随机引物法DNA探针标记试剂盒品牌

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产销*(代"售")随机引物法DNA探针标记试剂盒品牌，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：随机引物法DNA探针标记试剂盒品牌
编号：BTN90603A
规格：5次
英文名：Random Primer DNA Labeling Kit
品牌：百奥莱博
产地：北京
本试剂盒是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，可用下面的示意图表示：

本产品对Feinberg和Vogelstein经典方法进行了改良。

产品特点：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解。
3.快速，最快1小时即可完成标记反应。
4. 得到的DNA探针比活性高(如果是同位素，可以达到109cpm/μg DNA)，检测灵敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的，长度在100bp以上均可。
6. 得到的探针长度在200-400nt之间，可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中BTN90603A可用于各种同位素标记和其他任何非同位素标记，但需自备标记底物；BTN90603B和BTN90603C可分别用于生物素和地高*(代"辛")标记，不需自备标记底物。

试剂盒组成：

 

成分	规格
2×A型标记反应液(自备标记物型)	50μl(仅A型有)
2×B型标记反应液(生物素型)	50μl(仅B型有)
2×C型标记反应液(DIG型)	50μl(仅C型有)
dATP,2mM	10μL(仅A型有)
dTTP,2mM	10μL(仅A型有)
dGTP,2mM	10μL(仅A型有)
dCTP,2mM	10μL(仅A型有)
Klenow exo-聚合酶(2U/μL)	5μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：

成分	用量
模板DNA	50-150ng
2×标记反应液(ABC三种之一)	10μl
超纯水	补水到15μl

注意：非同位素标记物由于疏水性强，容易与常用的塑料离心管表面非特异性结合，所以一定要使用硅化的塑料离心管。模板DNA并非越多越好，因为模板会在杂交反应中跟标记的探针杂交，竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴5-10分钟，或在PCR仪上100℃加热5-10分钟使DNA模版充分变性，立即放冰上待用。注意：如果PCR仪器不能设置到100℃，99℃加热5分钟也可。
3.高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：

试剂盒类型	成分及用量
BTN90603A型	dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，浓度均为2mM) 自备的2mM dTTP/标记dUTP混合物(见注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶
BTN90603B型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水
BTN90603C型	1μl Klenow exo聚合酶 4μl超纯水

注：上表中的dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记的dUTP的总浓度为2mM(在20μL体系中混合液的终浓度为0.1mM，dTTP与生物素或DIG标记的dUTP的比例最好为65:35)。由于空间阻碍，并非标记生物素或DIG标记的dUTP越多灵敏度越高，一般dTTP与标记dUTP的比例在65：35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000Ci/mmol，浓度为好为10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温1-20小时。标记效率跟模版量和保温时间相关，具体见下表：

模版DNA用量	1小时后探针合成量	20小时后探针合成量
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1.35μg
100ng	350ng	1.65μg
300ng	750ng	2.2μg
1μg	1.3μg	2.6μg
3μg	1.6μng	2.6μg

6. 加1μl自备的0.5M EDTA(pH8.0)终止反应，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加热100℃ 5分钟使DNA探针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。
 注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，注意不要用酚抽提法纯化非同位素(生物素、DIG和其他等)标记的DNA探针，因为这些标记分子疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另购非同位素探针柱式纯化试剂盒)。对比活高的同位素探针，由于其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。

欲了解更多随机引物法DNA探针标记试剂盒品牌的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:

·Southern封堵液(NC专用)
编号：BTN120676
英文名称：Southern Blocking Buffer (NC)
规格：100mL
本产品为专门针对NC膜的核酸杂交封堵液，用于降低检测时的非特异性信号，降低背景，增强信噪比。经过反复优化配方，即开即用，方便快捷。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

·PCR专用LIC克隆套装
编号：BTN120402
英文名称：LIC Cloning Kit for PCR
规格：1μg
本产品就是基于LIC原理开发的即用型载体。LIC就是不依赖于连接的克隆技术(Ligation-Independent Cloning),它是继限制性内切酶切/连接酶克隆方法后出现的第二代DNA克隆技术，它效率高,尤其适用于大规模分子克隆，其原理如下：


产品特点：
1. 操作简单,一管式一步反应,只需加入插入片段即可,客户不需要购买任何额外的酶。
2.时间短,整个过程只要15分钟。
3.高效,比常用的AT克隆效率更高,阳性率接近于100%。
4. 克隆方向和位置精准和可控,适合表达型克隆工作。
5. 便于自动化,适合高通量克隆。
6.适用于长片段克隆。

产品组成：

成分	规格
LIC载体(50μg/μL)	1μg
溶液A	10μl
溶液B	150μl
阳性对照插入片段	8μl
说明书	1份

储存条件：-20℃运输及保存，有效期一年。

一. PCR引物设计,合成和PCR反应
1. 按常规方法设计PCR引物,只是必须在一条引物5´端再加上GGCGGCCGCGGTAC序列,在另一条引物5´端加上GGCGCCGGCGGTAC序列。此序列决定克隆的方向,如果不在乎方向,可以随机组合。
2. 所用引物最好为HPLC纯化获得。注意：如果购买本公司产品,免费合成LIC引物一对。
3. 按常规的方法进行PCR,最好使用高保真DNA聚合酶。
4. 按常规的胶回收的方法回收PCR片段。注意：必须去除残余的dNTP和PCR引物,否则会极大降低LIC效率。
5. 对PCR片段电泳定量,即电泳后通过肉眼比较PCR片段和DNA Marker的相对强度,通过DNA Marker条带的浓度(一般商品化的DNA Marker每条带的浓度都是已知的)推测出PCR片段的浓度。
二. PCR片段与载体退火
1.在纯化的2μL PCR产物中加入0.4μL溶液A、2μL载体(100ng)以及5μL溶液B,混合。
 注意：PCR产物跟载体的摩尔数比例最好是1：1。
2.室温放置5分钟。注意：保温时间长短很关键,不要轻易延长或缩短。
3.在PCR仪器上按75℃ 10分钟,然后放冰上或-20℃待用。
三.转化
1. 按常规方法进行转化。
2. 按菌落PCR方法筛选,可选用我公司的菌落PCR试剂盒(BTN50901)。进行快速筛选,需要T7和SP6 RNA聚合酶启动子引物。


随机引物法DNA探针标记试剂盒品牌关键词：Random Primer DNA Labeling Kit,BTN90603A,随机引物法DNA探针标记试剂盒


·丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")干粉(29:1)
编号：BTN130968
英文名称：Premixed Acr-Bis Powder
规格：100g
本产品为即用型丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺预混干粉(29:1)，用户可直接加入去离子水溶解即可得到丙*(代"烯")酰胺溶液，用于配制各种PAGE胶，如SDS-PAGE，Tricine-SDS-PAGE等。使用方便，避免了用户直接接触有毒的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺。

储存条件：常温运输及避光干燥保存，有效期一年。

·多聚甲醛-磷酸缓冲固定液
编号：BTN131282
英文名称：Polyoxymethylene PBS
规格：250mL
本产品是我司推出的专门固定组织和细胞的产品。固定的目的是使蛋白质等成分凝固，使组织结构或细胞形态更接近生活状态。 使细胞内的蛋白质、抗原等沉淀或固定，定位在细胞内原有位置，终止或减少外源性和内源 性分解酶的反应，防止组织因离体时间延长而发生细胞自溶，减少细胞可溶性蛋白质、脂肪和糖类物质的弥散、破坏与丢失。同时也可使组织硬化成形，便于后续的包埋、切片及染色。

4%多聚甲醛固定液是目前最常用的固定液之一。对多种组织都具有良好固定能力。多聚甲醛溶液主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成，pH为7.4，该固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定，是免疫组织化学和培养细胞固定中最常用的固定液之一，它能较好的保护组织和细胞的形态结构以及核酸。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．对于细胞样品，去除培养液后，按照每六孔板一个孔加入1 毫升固定液的比例，加入固定液。对于其它样品，加入免疫染色固定液的量都以充分盖住样品为准。通常室温固定10分钟即可。也可以4℃过夜。
2．对于组织样本固定液必须足量，一般是组织块总体积的10-50倍，固定时间视组织块大小而定，一般 48-72h，保证固定液充分渗入组织中。标本浸入固定液后要轻轻摇晃几下,防止标本贴在瓶壁上,影响固定效果。
3．继续后续操作。



随机引物法DNA探针标记试剂盒品牌关键词：Random Primer DNA Labeling Kit,BTN90603A,随机引物法DNA探针标记试剂盒

KFS247 核糖核酸酶A(100mg/ml) Rnase A；Ribonuclease A
RFT169 c-Myc标签抗体 Anti-c-Myc tag antibody
SY0273 水饱和酚 Water-Saturated Phenol
KFS047 kFluor350标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒 Immunol Fluorescence Staining Kit with kFlour350-Labeled Goat Anti-Mouse IgG
WE0302 定影粉 Fixing Powder
SV0851 Q5 热启动超保真 2X Master Mix
SY0759 BCIP/NBT显色试剂盒蓝紫色(IHC) BCIP/NBT Alkaline Phosphatase (AP) Substrate Kit For IHC
KFS392 活性氧(羟自由基)测试盒(比色法)
YT314 总抗氧化能力快速检测试剂盒(ABTS法) Total Antioxidant Capacity Assay Kit with a Rapid ABTS method
SV1566 p42 MAP 激酶（MAPK）
BTN80915B 超级杂交液(含50%甲酰胺) Super hybrid solution(with 50% formamide)
BTN130634 人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶 Apurinic-Apyrimidinic Endonuclease I

我公司正在火爆促销探针标记及检测系列产品，欢迎您的垂询选购随机引物法DNA探针标记试剂盒品牌。