WE0167型高效无内毒素质粒大量提取试剂盒哪里卖

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")WE0167型高效无内毒素质粒大量提取试剂盒哪里卖，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：WE0167型高效无内毒素质粒大量提取试剂盒哪里卖
编号：WE0167
规格：2次|10次
英文名：NoEndo Plasmid Maxi Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本试剂盒提供一种简单快捷高效提取无内毒素质粒的新方法，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术，高效专一结合质粒DNA；同时采用特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器，有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，体外转录，内切酶消化等实验。

  为什么使用本试剂盒？：内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。

试剂盒组成：

 

组份	2次	10次
Buffer P1	30ml	125ml
Buffer P2	30ml	125ml
Buffer E3	30ml	125ml
Buffer PS	15ml	30ml
Buffer PW(浓缩液)	10ml	50ml
Endo-Free Buffer EB	10ml	30ml
RNase A(10 mg/ml)	600μl	2ml
推柄	2个	10个
内毒素过滤器FQ	2个	10个
吸附柱DQ及收集管	2套	10套
离心管(50ml)	2个	10个

自备试剂：无水乙醇、异丙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、所有组分可在干燥、室温(15～30℃)环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1 置于2～8℃可稳定保存6个月。
2、Buffer P1 在使用前先加入RNase A(将试剂盒中提供的RNase A 全部加入)，混匀，置于2–8℃保存。使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。
4、使用前请先检查Buffer P2 和Buffer E3是否出现结晶或沉淀，如有结晶或沉淀现象，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清。
5、注意Buffer P2和Buffer E3含有刺激性物质，请戴手套操作，使用后应立即盖紧盖子。
6、使用Buffer PS处理过的吸附柱最好立即使用，避免放置时间过长影响使用效果。
7、提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

操作步骤：
1、取150ml过夜培养的菌液，加入离心管(自备)中，12000×g离心2-3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。
2、向留有菌体沉淀的离心管中加入12ml Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A)，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，使提取量和纯度偏低。
3、向离心管中加入12ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。
4、向离心管中加入12ml Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。12000×g离心10分钟，将上清全部倒入除内毒素过滤器中，慢慢推动推柄(Plungers)过滤，滤液收集在干净的50ml离心管(自备)中。
注意：Buffer E3 加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
5、向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀。
注意：加入异丙醇过多容易导致RNA污染。
6、柱平衡：向已装入收集管中的吸附柱中加入2ml Buffer PS，12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱(已装入收集管)中。
8、6000-12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：吸附柱的最大容积为15ml，所以第7步中所得溶液分多次过柱。如果离心机转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10ml，以防发生漏液现象。
9、向吸附柱中加入10ml Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇)，6000-12000×g离心2分钟，倒掉收集管中的废液。
10、重复步骤9。
11、将吸附柱重新放回收集管中，12000×g离心5分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
12、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附膜的中间部位加入1-3ml Endo-Free BufferEB，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1)为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2-5分钟，12000×g离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2)质粒拷贝数较低或>10 kb时，Endo-Free Buffer EB在65－70℃水浴预热，可以增加提取效率。

储存条件：室温(15～30℃)

关于WE0167型高效无内毒素质粒大量提取试剂盒哪里卖的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
SV0416 HinP1I限制性内切酶 HinP1I Restriction Endonuclease
SV1613 pSNAPf 载体
BTN100839 PCR级甲酰胺 Formamide，PCR Grade
YT145 Caspase抑制剂(Z-VAD-FMK) Caspase Inhibitor Z-VAD-FMK
SV1294 50 bp DNA Ladder
HR0305 原钒酸*溶液(NaVO4，0.1M)
BTN100930 硝酸纤维素膜 Nitrocellulose Membrane
YT559 N-乙酰*基葡萄糖转移酶 N-Acetylglucosaminyltransferases (Crude Enzyme)
ALH203 动物组织细胞免DNA提取PCR试剂盒 Animal Tissue PCR Kit(Free of DNA Extraction)
KFS187 Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-PE Apoptosis Detection Kit
RFT062 1M Tris(pH6.8)
SY0212 Elk1-GFP报告基因质粒 Elk1 GFP Reporter Plasmid
BTN71204 柱式凝固血液DNA提取试剂盒 Coagulated blood DNA column extraction kit
WE0241 二代测序接头引物试剂盒(Illumina平台 Index Primer1-12) NGS Multiplex Oligos for Illumina(Index Primers Set I)
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·Super DNA Ladder
编号：WE0243
规格：100次(500μl)|500次(5×500μl)
  Super DNA Ladder由10条DNA片段组成，分别为10000bp、5000bp、3000bp、2000bp、1,500 bp、1000bp、750 bp、500 bp、250 bp和100 bp。本产品含有1×Loading Buffer的DNA溶液，可取5μl直接电泳，使用十分方便；电泳时1000bp的DNA片段量约为150ng，显示亮带，其他条带的DNA量约为50ng。

实验前准备及重要注意事项：
1、本产品可直接化冻混匀使用，无需加热。
2、请及时更换电泳缓冲液并使用新制琼脂糖凝胶，以免影响电泳结果。
3、DNA琼脂糖凝胶电泳时，凝胶的纯度对DNA条带的清晰度影响很大，因此尽量选用质量好的琼脂糖，推荐凝胶浓度为1%-3%，电压4-8 v/cm。
4、凝胶浓度与DNA片段的分离性能关系密切。凝胶浓度越大，对短片段DNA分离性能越好；反之，凝胶浓度越小，越有利于长片段DNA的分离。

使用方法：
取5μl 加入琼脂糖凝胶的加样孔中(如果加样孔较宽，大于6mm时，须适当增加上样量)，进行电泳。


1%琼脂糖凝胶电泳图(5μl)

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期24个月。


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·Western中分子量蛋白Marker
编号：WE0292
英文名称：Western MidiWT Protein Marker
规格：20次(100μl)
  本品是专门为Western Blot实验设计的分子量标准。由4种不同分子量的蛋白组成(20 kD、35 kD、60 kD、110 kD)，这四种蛋白都可与人、小鼠、大鼠、山羊、绵羊、兔的IgG恒定区结合，因此该Marker能与待检抗原在同一张胶片上曝光，阳性信号的分子量大小可以直接通过MidiWT的位置做出准确判断，无需后续图片拼接即可确定目的蛋白。另外该Marker还可以作为Western Blot实验的阳性对照。本产品不经过任何化学修饰，分子量精确，可以准确衡量目的蛋白的分子量大小，推荐上样量为5-10 µl。

注意事项：
1、本产品可直接使用，不需要加热。
2、将产品取出后于室温放置融化，务必使其完全融化，否则影响实验结果。
3、该产品与抗血清或高浓度多克隆抗体一起孵育时可能会出现非特异性条带，此时可降低该Western Blot Marker的上样量至2-5μl。
4、使用新配制的凝胶，及时更换电泳缓冲液和转膜液，以免影响实验结果。

操作步骤：
1、将产品取出后于室温放置融化。
2、温和地充分混匀，取5μl至上样孔中，进行SDS-PAGE电泳。
3、电泳完毕后将凝胶上蛋白转至NC或PVDF膜，依次孵育一抗、二抗。
4、孵育完毕并经充分洗涤后，将印迹膜与ECL工作液反应数分钟，使用X-光胶片曝光或化学发光成像。

实验图例

12%的聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳后转膜，化学发光法曝光结果。

储存条件：-20℃保存，避免反复冻融

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