北京Tth RecA蛋白厂家

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百奥莱博专业生产销*(代"售")北京Tth RecA蛋白厂家，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：北京Tth RecA蛋白厂家
品牌：百奥莱博
编号：BTN130662
规格：100μg
英文名：Tth RecA Protein
Tth RecA蛋白是一种分离自嗜热栖热菌的RecA同源蛋白。在最适温度65-75℃范围内，Tth RecA蛋白具有依赖于ssDNA的ATPase活性。由于具有极高的热稳定性，对于需要高温反应条件的分子生物学技术，如核酸扩增和测序来说，Tth RecA蛋白是一个理想的选择。

产品特点：
1．电镜分析DNA结构
2．D环突变
3．用RecA蛋白包被的探针来进行文库筛选
4．DNA靶位点的裂解

储存条件：低温运输、-20℃保存、有效期一年。

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D-天冬酰胺一水物 Chlorosulphonphenol S 2058-58-4或5794-24-1
BTN130584 小鼠抗T7标签单抗 Anti T7-Tag Mouse Mab
ARB12897 小鼠生长激素释放肽ghrelIn(GHRP-GhrelIn)定量分析 Mouse growth hormone releasing Peptide-ghrelin,ghrp-ghrelin ELISA KIT
N-羟yi基乙二*(代"胺")-N,N′,N′-三乙酸三* Chrome Blue K 207386-87-6
ARB12659 大鼠*脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)免费代测 Rat bromodeoxyuridine,brdu ELISA KIT
6055-19-2 环磷酰胺 Cyclophosphamide monohydrate
PY04-079  头孢菌素  1.5mg/支×10支  每支添加于95ml CIN-I培养基基础中  
ARB10525 人白细胞弹性蛋白酶(HLE)含量测试 Human leukocyte exastase,hle ELISA KIT
BTN130596 荧光染色细胞凋亡检测试剂盒 Fluorescent Staining Apoptosis Detection Kit
ARB12120 大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA代测服务 Rat soluble intercellular adhesion molecule 1,sicam-1 ELISA KIT
ARB10076 人CD30分子(CD30)Elisa定量检测 Human cluster of differentiation 30,cd30 ELISA KIT
ARB12671 大鼠雌二醇受体(ER)含量检测 Rat estradiol receptor,er ELISA KIT
ARB12127 大鼠戊糖素(PentosIdIne)含量分析 Rat pentosidine ELISA KIT
8007-47-4 加拿大树胶
2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸二*盐 2-Hydroxyquinoline 102783-51-7
ARB12832 小鼠弓形虫循环抗原(TCA)ELISA代测服务 
206752-36-5 Benzamidine  苄眯
HC0218 移液器
ARB11958 大鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)elisa测定使用说明书 Rat collagen type Ⅳ,col Ⅳ ELISA KIT
BTN130638 核酸内切酶IV Endonuclease IV
比布里希猩红 Eugenol 4196-99-0
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·柱式无内毒素质粒DNA提取试剂盒
编号：BTN60807
英文名称：Endotoxin-free plasmid DNA column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是整合我们公司柱式质粒DNA提取和菌体内毒素清除剂两产品而成。菌体内毒素清除剂是我们公司独家推出的产品，在质粒提取前就把细胞壁上的内毒素清除掉，彻底避免了目前通用的先提取DNA+内毒素混合物，再从中纯化质粒DNA的弊端。用本产品提取的质粒DNA，内毒素的污染浓度低，适合于转染等对内毒素的污染敏感的实验。

试剂盒特点：
1. 操作简单，只在经典的柱式质粒DNA提取前，增加菌体内毒素清除一步。
2. 去内毒素效果好，处理一次可以去除99%以上的内毒素。
3.质粒丢失少，产率只比柱式质粒DNA提取低5-10%，效果好于先提质粒DNA，再用液相内毒素清除剂处理的方法。
4. DNA可以直接用于转染等实验。

试剂盒组成：

 

成分	规格
菌体内毒素清除剂	200ml
溶液A	13ml
溶液B	13ml
RNase A(10mg/mL)	150μl
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。RNase A(10mg/mL)需要低温运输和保存。

使用方法：

一: 用菌体内毒素清除剂清除E.coli细胞壁上的内毒素。
1. 收集1.5-3mL E.coli饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，得到细菌沉淀。
2. 加入1mL本产品温和混匀后10,000-12000rpm离心1分钟，弃上清(含内毒素)。
3. 再重复上述操作3-4次，得到的菌体可以直接进入后续的质粒DNA提取步骤。
二：从无内毒素的E.coli中提取质粒DNA
1. 用1.5mL离心管收集1-4mL 过夜培养饱和菌液，12000rpm离心1分钟，弃上清，再短暂离心，吸弃残留液体。
2. 加入250μl溶液A，用枪头充分吹打使菌体重悬。
3. 加入250μl溶液B(如果有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀4-6次，看到溶液变粘即可。千万不要剧烈振荡。
4. 加入350μl溶液C，反复颠倒混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后冰上静止2-5分钟。注意：不要超过5分钟。
5.室温12000rpm离心10分钟，将上清液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6. 12000rpm离心1分钟，质粒DNA吸附到膜上，弃收集管中的废液。
7. 加入500μl的通用洗柱液，12000rpm离心1分钟，弃收集管中的废液。注意：我们公司的通用洗柱液是由乙醇和含NaCl的溶液组成，NaCl在其中的溶解度较低，放置一段时间后可能会产生NaCl沉淀。如果有沉淀，用前最好加热使之溶解并混匀后使用。
8. 重复上步操作1次。
9. 12000rpm离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响后续的电泳上样(DNA沉不到加样孔里去)和酶反应。
10. 将离心柱置于新的1.5mL离心管(自备)中，加入50μl DNA洗脱液2.0，室温放置2分钟。
11. 12000rpm离心1分钟，离心管底溶液即质粒DNA。
12. 由于天我们公司的吸附柱结合DNA能力较强，需要再加入50μl DNA洗脱液2.0到离心吸附柱中，室温放置2分钟，重复上步操作，往往还能洗脱下很多质粒DNA(相当于第一次洗脱的20-30%)。注意不要使用上步得到的含有DNA的洗脱液来进行第二次洗脱。
13. 将两次洗脱收集到的质粒DNA汇集即可立即使用或放冰箱保存。


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·DNA洗脱液
编号：BTN70705
规格：10mL

·His标记蛋白质微量纯化套装(含核酸酶和溶菌酶)
编号：BTN100102B
英文名称：One-Stop His-Tagged Protein Miniprep Pack(B)
规格：2mL
本产品基于His-Ni亲和层析的蛋白质纯化方法是目前分离纯化重组表达蛋白质的重要方法，本产品就是专门用于上述实验的一站式产品。

产品特点：
1.一站式套装，含所需的介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达His蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的His-标记蛋白。
3.变性和非变性条件均可使用，也适用于纯化包涵体中的His标记蛋白。
4. 每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供4mL浓度为50%的Ni-Agarose介质，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质。
6. 介质为CL-6B琼脂糖，含四个Ni离子螯合基团，比只有四个Ni离子螯合基团的Ni-IDA更有效。
7. 本介质可以反复使用多次。
试剂盒组成：

成份	规格
Ni-Agarose介质，50%	4mL
1M咪唑溶液	25mL
1M Tris-HCl pH7.9	25mL
5M NaCl溶液	25mL
溶菌酶(20 KU/mg)	30mg(A型无)
Benzonase(2U/μL)	20μL(A型无)
盐*(代"酸")胍	6g
尿素	20g
PMSF(10mg/mL)	0.5mL
亲和层析柱，6mL	1套
使用手册	1份

储存条件：常温运输和保存，但介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF需-20℃保存，有效期一年。

自备试剂：去离子水、20%乙醇、0.45μm滤膜

使用方法：
1．将Ni-Agarose介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据His蛋白产量决定，其最大载量为20-30mg His标记蛋白质/mL介质，请根据实验需要取适量的Ni-Agarose介质加入层析柱)。
2．用5倍柱体积(指填料的体积，下同)自备去离子水洗柱，共三次。
3．用5倍柱体积的新配结合液洗柱(配方如下，以10mL为例)，共三次：

成分	用量	在结合缓冲液中浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	0.2mL	20mM
1M咪唑溶液	0.1mL	10mM
5M NaCl溶液	1mL	500mM
自备去离子水	8.7mL	-

4．室温5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清，沉淀(约100mg)放冰上待用或放-80℃保存。最好用不加诱导物的菌液做对照样。
5．如果用本产品A型：加入1mL冰浴的结合液(1mL菌液需要用50μL结合液)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，但裂解物必须不粘稠，否则会堵塞层析柱。如果用本产品B型：加入1mL冰浴的含溶菌酶的结合液(先取20mL结合液，加入所有30mg溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，剩余的-20℃放置)，再加入25μL PMSF(10mg/mL)溶液和1μL Benzonase，冰上放置30分钟。
6．4℃下13000-15000g离心10分钟，去除残留细胞和细胞碎片以防堵柱，收集上清，留样做SDS-PAGE电泳对照。如果要纯化裂解液中可溶部分的His标记蛋白，则直接进入第7步；如果要纯化裂解液中包涵体(沉淀部分)中的His标记蛋白，则直接进入第12步。

A、纯化细胞裂解液中可溶部分的His标记蛋白
7．将上步得到的上清液上柱，让重力使裂解液自然流出。如要提高His标记蛋白与介质的结合效率，可用试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。
8．用10倍柱体积结合液洗柱(配方见上表)，收集并保存穿透液(含杂质或没被吸附的His标记蛋白，可做SDS-PAGE电泳的对照)。
9．如果用一步式洗脱法(适合已经找到最佳咪唑浓度的情况)，则直接用适量的新鲜配制的洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含His标记蛋白)。洗脱液的配方如下(以1mL体积和最佳咪唑浓度是500mM为例)：

成分	用量	在洗脱液中的浓度
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20mM
1M咪唑溶液	500μL	500mM
5M NaCl溶液	100μL	500mM
自备去离子水	380μL	-

10．如果用多步式洗脱(适合不知道最佳咪唑浓度或一步式洗脱杂质多的情况)，则按上表配制一系列咪唑浓度不同(如40、60、100、200、300和500mM)，其他成分浓度不变的洗液，按从低到高的顺序洗涤并收集样品，SDS-PAGE电泳检测His标记蛋白所在的区域。
11．洗脱后，依次使用10倍柱体积的去离子水洗涤柱子，再用3倍柱体积的20%乙醇平衡(乙醇要将填料浸没)，最后堵住层析柱下端的漏口，4℃保存待下次使用。

B、纯化包涵体中His标记蛋白
12．将第6步离心得到的包涵体沉淀重悬于1-3mL含盐*(代"酸")胍结合液中或1-3mL含尿素结合液中(建议优先使用尿素做变性剂，因为得到的洗脱液可以直接跑SDS-PAGE，而用盐*(代"酸")胍的洗脱液需先除盐后才能电泳)。冰浴1小时以使包涵体溶解，期间可轻柔摇晃几次。含变性剂的结合液配方如下(以10mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍结合液	含尿素结合液
1M Tri-HCl(pH7.9)	200μL	200μL
5M NaCl溶液	1mL	1mL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	5.7g	无
尿素(MW=60.1)	无	4.8g
自备去离子水	加水到10mL	加水到10mL

13．室温10000×g离心20分钟，沉淀为未溶解的包涵体。将上清(含溶解后的His标记蛋白)以自备的0.45μm滤膜过滤。
14．将滤过液上柱，后续纯化步骤同第7-第11步。只是所用结合液和洗脱液均含变性剂，含变性剂的洗脱液配方见下表(以1mL为例)：

成分	含盐*(代"酸")胍洗脱液	含尿素洗脱液
1M Tri-HCl(pH7.9)	20μL	20μL
1M咪唑溶液	500μL	500μL
5M　NaCl溶液	100μL	100μL
盐*(代"酸")胍(MW=95.6)	0.57g	无
尿素(MW=60.1)	无	0.48g
自备去离子水	补水到1mL	补水到1mL

注意事项：整个实验需避免含巯基乙醇、DTT和EDTA等成分。若洗脱液不能将His标记蛋白洗脱下来，可改用pH6.5- 4.5的pH递减的Tris-HCl洗脱。

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