SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×) 蛋白质研究

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×) 蛋白质研究的品牌：百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×) 蛋白质研究
编号：WE0289
规格：5×2ml
英文名：SDS-PAGE Loading Buffer(non-Reducing，5×)
品牌：百奥莱博
产地：北京
  SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)是以*酚蓝为染料，5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液，应用于非还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。

注意事项：
1、加样前在室温或37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。
2、本品不含还原剂如巯基乙醇或DTT。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
1、将SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×)与蛋白样品按照1：4的比例混匀。
2、将蛋白样品置于沸水浴中加热3-5分钟。
3、待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于3000 rpm的条件离心30秒。
4、离心后，以取适量上清，直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内。进行常规电泳。

储存条件：-20℃

我公司的SDS-PAGE上样缓冲液(非还原，5×) 蛋白质研究，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·抗His标签鼠克隆抗体
编号：WE0336
英文名称：Anti His-Tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：100μl
该抗体可高度特异识别重组蛋白C末端或N末端和内部的六个连续组*酸标签，而不受邻近*基酸组成的影响，可用于检测各种表达载体表达的His-Tag融合蛋白。

抗体类型：鼠单克隆抗体IgG1
免疫原：人工合成(His)6多肽
应用范围：
WB(1：500-5000)
IF/IHC(1：50-200)
ELISA(1：200-20000)
Dot(1：500-5000)
IP(2µg - 5µg)

·酵母蛋白抽提试剂盒
编号：WE0263
英文名称：Yeast Proein Extraction Kit
规格：25次|100次
  本试剂盒用于从酵母细胞中快速，高效而温和地抽提可溶性蛋白。采用试剂处理，可以避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。使用方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏。本抽提试剂可用于提取啤酒酵母、裂殖酵母、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及革兰氏阳性菌的蛋白抽提。与传统方法相比，处理得到的提取液中可溶蛋白产量大，活性高，提取快速；提取液可以直接用于Ni-NTA、GST等亲和纯化。酵母蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
Yeast Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、提取液中含有去污剂，不宜使用受去污剂干扰的蛋白定量方法。
2、为了获得实验最佳效果，请根据实验调整最佳使用量。

使用方法：
1、请在蛋白抽提前取出实验所需Yeast Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、将酵母培养液3000×g，4℃，离心5分钟，收集菌体。
3、取适量Yeast Protein Extraction Reagent，抽提蛋白前2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
4、每50 mg酵母加入500μl 1×工作液，涡旋振荡或上下吸打使酵母充分重悬。
5、将细胞悬液置于冰上，孵育20分钟(每间隔5分钟轻微摇晃一下)。
6、～13400×g离心10分钟。
7、转移上清至新管中，进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。

储存条件：-20℃


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YT472 C端Myc标签融合蛋白质粒 C-Myc plasmid（with CMV promoter）
ALH157 细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒 Cells Apoptosis DNA Ladder Extraction Kit
BTN120520 大肠杆菌OrigamiB(DE3)化学感受态细胞 E.coli OrigamiB(DE3) Chemical Competent Cell
RFT013 2kb DNA ladder(100～2000bp)
SY0167 MEF2-GFP报告基因质粒 MEF2 GFP Reporter Plasmid
HR0475 Caspase 3抑制剂 Caspase 3 inhibitors
BTN120310 T7 RNA聚合酶 T7 RNA Polymerase
SV0581 PaeR7I限制性内切酶 PaeR7I Restriction Endonuclease
SY0530 硫*(代"酸")链霉素 Streptomycin Sulfate
KFS289 N-乙酰半胱*酸(抗氧化剂)(NAC) N-acetyl-L-cysteine
YT207 ARE凝胶迁移突变探针(10μM) ARE Mutation Probe For EMSA(10μM)
SV1401 链霉亲和素磁珠
BTN3130A 三合一RNA上样液(A型,6X) RNA Loading Buffer
YT004 酵母质粒小量抽提试剂盒 Yeast Plasmid Mini Preparation Kit
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·RIPA裂解液(中)
编号：WE0257
英文名称：RIPA Lysis Buffer(Medium)
规格：100ml
  RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产品。经RIPA裂解液(中)提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。
  RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodiu*(代"m") deoxycholate，0.1% SDS，以及sodiu*(代"m") orthovanadate，sodiu*(代"m") fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可以有效抑制蛋白降解。


注意事项：
1、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购，如:WE0276 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
3、建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如:WE0259 蛋白酶抑制剂混合物，WE0256 磷酸酶抑制剂混合物。
4、若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
5、对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。
6、对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500μl RIPA裂解液，以此类推。

使用方法：

一、细胞样品
贴壁细胞蛋白抽提
1、小心倾去贴壁细胞的培养液。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的PBS漂洗细胞。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Medium)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，试剂使用量请参考附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。

表1 贴壁细胞RIPA 裂解液使用量推荐表

细胞培养板类型或培养面积	RIPA 裂解液使用量
100 mm	500-1000μl
60 mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl /孔
24孔培养板	100-200μl /孔
96孔培养板	50-100μl /孔

4、将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

悬浮细胞蛋白提取
1、悬浮细胞，2,500×g离心5分钟，弃去上清。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟，弃去上清。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Medium)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，每5×106细胞加入约200-500μl RIPA Lysis Buffer(Medium)，吹打均匀。
4、冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

二、组织样品
1、取适当的RIPA Lysis Buffer(Medium)，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2、称量实验组织的重量，按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Medium)后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3、冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
4、14000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。

表2 蛋白裂解液性能、参数比较
 

目录号	WE0258	WE0257
名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)	SDS裂解液
裂解强度	强	中	温和	强
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1%脱氧胆酸*, 0.1% SDS	1% NP-40， 0.5%脱氧胆酸* , 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25%脱氧胆酸*	1%SDS
膜蛋白提取	很好	较好	一般	很好
胞浆蛋白提取	很好	很好	很好	很好
核蛋白提取	很好	较好	较好	很好
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，CO-IP	WB，CHIP

储存条件：2～8℃

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