北京酵母质粒提取试剂盒厂家

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北京酵母质粒提取试剂盒厂家由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多酵母质粒提取试剂盒等DNA纯化产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：北京酵母质粒提取试剂盒厂家
编号：WE0165
规格：50次
英文名：Yeast Plasmid Extraction Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本试剂盒在普通碱裂解法的基础上进行了改进，全新的Lyticase可以有效的破除酵母细胞壁，新型硅基质膜和缓冲液系统能高效专一的结合质粒DNA，同时可以最大限度的去除蛋白及其他杂质，整个过程方便快捷，不需使用有毒有害试剂，可以同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外，也可用于大肠杆菌。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如连接、转化、测序和文库筛选等。

试剂盒组成：

 

组份	50次
Buffer P1	15ml
Buffer P2	15ml
Buffer N3	20ml
Buffer PS	15ml
Buffer PB	10ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml
Buffer EB	10ml
RNase A(10 mg/ml)	150μl
玻璃珠	2g
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇，异丙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、第一次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2–8℃保存。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer P2、Buffer N3是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意不要直接接触Buffer P2和Buffer N3，使用后应立即盖紧盖子。
6、提取的质粒量与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关，通常酵母质粒拷贝数都很低，通过电泳或分光光度计法都很难检测到。

操作步骤：
1、取1-5ml酵母培养物(最多不超过5×107个酵母细胞，一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×107细胞/ml)加入离心管(自备)中，12000rpm(~～13400×g)离心30秒，收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
2、向菌体中加入250μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，重悬沉淀。
3、在以上混合物中加入40 mg的玻璃珠(Glass Beads)，涡旋震荡10分钟。
4、向离心管中加入250μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀6-8次，室温放置5-10分钟，此时菌液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
5、向离心管中加入350μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀6-8次，此时出现白色絮状沉淀，12000rpm离心20分钟。
注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
6、柱平衡: 向已装入收集管的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中，注意不要吸出沉淀。
注意：吸附柱的最大容积为750μl，溶液分2次过柱。
8、12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
9、向吸附柱加入150μl Buffer PB，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
11、将吸附柱重新放回收收集管中，12000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer EB，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置数分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Buffer EB在65-70℃水浴预热，可以增加提取效率。
3)通常酵母质粒拷贝数很低，通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒如果用于下一步实验，通常建议使用量为：用作PCR模板可使用1–5μl质粒，用于转化大肠杆菌可使用5–10μl质粒。
4)转化大肠杆菌时应使用商业化高转化效率的感受态细胞。

储存条件：室温(15～30℃)

更多有关北京酵母质粒提取试剂盒厂家的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：

·大片段Bst DNA聚合酶
编号：WE0236
英文名称：Bst DNA Polymerase, Large Fragment
规格：800U|4000U
  本品是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，其基因来源于Bacillus stearothermophilus，并在原始序列的基础上进行了部分点突变。该蛋白 具有5"→3" DNA聚合酶活性，无5"→3"和3"→5"核酸外切酶活性，具有强链置换活性。应 用于DNA等温扩增(LAMP)、多重置换扩增(MDA)、全基因组扩增(WGA)、建 库测序等。

·抗V5标签多克隆抗体
编号：WE0344
英文名称：Anti V5 Rabbit Polyclonal Antibody
规格：20μl|100μl
V5标签是从猿病毒5(SV5)副粘病毒P蛋白和V蛋白中分离得到的由14个*基酸残基组成的多肽(GKPIPNPLLGLDST)。该抗体高度特异识别重组蛋白C末端或N末端的V5标签，不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的V5-Tag融合蛋白。

抗体类型：亲和纯化兔多克隆抗体IgG
免疫原：人工合成多肽
应用范围：WB(1：1000-5000)、ELISA(1：1000-10000)


·磁珠法游离DNA提取试剂盒
编号：WE0204
英文名称：MagDNA Free-Circulating DNA Extraction Kit
规格：96次
  本试剂盒适用于从血浆、血清、羊水、淋巴液、尿液等无细胞体液中简单、高效的纯化回收游离DNA(Free circulating/Cell-free DNA)。在高盐存在时，游离DNA结合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后，高纯度的游离DNA被洗脱于Buffer EB或去离子水中。游离DNA的得率与样品类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠，可用于定量PCR以及二代测序建库等下游实验。该试剂盒还可用于病毒DNA的提取。

试剂盒组成：

组份	96次
Buffer KCL	96ml
Buffer KCW1(浓缩液)	72ml
Buffer KCW2(浓缩液)	60ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	4ml

自备试剂：异丙醇、无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、向蛋白酶K *(代"粉")末中加入指定用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取率低。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer KCW1和Buffer KCW2中加入无水乙醇并做好标记。
4、Magbeads严禁冰冻、离心。冰冻和离心可能会对Magbeads造成不可逆的损害。
5、Magbeads在使用前一定要涡旋震荡20秒使其充分混匀。

操作步骤：
第一次使用前请检查Buffer KCW1和Buffer KCW2中是否已加入无水乙醇。
1、向1.5ml的离心管中加入20 ul 蛋白酶K ，之后加入300 ul血浆。
2、向上一步的离心管中加入300 ul Buffer KCL，涡旋震荡5秒钟使其充分混匀后将离心管放于56℃水浴锅中孵育10分钟。
3、将上一步的离心管从水浴锅中取出，短暂离心后室温放置5分钟。
4、向上一步的离心管中加入150 ul异丙醇，涡旋震荡混匀后短暂离心。之后向离心管中加入40 ul彻底混匀的Magbeads，涡旋震荡5秒钟后放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡10分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)或连续颠倒混匀10分钟。
注意：如果样品量较多，可将异丙醇与Magbeads提前按比例混匀，之后同时加入裂解产物中。
5、将上一步的离心管放于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后彻底弃去溶液(保持离心管固定于磁力架上)，期间避免接触Magbeads。
6、将离心管从磁力架上取下，加入500 ul Buffer KCL后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后弃去溶液。
注意：如果样品为血清、羊水、淋巴液或尿液，Buffer KCL漂洗步骤可去除。
7、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer KCW1后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后弃去溶液，期间避免接触Magbeads。
8、将离心管从磁力架上取下，加入750 ul Buffer KCW2后涡旋点震20秒或放于25℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡2分钟(震荡过程中确保Magbeads处于悬浮状态)。之后将离心管固定于磁力架上静置1分钟，待Magbeads完全吸附于离心管侧壁后轻轻颠倒磁力架将离心管盖上的杂质洗落后弃去溶液，期间避免接触Magbeads。
9、重复步骤8。
10、保持离心管固定于磁力架上，用移液器进一步去除离心管管底和管盖上的溶液，之后室温放置5-10分钟，使乙醇挥发干净。
注意：如果离心管壁上有液珠，可向离心管中加入800 ul无水乙醇。盖盖后颠倒离心管，之后彻底去除无水乙醇。
11、将离心管从磁力架上取下，加入30-100 ul Buffer EB或去离子水。涡旋震荡时Magbeads完全悬浮于洗脱液中后将其放入56℃、1500 rpm的恒温混匀仪上震荡洗脱10分钟或放于56℃水浴锅中孵育10分钟，期间每隔3分钟涡旋震荡10秒钟。
12、将上一步的离心管放置于磁力架上静置2分钟，待Magbeads完全吸附后用移液器将洗脱液转移至新的离心管中-20℃保存备用。

储存条件：室温(15～30℃)


北京酵母质粒提取试剂盒厂家关键词：Yeast Plasmid Extraction Kit ,酵母质粒提取试剂盒,WE0165

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