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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
944
- 英文名:
Oligo(dT) Cellulose
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
常温运输,4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产销*(代"售")北京Oligo(dT)纤维素厂家,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京Oligo(dT)纤维素厂家
编号:BTN131231
规格:25mg
英文名:Oligo(dT) Cellulose
品牌:百奥莱博
产地:北京
本产品是共价交联的Oligo(dT)纤维素亲和基质,可用于分离纯化带有poly(A)结构的真核生物mRNA,本产品结合能力大于400 A260 U/g。
储存条件:常温运输,4℃保存、有效期两年。
北京Oligo(dT)纤维素厂家极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)
编号:BTN130646
英文名称:Uracil DNA Glycosylase
规格:500U
E.coli尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)催化尿嘧啶从含尿嘧啶的DNA上释放。UDG能有效地水解单链或双链DNA上的尿嘧啶,但不能从6碱基或更少的寡核苷酸上水解尿嘧啶。其反应原理图如下:

活性定义:1单位指每分钟催化60pmol尿嘧啶从含尿嘧啶的双链DNA上释放所需要的酶量。通过检测37℃条件下,30分钟从50μl含0.2μg DNA(10⁴~10⁵cpm/μg)的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。
产品应用:在37℃条件下,1单位UDG与0.1μg含尿嘧啶DNA温育10分钟后,此DNA不能再被DNA聚合酶复制。95℃加热10分钟可使该酶95%的活性丧失。由于95℃热处理后该酶仍有部分活性,建议加入尿嘧啶糖基化酶抑制剂来阻止产物DNA的降解,也可以立即用酚/*仿抽提反应产物。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
备注:UDG在较广的pH范围内均有活性,最适pH是8.0,不需要二价阳离子。活性受高离子强度(>200mM)所抑制。
·Cre重组酶
编号:BTN130665
英文名称:Cre Recombinase
规格:50U
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一个34bp序列,其两端是两个13bp的反向重复序列,中间是起定向作用的8bp间隔区。重组产物根据 loxP位点的位置和相对方向而不同,两个含单loxP 位点的DNA将被融合。两个正向重复 loxP位点间的DNA将以环状形式切割,而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。

产品用途:
➤ 两个loxP位点之间DNA的切割。
➤含loxP位点DNA分子的融合。
➤ loxP位点之间DNA序列的翻转。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| Cre重组酶,1000 U/mL | 50μl |
| 10× Reaction Buffer | 1ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
活性定义:1单位指在50μl反应体系,37℃条件下,30分钟使0.25μg的pLox2+对照DNA产生最大位点特异性重组所需要的酶量。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行*苄抗性平板筛选。
热灭火:70℃加热10分钟。
使用举例:
1.按下列组份配制反应液:
| DNA溶液 | - |
| 10×Reaction Buffer | 5μl |
| Cre重组酶 | 1μl(1U) |
| 超纯水 | Up to 50μL |
2.37℃孵育30分钟。
3.70℃孵育10分钟,灭活酶活。
注意事项:
1.建议进行琼脂糖凝胶电泳前,将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。
2.由于Cre重组酶反应是一个动态平衡过程,用loxP2+对照底物仅有20-30%发生重组。由于重组产物的量较少,故*化乙锭染色后呈现微弱条带,同时伴有底物染色强度相应减弱。
3.延长温育时间不会提高重组效率,相反,还可能导致大分子量重组产物的生成。
4.反应中增加Cre重组酶量将形成loxP依赖性Cre-DNA复合物,从而抑制重组反应。
北京Oligo(dT)纤维素厂家关键词:Oligo(dT) Cellulose,BTN131231,Oligo(dT)纤维素
·5-*-4-*-3-吲哚磷酸(BCIP)
编号:BTN100831
英文名称:5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate
规格:100mg
BCIP分子式为C8H4BrClNO4P·C7H9N,分子量为433.64,CAS号为6578-06-9。本产品为白色结晶,溶解度为20mg/mL。在碱性磷酸酯酶的催化下,BCIP会被水解产生强反应性的产物,该产物会和NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。NBT/BCIP用于蛋白印迹和免疫组化染色等实验。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
·柱式软体动物DNA提取试剂盒
编号:BTN101111
英文名称:Mollusc DNA column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是专门用于从各种软体动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于阳离子去垢剂CTAB在适当的离子强度条件下,特异地跟基因组DNA 结合形成沉淀,然后在用硅胶膜技术进行进一步纯化。
产品特点:
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物动物,包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2. 提取到的基因组DNA 完整性,其中最长可以到达长度一般在20-50kb。
3. DNA 纯净,OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
4. 操作简单,整个过程约30分钟。
5. 安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
6. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格便宜。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 50ml |
| 溶液B | 50ml |
| 溶液C | 100ml |
| RNase A(10mg/mL) | 150μl |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
1. 匀浆方法一:称取0.1-0.3g软体动物组织,转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA 会吸附在表面,影响得率。在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀,需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。进入第三步。
2. 匀浆方法二:将0.1-0.3g软体动物组织剪成小块,转移到10-15mL塑料管中(培养细菌那种离心管即可),加入1mL 65℃预热的溶液A,用Polytron 式匀浆机(剪切式匀浆机)匀浆1分钟左右。
3. 65℃保温5-30分钟,其间最好吹打混匀2-3次。
4.转移到新的1.5mL离心管中,12000~15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000~15000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的*仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000~15000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意:由于下一步要加1.5倍体积的溶液C,所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀,然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL 混合液后,室温放置5-10分钟。
13. 12000~15000g室温1分钟,弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品,可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中,重复第12-14 步的操作。
15. 将0.7mL 通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,12000~15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30-100μL DNA 洗脱液2.0。
19.室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为软体动物DNA溶液,可立即使用,也可长期保存在-20℃。
20.可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA(第二次洗脱的DNA一般有第一次的30%左右)。
北京Oligo(dT)纤维素厂家关键词:Oligo(dT) Cellulose,BTN131231,Oligo(dT)纤维素
·柱式粪便DNA提取试剂盒
编号:BTN80102
英文名称:Stool DNA column extraction kit
规格:50次
本试剂盒是动物粪便DNA提取试剂盒(BTN70601)的柱式升级产品,专门用于从各种动物粪便中快速提取高质量的DNA。
产品特点:
1. 操作更加简单快速,一个样品只需要十多分钟的时间。
2. DNA 更加纯净,OD260/280一般都在1.8以上,得到的DNA样品原液或稀释液可以直接用于PCR扩增。
3. 每次微量提取可以处理100-300mg左右的样品,能得到5μg左右DNA,片段长度在30 Kb左右。
4.可以同时提取到肠道上皮细胞和可能的肠道病原菌的DNA。
5. 试剂无毒无害,环保。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 25ml |
| 溶液B | 25ml |
| 溶液C | 50ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| DNA洗脱液2.0 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用方法:
1. 65℃预热溶液A,待其沉淀溶化后充分混匀,取0.5mL加入到1.5mL塑料离心管中并放置于65℃待用。
2. 称取 0.1-0.3 g的粪便,加入到含预热溶液A的离心管中,震荡器上剧烈震荡5-10分钟。如果是扩量操作,可以使用更多粪便和较大离心管。也可以将同一种粪便在较大离心管中震荡处理,然后再分到1.5mL离心管中。注意:不论使用大的还是小的离心管,一定要让管底的粪便震荡起来。
3. 将离心管置于65℃水浴中保温至少5分钟。
4. 12000~15000g室温离心3分钟,将上清转移到一新离心管中(上清液一般呈淡黄色或深棕色,实际颜色随样品而异,上清液的体积一般为300-400μL)。
5.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色或淡黄色混浊状。
6. 将离心管冰浴至少5分钟。
7. 12000~15000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL离心管中,上清液颜色将比第4 步得到的上清的颜色稍淡,体积在0.7mL左右。
注意:下面第8-第9 步的*仿抽提操作可以省略,直接进入第10 步,但DNA的产量会低50%左右,OD260/280在1.7-1.8。如果直接进入第10 步,则转移的溶液体积不要超过0.6mL,否则没有空间加溶液C。
8. 加入0.2mL的*仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。注意:一定要让管底的溶液震荡起来。
9. 12000~15000g室温离心3分钟,小心转移上清到新离心管中。说明:离心后两相交界面将有白色膜状物,其中有机相部分颜色较深,一般呈淡棕色。将上清转移到新的1.5mL离心管时,不要超过0.6mL,否则没有空间加溶液C。如果有多余的可以弃之不用。
10. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀。
11. 分两次上柱(即先转移一半的混合液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液)。
12. 加 0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
13. 如果有必要,可以再加0.3mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,12000~15000g室温离心半分钟,弃穿透液。增加一步洗涤能使最后得到的DNA的纯度稍有提高,但产量稍微有所降低。
14. 12000~15000g室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液会污染DNA。
15. 将离心吸附柱转移到一新的1.5mL塑料离心管中,加入50-100μl DNA洗脱液2.0。
16.室温放置离心吸附柱1-2分钟。
17. 12000~15000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即使用或存放于冰箱待用。
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文献和实验与rRNA,5SRNA,5.8SRNA和tRNA相比,大多数真核生物的mRNA在其3’端带有poly(A)尾巴,因此mRNA能用oligo(dT)-纤维素亲和层析法从细胞总RNA中分离。本文中介绍的方法是利用带有poly(A)尾巴的mRNA能与连在纤维素介质上的短链oligo(dT)形成稳定的RNA-DNA杂合链的原理。poly(A)+RNA能用oligo(dT)层析柱选择洗脱,也能分批洗脱,即批量层析的方法。详情请查看下列pdf文件:“oligo(dT)-纤维素层析法提取po
Selection of Poly(A)+ RNA by Oligo(dT)-Cellulose Chromatography Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, Australia David W
Synthesis of Radiolabeled, Subtracted cDNA Probes Using Oligo(dT) as a Primer
2. To the chilled microfuge tube, add: 0.1 M dithiothreitol 2.5 μl placental RNase inhibitor 200 units oligo(dT)12-18 10 μl 10x reverse transcriptase buffer 25 μl 20 mM solution of dGTP, dATP, and dTTP 10 μl 125 μM dCTP 10 μl 10 mCi/ml
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