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文献和实验)，在冻存前1d换液。 （2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×107／ml左右密度，离心，去上清。 （3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外。 （4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m悬液。 （5）旋好冻存管并仔细
Y27632 - - 10μM - DMSO - - - 10% 组织处理 1、将取样培养基中的组织转移到培养皿中，用 PBS 多次冲洗至液体变澄清。然后用无菌手术刀剔除脂肪及坏死组织。 2、将组织切割为 1–2 mm3 的小块，此步骤可以留存适量组织用于测序、免疫组化分析等。 3、将所有剩余的组织碎片收集到 30 ml 锥形管中，加入 8 ml 解离培养基，并在 37°C条件下解离 1-2h。每隔 20min，利用移液器机械吹打
胃癌三种细胞株（MGC-803、BGC-823、SGC-7901）的培养
含10%FBS的RPMI-1640培养液6ml,吹打混匀, 视细胞密度以1:2或1:3分瓶培养,当细胞长满培养瓶且形成致密单层时即可再传代。2） 细胞冻存：A取在培养瓶内已经生长2－3天形成单层的细胞，最好在冻存前一天换液，以保证细胞处于良好的营养状态。B 用胰蛋白酶消化细胞，计数，1000 rpm/分钟，离心10分钟。C 弃去上清，用配好的冻存培养基重新悬浮细胞并配成浓度为106 细胞/ ml的细胞悬液。D 用吸管轻轻吹打使细胞均匀，按1 ml的量分装入无菌冻存管内。E 然后将标记好的冻存管
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