JM110化学感受态细胞说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

JM110化学感受态细胞说明书的品牌：百奥莱博，是优质的克隆与表达产品，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多JM110化学感受态细胞等克隆与表达产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：JM110化学感受态细胞说明书
编号：RFT114
规格：20×100μl
英文名：JM110 Competent cell
品牌：百奥莱博
产地：北京
本公司生产的JM1110感受态细胞采用经特殊工艺处理得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC18质粒检测，转化效率可达108cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。

基因型：rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIq lacZΔM15]

产品特点：
1、JM 110 是一种甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，使DNA 不被甲基化，使用其转化所得到的质粒DNA，可被对dam、dcm 甲基化敏感的限制酶切割。
2、只适用于转化质粒DNA。
3、细胞具有硫*(代"酸")链霉素(Strr) 抗性。

操作方法：(以下操作均按无菌条件的标准进行)
1、取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2、向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μl的感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。
3、将离心管置于42℃水浴中放置45秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3分钟，该过程不要摇动离心管。
4、向每个离心管中加入500μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)， 混匀后置于37℃摇床振荡培养45分钟(150转/分钟)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5、将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12—16小时。

注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200—300μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心(4000 rpm, 2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)

注意事项：
1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免感受态细胞的转化效率。
2. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3. 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。

储存条件：-70℃，有效期6个月。

JM110化学感受态细胞说明书极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·5×TBE
编号：RFT190
规格：500ml|10×500ml
本品常用于DNA琼脂糖凝胶电泳。

·66KD蛋白Marker
编号：RFT041
规格：50mg
本产品包含一种已知分子量的标准蛋白质，分子量大小为66kD，可以用来判断SDS-PAGE未知蛋白的分子量。本品以干粉状态提供。

使用方法：
1、配制10mg/ml 66kD蛋白Marker母液：取10mg 粉末溶于1ml超纯水中。此溶液-20℃贮存。
2、按照下表配制Marker溶液

 

配制量	浓度	66KD母液(10mg/ml)	超纯水	5×DualColor蛋白上样缓冲液
10μl	0.2 μg/μl	0.2μl	7.8μl	2μl
50μl	0.2 μg/μl	1μl	39μl	10μl
100μl	0.2 μg/μl	2μl	78μl	20μl

3、取配制好的溶液彻底混匀后，95℃处理5分钟立即上样电泳，每次上样10μl。
4、电泳结束后，染色，观察结果。

储存条件：-20℃。


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·GST标签抗体
编号：RFT171
英文名称：Mouse anti-GST Monoclonal antibody
规格：20μl
小鼠抗GST单抗克隆IgG，抗体推荐用于重组蛋白GST标签检测，不管GST 位于重组蛋白N 端或者C 端。本品采用蛋白A纯化自小鼠腹水，浓度为1mg/ml，

推荐应用比例(最优稀释比例依不同实验具体情况而定)：
Western Blot————1:3000～1:50000
ELISA-———————1:5000～1:200000

储存条件：-20℃

·2×DNA上样液(变性凝胶电泳)
编号：RFT188
英文名称：2×DNA loading buffer (for denaturating urea gels)
规格：5×1ml
本制品是尿素变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳时使用的上样缓冲液，适用于分离短的单链DNA。本缓冲液常用于SSR标记和AFLP、RFLP等基因分型检测。本制品中含有甲酰胺，可以解除DNA的二级结构，保持DNA的单链构型；另外，本制品中还含有*酚蓝、二甲*菁两种色素，可以观察电泳的进行情况。*酚蓝与二甲*菁在变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶中的迁移速率则随凝胶浓度的改变而不同，见下表：
 

变性胶浓度	*酚蓝	二甲*菁
5%	35 bp	130 bp
6%	26 bp	106 bp
8%	19 bp	75 bp
10%	12 bp	55 bp
20%	8 bp	28 bp

注：bp数是指和色素移动相同距离的DNA片段长度。

使用方法：
使用前，先离心快甩使溶液至管底，以防开盖后造成污染。取本制品与待测DNA样品或DNA Marker等体积混匀，95℃处理5-10分钟，冰上预冷后进行电泳。

注意事项：
1、为了您的安全，使用时请使用一次性手套操作，注意防护。
2、本制品不适用于非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶核酸电泳和蛋白电泳。

储存条件：4℃，有效期12个月。


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·Western及IP细胞裂解液
编号：RFT157
英文名称：Cell lysis buffer for Western and IP
规格：100ml
本产品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀和免疫共沉淀。Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mMTris (pH7.5)，150mMNaCl，1% Triton X-100，以及sodiu*(代"m") pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法：
对于培养细胞样品：

1、融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2.1、对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。
2.2、对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。
3、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。

对于组织样品：
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
3、按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
4、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5、充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项：
1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

储存条件：-20℃，有效期12个月。

北京百莱博科技有限公司专业生产供应销*(代"售")生物试剂、化学试剂、抗原抗体、血清血浆、Elisa试剂盒，更多试剂产品需求，欢迎来电咨询选购JM110化学感受态细胞说明书。