敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅱ(AP)打折促销

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅱ(AP)打折促销，产品信息：

类别：探针标记及检测

产品名	产品编号	包装规格
敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅱ(AP)	ZN1521	100T

编号：ZN1521

品牌：百奥莱博

产地：国产|进口

保存：置4℃。

工作量：100 张切片。

有效期：一年。

所谓原位杂交是指借助于核酸分子杂交的方法，在显微镜水平检测和定位特异的核苷酸片段。现在原位杂交已成为在分子水平研究肿瘤和遗传性疾病的发生，发展和调控等根本性问题的有力工具，其作用是免疫组化所无法代替的。具有敏感性特高，操作简便和结果准确的优点。该试剂盒分为两种，一种为过氧化物酶检测，一种为碱性磷酸酶检测系统。 用于 mRNA的杂交。仅适于地高*(代"辛")高效标记的寡核苷酸探针，不推荐使用每个探针分子仅标记一个地高*(代"辛")的寡核苷酸探针。

如果使用cDNA探针，应在杂交之前变性探针。

试剂盒中内容：

1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；

2．预杂交液 2ml；

3．寡核苷酸探针杂交稀释液 2ml；

4．封闭液 5ml;

5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;

6.SABC-AP 5ml

7．BCIP/NBT0.5ml

8．核固红6ml

9．水溶性封片剂 6ml

用户自备试剂：原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油

缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,0.5M TBS)

一．细胞和冰冻切片

准备工作：缓冲液的配备

3%柠檬酸——100ml 蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7·H2O)3g,PH2.0 左右。

2×SSC——1000ml 蒸馏水中加*化* 17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3·2H2O，分子量 294)8.8g。

0.5×SSC——300ml 蒸馏水加 100ml 2×SSC 即可。

0.2×SSC——270ml 蒸馏水加 30ml 2×SSC 即可。

20%甘油——20ml 甘油加 80ml 蒸馏水即可。

0.5 M TBS——1000ml 蒸馏水加*化* 30g,TRIS 1.2g 纯乙酸 0.4-0.5ml,PH7.2-7.6。

0.01 M TBS(PH9.0-9.5)配法：1000ml 蒸溜水中加 NaCl 9g,Tris 1.2g

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入 0.1%的DEPC 处理，以抑制 RNA酶对 mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或 APES。切片厚度 10-20μM。

2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和 5%的CO2，所用培养基为Dulbecco 基础培养基。细胞长好后 0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.4)，含有 1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存 2 周以上。

4．暴露 mRNA 核酸片段：切片上滴加 3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加 2 滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化 5—120 秒钟。有时也可以不消化。0.5M TBS洗3次×5

分钟。蒸馏水洗1次。

5.预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加 20%甘油 20ml 以保持湿度。 按每张切片 20μl加预杂交液。恒温箱 37—40℃2—4 小时。吸取多余液体，不洗。

6．杂交——用杂交稀释液 稀释地高*(代"辛")标记的寡核苷酸探针，浓度一般 0.5-2μg/ml。按每张切片加 20μ ι 杂交液。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭掉后，盖在切片上。恒温箱 37—40℃杂交过夜。

7．杂交后洗涤：去掉盖玻片，30—37℃左右水温的2×SSC洗涤 5分钟×2次；0.5×SSC洗涤15分钟×1次；0.2×SSC洗涤 15分钟×1次。必要时可重复 0.2×SSC洗涤 1次。

8．滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。

9．滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃60分钟或室温 120分钟。0.5M TBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

10.滴加 SABC—AP：37℃30分钟。0.5M TBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

11.BCIP/NBT 显色：BCIP/NBT(×20)按 1：20的比例用 0.01M TBS(PH9.5)稀释，混匀。显色液加至标本上。一般 30—37℃显色 20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。充分水洗。

12.必要时核固红复染 5-15分钟，水洗。

13.水溶性封片剂封片。

二．石蜡切片

如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.4)，含有 1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过 4mm的小块，固定 1 小时即可，较大的标本固定不要超过 2 小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间一定不要超过 1 小时。

1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度 6-8μm。

2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或 APES。

3．石蜡切片经常规脱蜡至水。

4．暴露 mRNA 核酸片段：切片上滴加 3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加 2 滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化 3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如 10分钟，20分钟，30分钟，以找到最佳的消化时间。0.5M TBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

其余步骤和冰冻切片 6-13 步相同。

结果观察：

阳性细胞胞浆着色呈紫蓝色。

注意事项：

如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。有其它明显的非特异性染色现象时，可以用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—5倍。

敏感性加强型原位杂交检测试剂盒Ⅱ(AP)打折促销专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
ZN0855:基因结构和功能	LRIG2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1780:重组蛋白	小鼠LOX-1重组蛋白
ZN0085:基因结构和功能	AQP4 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1700:重组蛋白	人Pleiotrophin/PTN重组蛋白
ZN1245:基因结构和功能	S100A4 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0308:基因结构和功能	Collagen II mRNA原位杂交试剂盒
ZN0983:基因结构和功能	NGFR P75 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1647:重组蛋白	人IL10重组蛋白
ZN1315:基因结构和功能	sredf1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0142:基因结构和功能	BMPR-1β mRNA原位杂交试剂盒
ZN0441:基因结构和功能	EFNB2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1271:基因结构和功能	SHH mRNA原位杂交试剂盒
ZN0751:基因结构和功能	Integrin-α4/ITGA4 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1590:重组蛋白	人CD34重组蛋白
ZN1330:基因结构和功能	STAT6 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1196:基因结构和功能	PTPRS mRNA原位杂交试剂盒
ZN0726:基因结构和功能	IL17A mRNA原位杂交试剂盒
ZN1305:基因结构和功能	SPAR C mRNA原位杂交试剂盒
ZN1821:免疫检测	即用型免疫组化试剂盒(SABC-AP)(兔IgG)
ZN1407:基因结构和功能	TLR8 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0296:基因结构和功能	Claudin-6 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0247:基因结构和功能	CD44V10 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0461:基因结构和功能	EphA2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1808:重组蛋白	大鼠IL1B重组蛋白
ZN1905:免疫检测	BSA PBS缓冲系统封闭液

 

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