KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒说明书

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒说明书在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒说明书
编号：ZN0823
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：mouse
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
KLOTHO的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

欲了解更多KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒说明书的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:
BL0824 HRP标记兔抗豚鼠IgG抗体
BTN130664 极高热稳定单链结合蛋白 ET SSB
ARB13578 兔子白介素8(IL-8/CXCL8)免费代测 Rabbit interleukin 8,IL-8 ELISA KIT
BTN131205 WGA糖蛋白分离试剂盒 Glycoprotein Isolation Kit(WGA)
HC0140 插口不锈钢酒精灯(防泄漏防爆)
9014-01-1 蛋白酶(枯草杆菌) Proteinase(Bacillus subtilis)
ARB11091 人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)Elisa定量检测 Human pituitary adenylate cyclase activating polyPeptide,pacap ELISA KIT
百里酚蓝-酚酞指示剂   100ml
BL1174 粪便基因组DNA提取试剂盒
BTN70606 一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装 One-Stop miRNA Urea-PAGE Pack
DN溶液(10%)   100ml
BTN3100 RNA长效保存液 RNASAVER
BL0879 兔抗人纤维蛋白原免疫血清 0.5ml
F030439 胶体金标记山羊抗人IgG Fab抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG Fab*GOLD
盐*(代"酸")土霉素溶液(50mg/ml) Oxytetracycline 50mg/ml 10ml
BTN131072 预稀释BSA蛋白标准品 Instant BSA Standard
二乙三胺五乙酸 N-Acetylneuraminic Acid Aldolase 67-43-6
J0308                  兔抗大鼠IgG(H+L)抗血清                          
110-16-7 Maleicacid  马来酸
ARB12033 大鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)Elisa定量检测 Rat amyloid beta Peptide 1-42,aβ1-42 ELISA KIT
DP431 动物组织总RNA提取试剂盒
KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒说明书关键词：ZN0823,百奥莱博,KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒

CTAB抽提液   500ml
HC0168 双凹载玻片
BL1076 预染中低分子量蛋白质
BL0282 改良型RPMI 1640
B0501 马血清(辐照灭菌)
邻香草醛 BGP 148-53-8
HC0081 PCR管(鼓盖)
ARB11526 人胶原凝集素(Collectin)免费代测 Human Collectin ELISA KIT
SJ0690 D2000
TIANtough Genotyping qPCR PreMix(Probe) 
ARB10540 人兰尼碱受体*通道蛋白(RYR-Ab)抗体含量分析 Human ryanodine receptor calcium channel protein (RYR-ab) antibody ELISA KIT
4-*-3,5-二硝基*(代"*")甲*(代"酸") 5-IDU 118-97-8
碱性蓝6B指示剂   100ml
BTN130806 胚胎裂解液 Embryonic Cell Lysis Solution
BTN80603 微型离心管专用研磨杵 Microtube Pestle
73049-73-7 胰蛋白胨
ARB11554 人烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)定量分析 
PY04-002  Kovacs靛基质试剂  10ml×1支  将试剂滴加入蛋白胨水培养基中约0.4 ml观察结果，用于细菌的靛基质试验结果判断
KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒说明书关键词：ZN0823,百奥莱博,KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒

ARB11395 人神经肽A(NKA)ELISA代测服务 Human neurokinins a,nkb ELISA KIT
ARB10358 人心纳素(ANF)elisa检测说明书 Human atrial natriuretic factor,anf ELISA KIT
F010204 小鼠抗人IgM抗体 Monoclonal Mouse Anti-Human IgM
动物细胞核分离试剂盒(Iodixanol梯度法)   50T
ARB13844 猪口蹄疫(FMD)尿液中含量检测 
SJ0542 Sepharose CL-2B
DP112 酵母质粒小提试剂盒
ARB11376 人前列腺酸性磷酸酶(PAP)Elisa定量检测 Human prostatic acid phosphatase,pap ELISA KIT
F020104 兔抗酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein
BL1218 亮绿SF染色液(1%)
ARB12285 大鼠抗IVIgG抗体ELISA检测服务 Rat anti-ivigG antibody ELISA KIT
F030421 胶体金标记兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG*GOLD
BTN71101 一步法大提质粒DNAOUT One-Step Maxi Plasmid DNAOUT
超纯dNTP混合物(2.5mM) 
酵母蛋白提取试剂盒 Yeast protein extraction kit  50T|100T
F030221 HRP标记兔抗山羊IgG抗体 Rabbit Anti-Goat IgG*HRP
9007-43-6 Cytochromes C  细胞色素C(牛心)  
ARB12957 小鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)免费代测 Mouse vascuolar cell adhesion molecule 1,vcam-1 ELISA KIT
BTN130584 小鼠抗T7标签单抗 Anti T7-Tag Mouse Mab
ARB13446 鸡白介素3(IL-3)酶免分析 Chicken interleukin 3,IL-3 ELISA KIT

我公司强烈推荐基因结构和功能系列产品，热情期待您的咨询选购KLOTHO mRNA原位杂交试剂盒说明书。