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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
701
- 英文名:
Mycoplasma Bovis ELISA Antibody Test Kit
- 保质期:
9个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博致力于最快速、最有效的检测产品,包括SYA664型牛支原体抗体ELISA检测试剂盒现货促销在内的动物疫病ELISA检测试剂盒产品是我公司倾力打造的优势产品,欢迎选购。
名称:SYA664型牛支原体抗体ELISA检测试剂盒现货促销
编号:SYA664
规格:96次/盒
英文名:Mycoplasma Bovis ELISA Antibody Test Kit
品牌:百奥莱博
产地:北京
【主要成分】
组份 数量 规格
包被板 1 块 96T
阴性血清对照 1 管 1ml/管
阳性血清对照 1 管 1ml/管
样品稀释液 1 瓶 50ml/瓶
10×洗液 1 瓶 30ml/瓶
兔抗牛IgG酶标抗体 1 瓶 12ml/瓶
底物显色液 1 瓶 12ml/瓶
终止液 1 瓶 6ml/瓶
说明书 1 份
【作用与用途】
适用于牛血清中牛支原体抗体的检测。
【用法与判定】
1、试剂准备
仔细阅读说明书,所有的试剂在使用前需放置于室温至少1小时,使试剂盒恢复到室温。
2、洗涤液的配制
取1 份10×洗液加入到9份双蒸水中,混匀。配好的液体,应在3天内用完。
3、稀释待检血清。用样品稀释液将待检血清做1∶160(VV)倍稀释(建议在1.5ml微量离心管中加入400μl 样品稀释液,吸取2.5μl 待检样品加入该管中充分混匀)。
4、操作步骤
4.1 加样
包被板上对照和待检样品添加如下所示。
4.2 孵育
将稀释好的样品加入包被板中,100μl/孔。将包被板置37℃下孵育1小时。
4.3 洗涤
甩去孔内液体,用稀释好的洗涤液洗涤包被板,300μl/孔,振荡洗涤3次,拍干。
| 1 | 2 | |||||||||||
| 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |||
| A | P | S1 | S2 | S3 | S4 | |||||||
| B | P | |||||||||||
| C | N | |||||||||||
| D | N | |||||||||||
| E | ||||||||||||
| F | ||||||||||||
| G | ||||||||||||
| H |
(注:“P”为阳性血清对照;“N”为阴性血清对照;S1、S2、S3、S4 为待检血清样品)
4.4 二抗孵育
向各孔中加入兔抗牛IgG 酶标抗体,100μl/孔。将包被板置37℃下孵育1小时。
4.5 洗涤
方法同4.3。
4.6 显色
加入底物显色液,100μl/孔,置室温(15~25℃)下,避光孵育9分钟。
4.7 终止
加入终止液,50μl/孔,轻微震荡混合均匀。
4.8 读数
在加入终止液15分钟内,将包被板置于酶标仪中,用波长450nm(OD450)读数。
4.9 S/P值计算
按照以下计算公式,计算S/P值。
4.10 判定标准
4.10.1 试验结果有效的条件是:阳性血清对照OD450值均应≥0.8,阴性血清对照OD450 值均应<0.1。
4.10.2 待检样品的S/P 值≥0.418时,判定为阳性;待检样品的S/P值<0.418时,判定为阴性。
【注意事项】
(1)所有试剂在2~8℃条件下保存。
(2)贮存时,所有的板条一定要用封口膜密封,防止潮气对包被板的损伤。
(3)不要使底物溶液接触强光和氧化物。取出后,不得再加回瓶中。
(4)仔细阅读说明书。
(5)不要使用过期的成分或者不同批次试剂混合使用。
(6)稀释10×洗液时,如发现存在结晶,可置37℃下加热使其溶解后再使用。
(7)注意加样和洗涤过程,以确保试验的准确度,不能用嘴吸液。
(8)被检血清发生腐败时勿用于检测。
(9)检验用器皿必须清洁,操作过程避免与金属类器物接触。
(10)在加样时,应使各孔的加样时间差别小于5 分钟,以保证各孔反应时间一致。
(11)操作过程中使用手套,终止液是硫*(代"酸"),如接触,应用清水迅速冲洗接触部位。
【贮存与有效期】
2~8℃保存,有效期为9个月。
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SYA664型牛支原体抗体ELISA检测试剂盒现货促销关键词:SYA664,Mycoplasma Bovis ELISA Antibody Test Kit,牛支原体抗体ELISA检测试剂盒
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编号:SYA635
等级:科研实验专用
规格:192次/盒|480次/盒
·禽流感H7病毒单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA156
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·登革热Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ病毒四重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA252
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·玉米转基因CBH-351单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA284
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·禽网状内皮组织增殖病病毒(REV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA368
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪传染性胸膜肺炎放线杆菌单重凝胶PCR检测试剂盒
编号:SYA777
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
一、简介:
本试剂盒用一对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌特异性引物,对猪传染性胸膜肺炎放线杆菌DNA进行体外扩增检测,用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
二、用途:
该试剂盒适用于检测气管分泌物拭子、肺组织等样本中传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA,用于传染性胸膜肺炎放线杆菌的辅助诊断,其检测结果仅供临床参考。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌PCR反应液(APP-PCR MIX) 1管 720μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照 (NTC) 1管 50μL/管
阳性对照 (APP-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、PCR仪器适用范围
ABI系列,Roche系列等PCR检测仪等。
六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
6.1.1 血清:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入无菌的干燥玻璃管,室温(22-25℃)放置30-60min,血标本可自发完成凝集析出血清,或直接使用水平离心机,3000rpm离心5min,吸取上层血清,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆:用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL,注入含EDTA2Na(乙二*(代"胺")四乙酸二*)或柠檬酸*抗凝剂的玻璃管,立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次,使抗凝剂与静脉血充分混匀,5-10min后即可分离出血浆,转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 粪便样品:取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.4 病灶部位样品:取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-凝胶配套),并按照相应试剂盒说明操作。
6.2.1 培养物:取培养物50μL(培养至一定浊度)或者挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
6.2.2 粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.2.3 其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出PCR反应液(APP-PCR MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL PCR反应液,向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(APP-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 PCR反应条件
将各反应管放入PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
预变性 1循环 94℃ for 2 min
PCR扩增 35循环 94℃ for 30 sec
58℃ for 30 sec
72℃ for 30 sec
八、结果分析:
(1) 称取1.5g琼脂糖放于250mL锥形瓶中,加入100mL 1×TAE电泳缓冲液,微波炉加热溶解,稍冷后加入10μL染色液混匀,倒入插有梳子的制胶板中。
(2) 待胶凝固后,取10μL Maker(推荐使用DL500 Maker)点样于左侧凝胶孔中,取10μL PCR产物依次点样于凝胶孔中,电压值设定为电泳槽正负极距离(cm)与5(V/cm)的乘积。待*酚兰指示剂电泳至凝胶中部时停止电泳并使用凝胶成像仪或紫外透照台观察结果。
九、结果分析:
(1) 阴性对照(NTC):无任何的条带(引物带除外)。
(2) 阳性对照(APP-PTC):在80bp处有条带。
(3) 被检样品:在80bp处有条带为阳性样品,否则为阴性样品。
(4) 以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
SYA664型牛支原体抗体ELISA检测试剂盒现货促销关键词:SYA664,Mycoplasma Bovis ELISA Antibody Test Kit,牛支原体抗体ELISA检测试剂盒
·猫源性成分单重荧光PCR检测试剂盒(定量)
编号:SYA308
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪链球菌单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA015
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Streptococcus suis
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
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编号:SYA066
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Streptococcus suis
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·冠状病毒(HCoV)通用单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA178
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Streptococcus suis
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·副溶血性弧菌TDH/TLH双重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA101
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Streptococcus suis
等级:科研实验专用
规格:48次/盒
·猪出血性魏氏梭菌(CW)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA435
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Streptococcus suis
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
·猪乙型脑炎病毒(JEV)单重荧光PCR检测试剂盒
编号:SYA419
英文名称:Fluorescent PCR detection kit for Streptococcus suis
等级:科研实验专用
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介:
该方法采用一步法荧光qRT-PCR,反应在同一管内连续进行,操作简单,并有效防止了污染,能对样品中的猪乙型脑炎病毒进行快速检测,具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。
二、用途:
该试剂盒适合于检测发病动物血液、脑脊液、组织以及病毒细胞培养液等标本中猪乙型脑炎病毒(JEV)RNA,适用于猪乙型脑炎病毒(JEV)感染的辅助诊断。
三、试剂盒组成:(48T)
组份 数量 规格
JEV荧光qRT-PCR反应液(JEV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(JEV-PTC) 1管 50μL/管
四、储存条件及有效期:
本试剂盒于-20℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围:
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
6、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
适用标本类型:发病动物的血液、体液、脑脊液、组织以及病毒培养物等标本。
6.1.1 组织:取发病组织约1g,置入1.5mL洁净EP管,立即送检。
6.1.2 血液、体液、脑脊液及病毒培养物:血液,无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸*)抗凝管;体液、脑脊液及病毒培养物液等,无菌条件下取0.5-1mL左右,置入1.5mL洁净EP管,立即送检。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品,并按照相应试剂盒说明进行操作。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5μL 加入到反应体系中即可。
由于阳性对照浓度较高,建议最后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR 反应液(JEV-qRT-PCR MIX),室温融化并振荡混匀后,10000rpm 离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照),测试反应体系配制如下:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm 离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL,向每管中加处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(JEV-PTC)5μL,10000rpm 瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的最高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC): 不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(JEV-PTC):均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明JEV核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明JEV核酸阴性。
(3)如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行JEV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明JEV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管最好高压灭菌,而且必须不含RNA 酶。
(3)PCR 操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR 扩增区等),防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待,并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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文献和实验研究。高度优化的ELISA检测试剂盒可以在检测标本时将干扰因素和非特异反应减少到最低水准,博士德生产的ELISA试剂盒是通过充分验证的, 敏感性:博士德的ELISA试剂盒使用标准的双抗体夹心技术,并且引进亲和素—生物素—过氧化物酶系统,以进一步提高敏感性。 稳定性:一般ELISA试剂盒所用的包被方法,很容易因干燥导致包被的抗体失去活性,从而影响结果的准确性。为此博士德进行了长期的研究,以期找到一种包被后抗体长期不失活的方法,甚至是在室温。博士德自主开发的新包被方法,正是采用了这一技术。博士
两水平质控血清,分析批间CV。 (5)引干扰性:加入不同浓度甘油三酯、胆红素于标本中,并与未加甘油三酯、胆红素标本作平行检测。 (6)稳定性:将除藻红蛋白标记抗体溶液的试剂盒分组存于37℃30 d 室温1周及2~8℃保存至有效期末(有效期6个月)然后检测。 5. TM检测:用微粒子酶免分析法测AFP、CEA,用ELISA检测CA242,用电化学发光法测CYFRA21-1,均严格按说明书操作。 6. 统计学分析:用SPSS11.5统计软件分析。同一检测项目不同
,也不能用做疗效监测。一般认为,IgM型抗体和反应素在感染梅毒螺旋体后出现,经正规、足量抗梅治疗后其滴度会逐渐下降直至消失。因此,以ELISA检测抗螺旋体IgM抗体,或以非梅毒螺旋体抗原血清试验检测反应素的滴度是判断是否需要治疗及进行疗效观察的主要参考指标。目前国内质量过关的梅毒IgM抗体试剂盒并不多见,非梅毒螺旋体抗原血清试验仍是这方面工作常用而有效的方法。
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