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一年
北京百奥莱博科技有限公司
4℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测,我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测
编号:ZN1922
规格:100ml
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
产品保存:4℃保存,一年有效
产品说明:增强型蛋白印迹膜再生液能够安全高效地从硝酸纤维素膜和 PVDF 膜上去除一抗和二抗,且不会破坏抗原,从而再次检测化学发光的免疫印迹。与重新跑一个SDS-PAGE 胶比较,不仅省时省力,而且可以消除重新上样而带来的误差,使可比性更强。
产品特点:
1.不需重新制胶电泳
2.节省珍贵样品,在同一张膜上使用相同的样品重新检测
3.高效,去除效果远优于自制缓冲液
4.温和配方,在抗体剥离及重新检测时不会对靶蛋白造成伤害
5.不含硫醇,无刺鼻气味
产品应用:
1.可重复使用硝酸纤维素膜或 PVDF 膜,通过不同的一抗检测不同的标靶
2.可重新检测印迹,改正或优化初次实验中无效的抗体浓度
注意事项:
1.刚从冷冻保存中拿出来会出现 SDS的沉淀,建议温水溶解再使用。
2.建议先检测表达量较低的目的蛋白,用再生液处理后检测表达量高的蛋白。
3.本品适用于 NC 膜和 PVDF 膜,推荐使用 PVDF 膜,效果更佳。
4.本产品适用于 HRP 标记的二抗,且用化学发光法检测的印迹膜。
需要材料:
1.化学发光底物
2.用含 0.05%Tween-20的TBS 或 PBS
3.用于第一次和第二次蛋白质印迹实验的一抗和二抗
4.胶片,化学发光成像仪
使用方法:
注:膜可以 4℃保存在 PBS 或 TBS 中,直到可以进行剥离程序。
1.将再生液用温水溶解或室温平衡至溶解。
2.用 TBS-T 或 PBS-T 将膜洗10分钟×3次。
3.将印迹膜放入再生液中,室温孵育20-30分钟。使用足够的体积以确保印迹膜完全润湿(对于8×10cm 印迹需要约 20mL)。
注意:优化孵化时间和温度对于获得最佳结果是必不可少的。对于一些抗体,室温孵育就足够了。
然而,高亲和力抗体可能需要再温育5至10分钟。
4.用 TBS-T或 PBS-T将膜洗10分钟×3次。
5.按如下方法检测:
A.完整去除二抗的测试:将膜进行发光检测,如果 5分钟内未检测到信号,则二抗已经成功地从抗原或一抗中去除。
B.完整去除一抗的测试:用 HRP 标记的二抗孵育膜,然后用洗涤缓冲液洗涤。孵育新的一抗和二抗,进行发光检测,如果 5分钟内没有检测到信号,则已经成功地将一抗从抗原中除去。
6.如果在步骤 5 中检测到信号,则返回步骤 2,再剥离 5-15分钟。一些抗原/抗体系统需要更高的温度或更长的孵育时间来完全去除它们。优化剥离时间和温度以确保完全去除抗体,同时防止对抗原的损伤。
7.确定膜被适当剥离后,可以进行第二次免疫印迹实验。
注意:1.印迹可以剥离和重复检测多次,但可能需要更长的曝光时间或更灵敏的化学发光底物。
如果抗原在再生液中变得不稳定,随后的反应可能导致信号降低。
2.剥离后建议重新封闭印记膜。
更多有关增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测的价格及使用说明等,请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询,我公司还销*(代"售")以下产品:
BL0769 的盒子
小分子量蛋白质标准 Tylosin tartrate
ARB14194 山羊白细胞介素1β(IL-1β)定量分析
对羟基*甲*(代"酸")乙酯 9,10-Phenanthrenequinone 120-47-8
Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH8.5) 100ml
9039-53-6 尿激酶 Urolinase
藜芦醇 (+)-Catechin hydrate 93-03-8
F030837 BIOTIN标记山羊抗人IgG FC抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC*BIOTIN
PY01-054 聚乙稀吡*(代"咯")烷酮K30 进分 250克
羟基脲 AgDDTC 127-07-1
M0104 化学发光底物
ARB13062 小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)酶联免疫定量检测 Mouse pituitary adenylate cyclase activating polyPeptide,pacap ELISA KIT
增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测关键词:百奥莱博,ZN1922,增强型蛋白印迹膜再生液
ARB11469 人胰岛素样生长因子1(IGF-1)定量分析 Human insulin-like growth factors 1,igf-1 ELISA KIT
ARB11332 人胎儿血红蛋白(HBF)ELISA检测服务 Human anti-cytomegalovirus igM antibody,anti-cmv igM ELISA KIT
高峰α-淀粉酶 Sephadex G-150 9001-19-8
ARB10033 人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶免分析 Human hydroxylysine,hyl ELISA KIT
PY02-210 胰-亚硫*(代"酸")盐-环丝*酸琼脂基础 250克
BL0820 HRP标记兔抗山羊IgG抗体
BL0632 Q-琼脂糖凝胶HP Q Sepharose HP
ARB11810 人鼻病毒IgM(RhV-IgM)含量检测
ARB12250 大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)检测服务 Rat angiotension Ⅰ,ang-Ⅰ ELISA KIT
D-葡萄糖醛酸内酯 DL-Serine 32449-92-6
BL0777 基底胶9.6mg/ml
DN0101 小量全血基因组DNA快速提取试剂盒(溶液型)
尿酸(UA)检测试剂盒(磷钨酸微板法) 100T
521-31-3 Luminol 鲁米诺
ARB13136 小鼠前列环素(PGI2)ELISA检测服务
PY06-016 霉菌及酵母菌计数显色培养基 1000ml,用于霉菌和酵母菌快速分离、鉴别与计数
F030703 BIOTIN标记小鼠抗乙肝表面抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBsAg*BIOTIN
ARB12039 大鼠一氧化*(代"氮")合成酶(NOS)Elisa分析 Rat nitric oxide synthase,nos ELISA KIT
ARB12516 大鼠热休克蛋白20(HSP-20)免费代测 Rat heat shock protein 20,hsp-20 ELISA KIT
BTN131083 Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒 Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
ARB11576 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/GelAtInAse B)含量分析 Human matrix metalloproteinase 9/gelatinase b,mmp-9 ELISA KIT
增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测关键词:百奥莱博,ZN1922,增强型蛋白印迹膜再生液
·Fig4 mRNA原位杂交试剂盒
编号:ZN0519
规格:100T
基本信息:
保存条件:4℃保存一年
工作量:100张切片。
有效期:一年。
适用种属:mouse
标记方式:3’—尾段标记
试剂盒中内容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.Fig4 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂:
原位杂交专用盖玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一.培养细胞和冰冻切片
准备工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g,柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛"):37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲*透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖*酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察:
Fig4的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项:
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
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