北京无RNA酶水厂家

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括北京无RNA酶水厂家在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：北京无RNA酶水厂家
编号：WE0217
规格：100ml
英文名：RNase-Free Water
品牌：百奥莱博
产地：北京
本品为不含RNase的水，常用于RNA的提取纯化、RT-PCR等分子生物学实验。

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·高效热启动DNA聚合酶
编号：WE0123
英文名称：SuperStar DNA Polymerase
规格：500U|2500U
  本产品是一种采用最新封闭技术的Taq DNA Polymerase，适用于HotStart PCR。在70℃以下，酶的活性中心被完全封闭，有效抑制了聚合酶活性，并能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。在95℃条件下孵育5分钟后，酶的部分活性得以释放。随着热循环的不断进行，剩余的酶活会源源不断地释放出来，这就使得此酶克服了常规Taq酶容易出现平台期的弊端，其扩增效率大大提高。
  本品进行PCR扩增时，PCR产物3"末端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克隆。本产品具有扩增速度快、特异性好、稳定性好的特点，主要应用于对扩增产物要求量大的PCR和RT-PCR反应。

产品组成：

 

组份	500U	2500U
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	100μl	5×100μl
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50 μ l
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意： 可以在室温下配制反应液，最好将试剂置于冰上。引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	94℃	0.5-1 min	25-35个循环
退火	50-68℃	0.5-1 min
延伸	72℃	1 min
终延伸	72℃	10 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的SuperStar DNA Polymerase的延伸速率为1 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


北京无RNA酶水厂家关键词：WE0217,RNase-Free Water,无RNA酶水

WE0299 NC膜(0.22μM) Nitrocellulose Membrane(0.22μM)
YT572 乙酸激酶 Acetate Kinase (Crude Enzyme)
ALH191 荧光定量反转录PCR试剂盒(两步法) Two Steps SYBR Green qRT-PCR Kit
BTN60102 *霉素干粉 Chloramphenicol Powder
RFT155 PAGE预制胶(8-16%)
SY0226 RORβ-GFP报告基因质粒 RORβ GFP Reporter Plasmid
HR0959 线粒体膜通透性转换孔MTPT检测试剂盒 Mitochondrial membrane permeability transition pore MTPT detection kit
BTN130672 核糖核酸酶RNase If RNase If
SV0755 TseI限制性内切酶 TseI Restriction Endonuclease
SY0591 内质网红色荧光探针(活细胞) Endoplasmic Reticulum Red (TR Glibenclamide), for live-cell imaging
KFS345 抑制与产生超氧阴离子自由基测试盒(比色法)
SV0179 BsiEI限制性内切酶 BsiEI Restriction Endonuclease
SV1482 BL21 (DE3) E. coli 感受态细胞
BTN100864 电泳级丙*(代"烯")酰胺干粉型 acrylamide，electrophoresis grade，powder
YT065 PVDF膜活化浸润液 Soaking and Activation Buffer for PVDF Membrane
YT921 Bcl-2抑制剂(ABT-737) Bcl-2 Inhibitor
HR0141 线粒体蛋白提取试剂盒 Mitochondrial protein extraction kit
BTN130534 抗凝血酶Ⅲ(10mg/mL) Antithrombin III Solution
北京无RNA酶水厂家关键词：WE0217,RNase-Free Water,无RNA酶水


·抗GFP标签多克隆抗体
编号：WE0347
英文名称：Anti GFP-Tag Rabbit Polyclonal Antibody
规格：100μl
GFP或其突变体EGFP与目的蛋白融合表达常用于检测目的蛋白的表达和分布。该抗体特异识别GFP以及EGFP等一些突变体。

抗体类型：亲和纯化兔多克隆抗体IgG
免疫原：人工合成多肽
应用范围：WB(1：1000-5000)、ELISA(1：1000-20000)

·2×Babuddy MasterMix(含染料)
编号：WE0110
英文名称：2×Babuddy MasterMix(With Dye)
规格：1ml|5ml
  本品是由Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase、PCRBuffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，具有5"-3"DNA聚合酶活性和3"-5"外切核酸酶活性。经过改造的聚合酶其活性区域融合有一段聚合增强结构域，独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30s/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷，大大缩短了反应时间。
  本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20 kb。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。
  使用本产品扩增得到的PCR产物的3"端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。

产品特点：
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×Babuddy MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×Babuddy MasterMix含有Babuddy DNA Polymerase,2×PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400μM dNTP mix。

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
2×Babuddy MasterMix	10μl	25μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Reverse Primer，10μM	1μl	2.5μl	0.5μM
Template DNA	适量	适量	<250ng
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl

a．模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b．引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
退火	45-72℃	10-30 s
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase的扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 s-3 min
变性	98℃	5-10 s	25-35 个循环
延伸	72℃	2-4 kb/min
终延伸	72℃	5-10 min

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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