cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)厂家价格

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北京百奥莱博专业生产销*(代"售")cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)厂家价格，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)厂家价格
编号：WE0234
规格：1ml|5ml
英文名：NGS Library Quantification Kit for Illumina
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本产品是采用染料法(SYBR Green I)对NGS建库后的产物进行实时荧光定量PCR(qPCR)。试剂盒提供了qPCR过程所需的反应混合液，DNA引物混合物、标准品以及样品稀释液，试剂体系完整，操作简单方便。反应混合物中所含的荧光染料SYBR Green I 可以与所有的双链DNA结合。本试剂盒使用的是一种经化学修饰的全新高效热启动聚合酶，酶的激活需在95℃下孵育10 min。该产品特异性强、扩增效率高，能够对构建的文库浓度进行快速准确的定量。
  ROX染料用于校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，一般用于ABI、Stratagene等公司的Real Time PCR扩增仪。不同仪器的激发光学系统有所不同，因此ROX染料的浓度必须与相应的荧光定量PCR仪相匹配。
  不需要ROX校正的仪器： Roche LightCycler 480，Roche LightCyler 96，Bio-radiCyler iQ，iQ5，CFX96等。
  需要Low ROX校正的仪器： ABI Prism7500/7500 Fast，QuantStudio® 3 System，QuantStudio® 5 System， QuantStudio® 6 Flex System，QuantStudio® 7 Flex System，ViiA 7 system， Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等。
  需要High ROX校正的仪器： ABI Prism7000/7300/7700/7900，Eppendorf，ABI Step One/Step One Plus等。

关于cfDNA文库定量试剂盒(Illumina平台)厂家价格的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·组织蛋白抽提试剂盒
编号：WE0260
英文名称：Tissue Protein Extraction Kit
规格：25次|100次
  本试剂盒应用于组织样本的总蛋白提取。提取蛋白之前可根据具体实验需要加入蛋白酶抑制剂、盐、还原剂、螯合剂等成分。使用该提取液提取的组织蛋白，可进行蛋白活性分析、免疫检测、蛋白纯化等下游操作，并可采用BCA、Bradford、Lowry法进行蛋白定量。试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物，可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。

试剂盒组成：

 

组份	25次	100次
Tissue Protein Extraction Reagent	25ml	100ml
Protease Inhibitor Cocktail	250μl	1ml

保存条件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品适用于提取心肌、骨骼肌、肾脏、前列腺、皮肤、结肠、肝脏等软组织。
2、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
3、使用本产品提取蛋白后，可采用BCA、Bradford、Lowry法进行蛋白定量。
4、为了获得实验最佳效果，请根据实验调整最佳使用量。

使用方法：
1、请在实验前取出Tissue Protein Extraction Reagent进行预冷。
2、取适量Tissue Protein Extraction Reagent，抽提蛋白2-3分钟按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail，即1×工作液。
3、1 g组织加入10ml 1×工作液匀浆处理(抽提试剂的使用量可根据组织不同而调整)。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
4、冰上孵育20分钟(冰上放置时间可根据组织不同而调整)。
5、10000×g 离心15-20分钟。
6、转移上清至新管中，进行下一步的蛋白含量测定、纯化及分析。

储存条件：-20℃


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·2×BaHF MasterMix(含染料)
编号：WE0114
英文名称：2×BaHF MasterMix(With Dye)
规格：5ml
  本品为由BaHF DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×，具有操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点，可最大限度地减少人为误差和污染。该产品所含的BaHF DNA Polymerase是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有5"-3"DNA聚合酶活性，5"-3"核酸外切酶活性和3"-5"核酸外切酶活性，在普通PCR条件下，与BaldStar Taq DNA Polymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰使该酶在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活需要在95℃下孵育10分钟，该条件可以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥最大功效，实现对目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于常规的PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。

产品组成：

组份	1ml	5ml
2×BaHF MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×BaHF MasterMix含有BaHF DNA Polymerase,3.4 mM MgCl2和 400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，活性无明显改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaHF MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	94℃	30 s	30-40 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaHF DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。


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·大片段Bst DNA聚合酶
编号：WE0236
英文名称：Bst DNA Polymerase, Large Fragment
规格：800U|4000U
  本品是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶，其基因来源于Bacillus stearothermophilus，并在原始序列的基础上进行了部分点突变。该蛋白 具有5"→3" DNA聚合酶活性，无5"→3"和3"→5"核酸外切酶活性，具有强链置换活性。应 用于DNA等温扩增(LAMP)、多重置换扩增(MDA)、全基因组扩增(WGA)、建 库测序等。

·Rosetta(DE3)感受态细胞
编号：WE0250
英文名称：Rosetta(DE3)Competent Cell
规格：100μl×10支
  本产品是采用进口Rosetta菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。Rosetta菌株是携带*霉素抗性质粒BL21的衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。

产品组成：

组份	0.1ml×10支
Rosetta(DE3)Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

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