增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产销*(代"售")增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测，我公司供应的细胞生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测
编号：ZN1922
规格：100ml
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
产品保存：4℃保存，一年有效
产品说明：增强型蛋白印迹膜再生液能够安全高效地从硝酸纤维素膜和 PVDF 膜上去除一抗和二抗，且不会破坏抗原，从而再次检测化学发光的免疫印迹。与重新跑一个SDS-PAGE 胶比较，不仅省时省力，而且可以消除重新上样而带来的误差，使可比性更强。
产品特点：
1.不需重新制胶电泳
2.节省珍贵样品，在同一张膜上使用相同的样品重新检测
3.高效，去除效果远优于自制缓冲液
4.温和配方，在抗体剥离及重新检测时不会对靶蛋白造成伤害
5.不含硫醇，无刺鼻气味
产品应用：
1.可重复使用硝酸纤维素膜或 PVDF 膜，通过不同的一抗检测不同的标靶
2.可重新检测印迹，改正或优化初次实验中无效的抗体浓度
注意事项：
1.刚从冷冻保存中拿出来会出现 SDS的沉淀，建议温水溶解再使用。
2.建议先检测表达量较低的目的蛋白，用再生液处理后检测表达量高的蛋白。
3.本品适用于 NC 膜和 PVDF 膜，推荐使用 PVDF 膜，效果更佳。
4.本产品适用于 HRP 标记的二抗，且用化学发光法检测的印迹膜。
需要材料：
1.化学发光底物
2.用含 0.05%Tween-20的TBS 或 PBS
3.用于第一次和第二次蛋白质印迹实验的一抗和二抗
4.胶片，化学发光成像仪
使用方法：
注：膜可以 4℃保存在 PBS 或 TBS 中，直到可以进行剥离程序。
1．将再生液用温水溶解或室温平衡至溶解。
2．用 TBS-T 或 PBS-T 将膜洗10分钟×3次。
3．将印迹膜放入再生液中，室温孵育20-30分钟。使用足够的体积以确保印迹膜完全润湿(对于8×10cm 印迹需要约 20mL)。
注意：优化孵化时间和温度对于获得最佳结果是必不可少的。对于一些抗体，室温孵育就足够了。
然而，高亲和力抗体可能需要再温育5至10分钟。
4.用 TBS-T或 PBS-T将膜洗10分钟×3次。
5.按如下方法检测：
A.完整去除二抗的测试：将膜进行发光检测，如果 5分钟内未检测到信号，则二抗已经成功地从抗原或一抗中去除。
B.完整去除一抗的测试：用 HRP 标记的二抗孵育膜，然后用洗涤缓冲液洗涤。孵育新的一抗和二抗，进行发光检测，如果 5分钟内没有检测到信号，则已经成功地将一抗从抗原中除去。
6.如果在步骤 5 中检测到信号，则返回步骤 2，再剥离 5-15分钟。一些抗原/抗体系统需要更高的温度或更长的孵育时间来完全去除它们。优化剥离时间和温度以确保完全去除抗体，同时防止对抗原的损伤。
7.确定膜被适当剥离后，可以进行第二次免疫印迹实验。
注意：1.印迹可以剥离和重复检测多次，但可能需要更长的曝光时间或更灵敏的化学发光底物。
如果抗原在再生液中变得不稳定，随后的反应可能导致信号降低。
2.剥离后建议重新封闭印记膜。

更多有关增强型蛋白印迹膜再生液 免疫检测的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
BL0769 的盒子
小分子量蛋白质标准 Tylosin tartrate
ARB14194 山羊白细胞介素1β(IL-1β)定量分析 
对羟基*甲*(代"酸")乙酯 9,10-Phenanthrenequinone 120-47-8
Tris-EDTA抗原修复液(10×,pH8.5)   100ml
9039-53-6 尿激酶 Urolinase
藜芦醇 (+)-Catechin hydrate 93-03-8
F030837 BIOTIN标记山羊抗人IgG FC抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC*BIOTIN
PY01-054  聚乙稀吡*(代"咯")烷酮K30  进分  250克  
羟基脲 AgDDTC 127-07-1
M0104 化学发光底物                                       
ARB13062 小鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)酶联免疫定量检测 Mouse pituitary adenylate cyclase activating polyPeptide,pacap ELISA KIT
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ARB11469 人胰岛素样生长因子1(IGF-1)定量分析 Human insulin-like growth factors 1,igf-1 ELISA KIT
ARB11332 人胎儿血红蛋白(HBF)ELISA检测服务 Human anti-cytomegalovirus igM antibody,anti-cmv igM ELISA KIT
高峰α-淀粉酶 Sephadex G-150 9001-19-8
ARB10033 人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶免分析 Human hydroxylysine,hyl ELISA KIT
PY02-210  胰-亚硫*(代"酸")盐-环丝*酸琼脂基础  250克  
BL0820 HRP标记兔抗山羊IgG抗体
BL0632 Q-琼脂糖凝胶HP Q Sepharose HP
ARB11810 人鼻病毒IgM(RhV-IgM)含量检测 
ARB12250 大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)检测服务 Rat angiotension Ⅰ,ang-Ⅰ ELISA KIT
D-葡萄糖醛酸内酯 DL-Serine 32449-92-6
BL0777 基底胶9.6mg/ml
DN0101 小量全血基因组DNA快速提取试剂盒(溶液型)
尿酸(UA)检测试剂盒(磷钨酸微板法)   100T
521-31-3 Luminol 鲁米诺
ARB13136 小鼠前列环素(PGI2)ELISA检测服务 
PY06-016  霉菌及酵母菌计数显色培养基  1000ml，用于霉菌和酵母菌快速分离、鉴别与计数
F030703 BIOTIN标记小鼠抗乙肝表面抗原抗体 Monoclonal Mouse Anti-HBsAg*BIOTIN
ARB12039 大鼠一氧化*(代"氮")合成酶(NOS)Elisa分析 Rat nitric oxide synthase,nos ELISA KIT
ARB12516 大鼠热休克蛋白20(HSP-20)免费代测 Rat heat shock protein 20,hsp-20 ELISA KIT
BTN131083 Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒 Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
ARB11576 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/GelAtInAse B)含量分析 Human matrix metalloproteinase 9/gelatinase b,mmp-9 ELISA KIT
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·Fig4 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN0519
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.Fig4 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
Fig4的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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