CCL28 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括CCL28 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：CCL28 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能
规格：100T
品牌：百奥莱博
编号：ZN0226
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：mouse,hμman
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.CCL28 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
CCL28的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

更多有关CCL28 mRNA原位杂交试剂盒 基因结构和功能的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
F050314 马IgG抗体 Horse IgG
吖啶红 Cysteamine 2465-29-4
NF-261 冻干抗人HBSAg血清
E0605 脱纤维裂解马血(无菌)
乙二*(代"胺")四乙酸二**盐 Behenic acid 14402-88-1
磷酸*二*-磷酸二**缓冲液(pH5.8-8.0)  0.2mol/L 500ml
14726-29-5 固蓝RR盐 Fast Blue RR Salt
114-07-8 Erythromycin 红霉素
Weil髓鞘染色液   4×50ml
PY02-337  Bolton肉汤基础  100克  
ARB14056 猴透明质酸(HA)酶免分析 Monkey hyaluronic acid,ha ELISA KIT
pGM-T重组菌落PCR鉴定试剂盒 
ARB12243 大鼠血管生长素(ANG)免费代测 Rat angiogenin,ang ELISA KIT
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ARB10673 人血管紧张素Ⅳ(ANGⅣ)代做ELISA实验 
嘧啶 Diacetyl monoxime 289-95-2
F020227 山羊抗人IgG抗体 Goat Anti-Human IgG
ARB12156 大鼠白介素1可溶性受体I(IL-1sRI)ELISA检测服务 Rat soluble interleukin-1 receptor i,IL-1sri ELISA KIT
ARB13791 豚鼠过氧化脂质/乳过氧化物酶(LPO)elisa测定使用说明书 Guinea pig lipid peroxlde,lpo ELISA KIT
聚甲基丙*(代"烯")酸甲酯 Sodium hydrogen phthalate 9011-14-7
PY01-009-2  牛肉膏(牛肉浸膏)  发酵级  1公斤  
ARB13312 山羊β内啡肽(β-EP)免费代测 Goat beta-endorphin,β-ep ELISA KIT
D-酪*酸 H-Ser-Ome?HCl 556-02-5
ARB11383 人总蛋白S(TPS)含量分析 Human total protein s,tps ELISA KIT
HEPES缓冲液(含**)  1×|10× 500ml
ARB12741 小鼠Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)elisa检测说明书 Mouse collagen type Ⅱ,col Ⅱ ELISA KIT
ARB10308 人巨噬细胞炎性蛋白5(MIP-5)ELISA代测服务 Human macrophage inflammatory protein 5,mip-5 ELISA KIT
BTN3070 动物RNAOUT Animal RNAOUT(TRIzol)
ARB11317 人促睡眠肽(DSIP)Elisa方法检测 Human delta sleep-inducing Peptide,dsip ELISA KIT
PY02-358  沙氏葡萄糖液体培养基  250克  
ARB12780 小鼠α2纤溶酶抑制物(α2-PI)代做ELISA实验 Mouse α2-plasmin inhititor,α2-pi ELISA KIT
CYB161072 猴IgG(冻干粉)
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·凝胶蛋白质快速蓝染试剂(快速考马斯亮蓝蛋白质染色试剂盒)
编号：ZN1889
规格：100ml
产品保存：室温保存，一年有效
产品说明：电泳完毕需通过蛋白质染色评定其结果的优劣，对凝胶中分离成不同条带的蛋白进行检测。此外,根据不同的研究目的,也可将凝胶电印迹,考马斯亮蓝染色液是以考马斯亮蓝 G250 为染料，可用于 SDS-PAGE 或非变性 PAGE 蛋白电泳胶的快速染色，或免疫印迹转膜后凝胶上残余蛋白的检测.本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
产品特点：
1.本染色液采取全新配方，是一种无毒，无刺激性气味的高度环保型染色液。
2.本考马斯亮蓝快速染色液只需一小时或更短时间就可以轻松检测到低达30-100ng的蛋白电泳条带，凝胶后续经去离子水洗涤降低背景后最低可以检测到 5-10ng的蛋白条带。
3.无需对蛋白和凝胶进行固定，可以不进行脱色，操作更加简单。
4.本染色液和质谱分析兼容。
使用方法：
1.电泳结束后，取胶放入100ml的蒸馏水中,摇床摇动洗三次，每次5-10分钟，以去除盐及SDS等干扰物质。
2.弃蒸馏水，加入适量的染色液(染色液用前需用力摇匀)，以浸没凝胶为宜，室温在水平摇床上进行染色。
3.直到凝胶上出现明显的条带为止,一般1小时左右。
4.弃染色液，加入蒸馏水脱色 1小时或者过夜(选做)。如果希望获得更加清晰的蛋白条带，可以加入约 100ml 蒸馏水室温洗涤约1小时甚至过夜。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景，获得更好的染色效果。
注意：上述的洗涤、染色和脱色时间均适用于0.75-1.5毫米厚的凝胶，对于更厚的凝胶，洗涤、染色和脱色的时间均需适当延长。
常见问题：
1.无染色条带：可能上样量太少，建议跑电泳时加两个不同量的BSA的泳道作为阳性对照。
2.背景太高：可能杂质没有除尽，建议延长洗涤时间或增加洗涤次数。
3.染胶时，染色液里的染料出现析出可能是由于容器污染，请用洁净的容器，同时换上新鲜的染色液可继续染色直到凝胶上出现明显的条带。

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