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- 百奥莱博
- ZN0205-QDO
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
410
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
4℃
特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")Cathepsin D mRNA原位杂交试剂盒批发，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。
北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应Cathepsin D mRNA原位杂交试剂盒批发，产品信息：
类别：基因结构和功能
| 产品名 | 产品编号 | 包装规格 |
| Cathepsin D mRNA原位杂交试剂盒 | ZN0205 | 100T |
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
编号：ZN0205
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Cathepsin D mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Cathepsin的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。
Cathepsin D mRNA原位杂交试剂盒批发专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司
关键词：ZN0205,百奥莱博,Cathepsin D mRNA原位杂交试剂盒
我公司位于北京市海淀区，是一家专业从事生化试剂、分子生物学试剂、实验耗材研发、销*(代"售")、服务为一体的生物科技公司，公司主要经营的进口品牌包括Sigma,Invitrogen,Roche,Abcam,BD, R&D,GE,Amresco,Merck等；产品涉及化工原料、生化试剂、分子克隆相关试剂、细胞培养及检测常用试剂、实验室常用耗材等。百奥莱博秉承博采众长、诚信为本、德行天下的宗旨服务于客户。公司合作单位及客户包括各大医院、科研机构、大专院校、制药单位、医学检验单位、卫生防疫、生物技术公司、食品单位等诸多领域，正逐步成长为一流的生化试剂和耗材供应商。 我们将一如既往的为您提供优质的产品和完善的售后服务。
关于Cathepsin D mRNA原位杂交试剂盒批发的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
| 编号 | 类别 | 名称 |
| ZN1751:重组蛋白 | 小鼠CX3CL1/Fractalkine重组蛋白 | |
| ZN0263:基因结构和功能 | CD90 mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1680:重组蛋白 | 人MMP3重组蛋白 | |
| ZN0212:基因结构和功能 | CB1/CNR1 mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN0626:基因结构和功能 | H-ras mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1700:重组蛋白 | 人Pleiotrophin/PTN重组蛋白 | |
| ZN0063:基因结构和功能 | Annexin A1 mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN0424:基因结构和功能 | E-Cadherin mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN0890:基因结构和功能 | Megsin mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1848:免疫检测 | 浓缩型免疫组化试剂盒(DyLight 488-SABC)(小鼠IgM) | |
| ZN1402:基因结构和功能 | TLR15 mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1565:重组蛋白 | 人BAFFR重组蛋白 | |
| ZN1594:重组蛋白 | 人CD51/IntavB3重组蛋白 | |
| ZN0705:基因结构和功能 | IGF-1R mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1994:二抗 | TRITC标记小鼠抗人IgG(H+L) | Mouse Anti-Hμman IgG(H+L)Secondary Antibody,TRITC Conjugate |
| ZN1433:基因结构和功能 | Trk B mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN0463:基因结构和功能 | EPHA5 mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1753:重组蛋白 | 小鼠CXCL10重组蛋白 | |
| ZN1745:重组蛋白 | 小鼠CD31重组蛋白 | |
| ZN1233:基因结构和功能 | RPA1 mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1557:重组蛋白 | 人AnnexinIV/Annexin A4重组蛋白 | |
| ZN1045:基因结构和功能 | Opioid Receptor/mu mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1445:基因结构和功能 | TSARG3 mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN0915:基因结构和功能 | MMP-8 mRNA原位杂交试剂盒 | |
| ZN1793:重组蛋白 | 小鼠sTNFR1重组蛋白 |
北京百莱博科技有限公司专业生产基因结构和功能产品，欢迎来电咨询选购Cathepsin D mRNA原位杂交试剂盒批发。
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文献和实验Enzyme Analysis: Cathepsin D as an Example
In enzyme analysis, capillary electrophoresis (CE) offers the ease of product separation from the substrate, with the ability to use expensive reagents in microvolumes. In CE, enzymes can be measured either as mass (when they are present
组织蛋白酶 cathepsin 在各种动物组织的细胞内（特别是溶酶体部分）发现的一类蛋白酶。此名源自希腊语的“消化”，为威尔斯达特（ R． Willstā atter， 1929）命名的。来源于同一种类组织细胞的也是由组织蛋白酶 A． B． C． D． E等多种酶组成。可以根据所作用的代表性底物的种类进行分类，但似乎各自还有数种同工酶。组织蛋白酶 A的代表性底物是 N-苄氧基羰基 -L-谷酰胺 -L-苯丙氨酸，最适 pH约 5.5（ 3— 6），可能是一种羧肽酶，可为二异丙基磷氟酸
skybjp123 各位大哥大嫂，小弟最近在找寻 cathepsin K B L S 的相关转录因子，不知道有哪些呀？哪位牛人可否赐教，谢谢啦～～还有就是sp1是什么？兔子的sp1的基因序列怎么查不到啊？也请赐教～～谢谢～～ skybjp123 另外还有就是：转录因子是怎么测定含量的？用荧光定量PCR技术可以吗？可信吗？ happytears 1、转录因子可以先用相关软件预测，如TFbind
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