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- 百奥莱博
- YT206-HOQ
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
716
- 英文名：
ARE Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
EMSA突变探针－ARE的序列如下：
5"-ACT GAG GGT GAC TCA ATA AAA TC-3"
3"-TGA CTC CCA CTG AGT TAT TTT AG-5"
EMSA突变探针－ARE中ARE的公认的位点发生了突变，从而使相应的转录因子无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和ARE的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和相应转录因子的结合的条带不会被抑制。参考下图。
一个典型的EMSA/Gel- Shift分析图
1. 阴性对照反应(标记探针)；
2. 常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；
3. 探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；
4. 突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5. Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。
注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。
储存条件：-20℃，有效期一年。
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文献和实验Shift Assay ) 凝胶迁移实验是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）中有不同迁移率的原理。当核转录因子与一条人工合成的特异的DNA或RNA结合后，其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA，从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。 发展: 从发展史来看,这项实验技术起初是用32P同位素标记人工合成的寡核苷酸形成探针,但是由于同位素的放射
用75％ 的酒精），开机。开机前，先掀起流动室和分选室的罩盖，开启电源，打开计算机并等计算机进入WINDOWS系统后，打开激光电源，运行FACSDiva软件，联机成功后，执行Fluidics startup命令。 然后从FACSDiva的sort菜单进入sort setup，选择合适的液流压力（high、 middle、low）。一般来说，100 μm的喷嘴选用Low，而70 μm的喷嘴选用middle。 2、打开breakoff window，点击显示窗上的液流开关，检查液流是否正好流入废液槽中间
1. 探针的标记：（1） 如下设置探针标记的反应体系：待标记探针 （1.75pmol/微升） 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer （10X） 1微升Nuclease-Free Water 5微升[γ-32P]ATP（3，000Ci/mmol at 10mCi/ml） 1微升T4 Polynucleotide Kinase （5-10u/微升） 1微升总体积 10微升按照上述反应体系依次加入各种试剂，加入同位素后，Vortex混匀，再加入T
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