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622
- 英文名:
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京促销DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京促销DNA寡核苷酸退火缓冲液(5X)价格
规格:1ml
英文名:Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
编号:YT483
本品是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火,而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,极易自身形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用百奥莱博的Annealing Buffer for DNA Oligos(5X),可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
使用本品操作非常简单,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)按照一定比例混合后,置于PCR仪上,约90分钟即可完成。如果一次退火反应体积为100微升,一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
使用说明:
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系:
Nuclease-Free Water——>40µl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)——>20µl
DNA oligo A (50µM)——>20µl
DNA oligo B (50µM)——>20µl
按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果所用的PCR仪没有热盖,滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 说明 |
| 1 | 95℃ | 2分钟 | 让oligo充分变性 |
| 2 | 每8秒下降0.1℃,降至25℃(注1) | 约90分钟 | 退火 |
| 3 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
注1:如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能,也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%,以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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·Factor Xa抑制剂(阿哌沙班)
编号:YT925
英文名称:Apixaban
规格:10mM×0.2ml|5mg|25mg
本品是一种高度选择性的,可逆的Factor Xa抑制剂,在人和兔子中Ki分别为0.08nM和0.17nM。
CAS:503612-47-3
分子式:C25H25N5O4
分子量:459.5
纯度:96.5%
结构式:
Apixaban是高度选择且有效作用于,人Factor Xa兔Factor Xa抑制剂,Ki分别为0.08nM和0.17nM。在体外,Apixaban作用于正常人血浆,延长人凝血时间,使凝血酶原时间(PT),改良凝血酶原时间(mPT),活化部分凝血活酶时间(APTT) 和HepTest增加一倍,所需的浓度(EC2x)分别为3.6μM、0.37μM、7.4μM和0.4μM,此外,在PT和APTT实验中,Apixaban最高效作用于人和兔血浆,而作用于大鼠和犬血浆则效果较低。
Apixaban作用于犬,具有优良的药代动力学特性,极低间隙(Cl:0.02L·kg-1·h-1),低体积分布 (Vdss:0.2L·kg-1)。此外,Apixaban也具有适度半衰期(T1/2:5.8小时)和良好的口服生物有效性(F:58%)。Apixaban作用于动静脉分流血栓形成(AVST),静脉血栓形成(VT)和电介导颈动脉血栓(ECAT)兔子模型,具有抗血血栓形成效果,EC50分别为270nM、110nM和70nM。
储存条件:-20℃,有效期12个月。
·GSK-3β抗体
编号:YT782
英文名称:anti-GSK-3β antibody
规格:>20次
本抗体是用经过适当修饰的人工合成的人GSK-3β中的一段多肽作为抗原制备而成的抗GSK-3β兔单克隆抗体。本抗体如果用于常规的Western检测,至少可以检测20次。
本GSK-3β抗体识别的是总GSK-3β(total GSK-3β),可以检测内源性的GSK-3β。未发现和其它激酶有交叉反应。
Glycogen synthase kinase-3,即糖原合成酶激酶-3,简称GSK-3,是一种广泛表达的serine/threonine蛋白激酶。GSK-3包括51kD的GSK-3α和46kD的GSK-3β,两者有85%的*基酸相似性。GSK-3最初被发现可以被胰岛素信号通路调控,可以磷酸化糖原合成酶(glycogen synthase)并使之失活。GSK-3是PI3 kinase/Akt信号通路的关键下游蛋白,Akt可以磷酸化GSK-3α的Ser21和GSK-3β的Ser9,并抑制它们的酶活性。这样在饮食诱导胰岛素分泌的情况下,胰岛素诱导Akt磷酸化,随后GSK-3β被Akt所磷酸化抑制,导致糖原合成酶磷酸化水平下降,糖原合成酶活性升高,糖原合成增加,从而降低血糖。GSK-3β在能量代谢、体型发育(body pattern development)和神经细胞发育过程中起重要作用。GSK-3β可以磷酸化β-catenin并调控Wnt信号通路,还可以调节cyclin D1的蛋白降解和细胞内定位。
产品组份:
GSK-3β抗体————20μl
Western一抗稀释液————20ml
抗体参数:
免疫原物种:人
免疫原:人工合成的人GSK-3β中的一段多肽
克隆性:单克隆
宿主:兔
用途:WB,IP,IHC
交叉反应性:人,小鼠,大鼠,猴
同种型:IgG
GSK-3β分子量:~46kD
推荐稀释比例:WB(1:1000),IP(1:50),IHC(1:100)
注意事项:
1. 在Western实验后,请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
3. 对于本抗体,Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜,如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验的能力,如果结合了那才是真正的参与转录的转炉银子, 有的入核后却不能和DNA结合,只能等着被降解! 其实总体而言大家做试验时都希望成功,但是EMSA试验技术的独特性和复杂性决定了,要想做成功EMSA试验,拿到阳性结果可总结为一句话: 把握整体,注意细节! 我觉的EMSA的整体性包括6大点:探针制备(设计,合成,标记,纯化,退火);个人实验设计(时间剃度浓度查阅文献等);核蛋白制备;浓度测定;EMSA操作;实验时竞争设计. 这六大点都是会直接影响到EMSA试验的成功
一、材料准备 4μL5X T4激酶缓冲液 5 μl [γ-32P] ATP(7000次/毫摩尔) 10 μl 水+寡核苷酸(200毫微克) 1 μl T4激酶 1. 37摄氏度1小时 2. 热失活,在75℃下10分钟。 3. 加入1 μl 糖原(20毫克/毫升),2 μl 4M乙酸铵,90 μl 的乙醇。 4. 重悬沉淀,26 μl 水,并加入26 μl 4M醋酸铵,110 μl 乙醇。 5. 重悬沉淀,在5 μl 的水混合。 二、实验
0.5mol/LHCl,混匀。加入1μl生物素标记探针水溶液(140fmol)和1μl32P探针(1.4fmol),2μlT4连 接(约0.1WeiSS单位,用5×连接缓冲液稀释)。5X连接缓冲液:250mmol/LTris-HCl, Ph7.5;500mmol/LNaCl;500mmol/LMgCl2;25mmol./LDTT;5mmol/LATTP;500μg/μlBSA。 不同寡核苷酸与底物反应的连接所需酶液度不同,OLA试验时,一定要小心滴定最适 酶浓度,提高连接温度(50℃)可扩加OLA的特异
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