻片(APES和多聚赖*酸双重处理)
编号：ZN1947
规格：50片
使用说明：常用于细胞培养、病理学组织和细胞制片、液基细胞学薄层制片，以防止操作过程中细胞或组织掉片现象的发生。用防脱玻片贴片后，请立即烤片，建议 37℃烤片过夜。注意烤片温度不要超过 60℃，且时间不要太长，以实验中不脱片为原则。如烤片温度过高，时间过长，会对组织内抗原有影响。

·P18 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1064
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman,rat,mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.P18 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
P18的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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