SDS-PAGE Tricine蛋白上样缓冲液2×(变性)

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖SDS-PAGE Tricine蛋白上样缓冲液2×(变性) 免疫检测在内的细胞生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：SDS-PAGE Tricine蛋白上样缓冲液2×(变性) 免疫检测
编号：ZN1875
规格：1ml×6
产品保存：-20℃保存，一年有效
产品说明：SDS-PAGE Tricine 蛋白上样缓冲液 2×,是一种以考马斯亮蓝 G-250 为染料的2倍浓液的蛋白上样缓冲液，试剂中含有 SDS，甘油，考马斯亮蓝 G-250，Tris-HCL缓冲液等，可用于常规的多肽和小蛋白的SDS－PAGE 变性蛋白样品上样。
使用方法：
1.按照1体积蛋白样品加入1体积蛋白上样缓冲液即1：1的比例，混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(2×)。经 100℃水浴变性3-5分钟后即可上样，电泳。
2.通常电泳到当考马斯亮蓝G-250染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
注意事项：
1．刚从冷冻保存中拿出来平衡至室温溶解后，可能会出现 SDS的沉淀，建议可用温水水浴中使其溶解。
2．为了您的安全和健康，请戴一次性手套在通风厨内操作。

更多有关SDS-PAGE Tricine蛋白上样缓冲液2×(变性) 免疫检测的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
ARB11858 人糖皮质激素受体α(GR-α)酶标法分析 Human glucocorticoid receptor-α,gr-α ELISA KIT
9003-99-0 Peroxidase(POD)  辣根过氧化物酶
ARB12486 大鼠总抗氧化能力(T-AOC)Elisa定量检测 
β-甘油磷酸二*五水物 Ammonium oxalate monohydrate 13408-09-8
羟丙基纤维素 Sodium ammonium phosphate 9004-64-2
*甲基树脂 β- NADP
EDTA.2K抗凝剂(10×)   100ml
硫*(代"酸")铝 PMMA 7784-31-8
ARB11483 人胰淀粉酶(PAMY)含量测试 Human pancreatic amylase,pamy ELISA KIT
红细胞裂解液 RBC Lysis Buffer 10× 100ml|500ml
ARB10299 人不耐热肠毒素B亚单位(LTB)含量检测 Human heat-labile enterotoxin b subunit,ltb ELISA KIT
4-(2-吡*(代"啶")偶氮)间*二酚*盐 Butyl-PBD 16593-81-0
5625-37-6 PIPES 哌*(代"嗪")-1,4-二乙磺酸
ARB11538 人高铁血红蛋白(MHB)Elisa定量检测 Human methemoglobin,mhb ELISA KIT
32986-56-4 Tobramycin 托普霉素/妥布霉素
ARB12620 大鼠维生素A(VA)尿液中含量检测 Rat vitamin a,va ELISA KIT
pH标准缓冲溶液(pH=9.18)   50ml|100ml
2,4,6-三*-3-羟基*甲*(代"酸") BCP 14348-40-4
E0619 抗凝裂解马血
ARB13192 小鼠胰淀素(AmylIn)代做ELISA实验 Mouse amylin ELISA KIT
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·DAB显色试剂盒(黄)×20
编号：ZN1968
规格：1盒
试剂盒中的内容及包装规格:
显色剂 A：DAB×20倍浓缩液,3ml。
显色剂 B：H2O2×20倍浓缩液,3ml。
显色剂 C：TBS×20倍浓缩缓冲液，3ml。
产品保存条件：-20℃冷冻保存一年。
DAB 是过氧化物酶最重要的显色剂之一。显色呈鲜艳的棕黄色，可用于免疫组化及各种斑点检查法。本试剂盒采用液体性滴瓶包装，使用方便，并且减少了接触有潜在毒性的DAB。
使用方法：
1．在过氧化物酶的检测完成以后，TBS 或 PBS 充分洗涤，一般 5分钟×4次。
2．按1ml蒸馏水加显色剂 A，B，C各1滴，混匀。加至标本上。一般显色时间为1－10分钟，请在显微镜下观察显色情况，若无背景出现则可继续显色。若显色过快，可适当降低 DAB 配置浓度(1.5ml 或者 2ml 蒸馏水加显色剂 A，B，C 各１滴)。若显色过慢，可适当提高DAB配置浓度(2ml蒸馏水加显色剂 A，B，C各3滴)
3．蒸馏水充分洗涤以终止反应。必要时 Mayor’s 苏木素复染 1-2分钟左右。水洗。
4．脱水，透明，中性树胶封片，显微镜观察。


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·IBSP mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0695
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：rat
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.IBSP mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
IBSP的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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