北京真菌(酵母)专用蛋白酶抑制剂价格

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名称：北京真菌(酵母)专用蛋白酶抑制剂价格
编号：BTN130529
规格：1mL
英文名：Protease Inhibitor for Yeast
品牌：百奥莱博
产地：北京
本产品为酵母细胞蛋白酶抑制混合液，溶剂为DMSO。专门用于裂解各种酵母细胞时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止蛋白质降解。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2. 止蛋白质降解。本产品抑制谱广，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶及金属蛋白酶等各种蛋白酶活性。
3. 本产品为优化的酵母蛋白酶抑制剂混合溶液。与各种细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

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·His标签蛋白专用蛋白酶抑制剂
编号：BTN130530
英文名称：Protease Inhibitor for His-tagged Protein
规格：10mL
His-Ni亲和层析是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，纯化过程中，为防止各种蛋白酶降解重组蛋白，需要加入足够、特异的蛋白酶抑制剂。本产品即为优化的His标签蛋白蛋白酶抑制剂混合液。专门用于纯化His标签蛋白时，抑制各种内源和外源蛋白酶活性，防止重组表达蛋白质降解。本品抑制谱广，能特异性抑制丝*酸蛋白酶、半胱*酸蛋白酶、天门冬*酸蛋白酶、嗜热菌蛋白酶样蛋白酶和*基肽酶等各种蛋白酶活性。本产品为DMSO溶液。与各种细菌细胞裂解液兼容，在裂解液中加入1/100体积即可。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

·一站式GST标记蛋白质微量纯化套装
编号：BTN111116A
英文名称：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
规格：20次
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

 

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。


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HR0209 昆虫蛋白快速提取试剂盒(离心柱法) Insect protein rapid extraction kit (centrifugal column method)
BTN120642 一站式Blue Native PAGE电泳套装 One-Stop Blue Native PAGE Pack
YT466 C端EGFP标签融合蛋白质粒(绿色荧光蛋白) C-EGFP plasmid（with CMV promoter）
SY0364 10×Tris-Glycine Native电泳缓冲液 10×Tris-Glycine Native Running Buffer
KFS135 尼氏小体染色剂—甲**(代"胺")蓝
RFT007 300bp DNA ladder(300～5000bp)
SY0161 RBP-JK-GFP报告基因质粒 RBP-JK GFP Reporter Plasmid
BTN90904 膜结合DNA清除试剂盒 Membrane-Bound DNA Scavenger
WE0190 通用型柱式DNA提取试剂盒 Universal Genomic DNA Extraction Kit
SV0566 NruI-HF限制性内切酶 NruI-HF Restriction Endonuclease
ALH069 DNA/RNA/miRNA分离提取试剂盒 Tissue Cells DNA/RNA/microRNA  Extraction & Isolation Kit
BTN131083 Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒 Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
YT201 AP2凝胶迁移突变探针(1.75μM) AP2 Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
SV1391 RNase 污染检测试剂盒
HR0393 透析袋27mm，截留分子量25kd Dialysis bag 27mm, entrapped MW 25kd
BTN150802 棉蓝乳酚油染色液 Lactic Acid Phenol Cotton Blue Staining Solution
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·琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(柱式吸附)
编号：BTN60202
英文名称：Agarose gel DNA column Recovery Kit
规格：50次
本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA反应体系中(如PCR反应)回收DNA片段。试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅胶膜和独特的溶胶体系，或DNA反应体系中回收的DNA片段，回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。

产品特点：
1.高效，回收效率最高可达90%(跟片段大小和胶浓度等因素有关)。
2.快速，整个过程只需要十余分钟。
3. 回收DNA的范围为50bp－40Kb(但效率各不相同)。
4. 纯度高，本试剂盒回收的DNA可直接用于酶切、连接、PCR登等多种分子生物学实验。
5. 用途广，本试剂盒能回收单链、双链及环状DNA。
6. 储存方便，试剂盒可以在室温放置数月，不影响其质量。

试剂盒组成：

成分	规格
通用溶胶液	25ml
通用洗柱液	50ml
离心吸附柱	50套
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期为一年。

使用方法：
1. 对胶回收：切取含DNA片段的琼脂糖凝胶(100mg左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率)，放入一干净的1.5mL塑料离心管(自备)中，用移液枪头捣碎，按重量比为1：3到1：5的比例加入通用溶胶液(100mg琼脂糖凝胶需要加入300μL-500μL通用溶胶液)。
 PCR回收：直接在PCR反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液，混匀，然后跳过第2步、直接从第3步做起。如果PCR反应中使用了石蜡，需要预先去除。
2. 50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟)，其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。如果片段长度在300bp以下，建议不要加热，以免DNA变性，影响回收率。
3. 将离心管中的溶液转移到离心吸附柱中，套上液体收集管，静置3分钟。
 注意：静置有助于DNA与离心吸附柱的硅胶膜结合。若一次加不完，可分两次加入并离心。
4. 12000～15000g离心1分钟，倒掉收集管中的液体。
5. 加入0.7-0.8mL通用洗柱液于离心柱中，室温静置2分钟。
6. 12000～15000g离心1分钟，倒弃收集管中的废液。
7. 12000～15000g离心半分钟以去除离心柱中的残留液体。
8. 将离心柱置于一新的干净的塑料离心管(自备)中，加入30-100μl DNA洗脱液2.0于离心吸附柱硅胶膜的中央，静置3分钟。
9. 12000～15000g离心1分钟。
10.离心管底部所得溶液即为纯化的DNA溶液，可立即用于后续实验或者放-20℃长期保存。

注意事项：
1.电泳回收DNA时，电泳缓冲液可以为TAE、TBE或者DNA/RNA两用快速电泳液SuperBuffer-2。回收效果为SuperBuffer-2最好，TAE次之，TBE最差。详细见SuperBuffer-2产品介绍。
2. 通用洗柱液含有容易挥发物质，使用后一定要拧紧瓶盖，密闭保存。
3. 琼脂糖凝胶体积的大小与回收率成反比关系，即体积越大，越不利于回收，一次胶回收以使用100mg琼脂糖凝胶为宜。
4. 如果在五分钟内凝胶溶化不完全，可以适当的延长水浴时间以使胶充分溶化，否则DNA包裹在琼脂糖凝胶中，影响DNA的回收效率。
5.胶溶化后的液体转移到离心柱后，可以延长静置时间使DNA与膜充分结合，提高回收效率。
6. 洗脱DNA前的空甩很重要，其目的是去除膜上残留酒精，否则残留酒精会影响后续DNA反应。
7. 增大DNA洗脱液2.0使用量有利于回收，但要注意实际上样量与最终回收体积的关系，以便于计算回收率。DNA洗脱液2.0可以用TE或水替代，但回收率稍有降低。

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