- ￥7532
- roche
- 罗氏11487671001
- 2025年11月05日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
SP6 RNA Polymerase
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- 保质期：
见产品外包装
- 供应商：
嵘崴达
- 保存条件：
见产品外包装
- 规格：
5000 UNITS
from Escherichia coli BL 21/pSR3
别名:mRNA, polymerase
一般描述
利用该系统能够获得均匀标记的单链RNA。转录物可以用生物素或DIG-11-UTP标记，或者使用[α-32P]或[α-35S]标记的核苷酸进行放射性标记，以获得高比活性。内容物：
- SP6 RNA聚合酶，≥20 U/μl，溶于缓冲液，pH 7.9
- 转录缓冲液，10倍浓缩
特异性
启动子特异性SP6 RNA聚合酶具有极强的启动子特异性，仅转录噬菌体SP6 DNA或SP6启动子下游的克隆DNA（例如pSPTBM20；pSPTBM21）。
热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA（pH 8.0）和/或加热至65℃来终止反应。
应用
SP6 RNA聚合酶能够以转录SP6启动子下游的克隆DNA为模板，转录合成相应的RNA。可以用标记的NTP进行合成，获得高度标记的RNA。合成的RNA可用于许多应用，包括：- RNA或DNA印迹技术
- 原位 杂交
- RNA酶保护研究：由酶合成的转录物可用作前体RNA，以研究RNA剪接和加工。
- 在转录反应期间，通过在GTP或ATP上过量添加m7GpppG或m7GpppA而在 体外 合成加帽RNA。将得到的反义RNA引入细胞，可抑制相应基因的表达。
- 合成反义RNA探针
| 11487671001 | RNA Polymerase, SP6, 5000 u, SP6 RNA聚合酶 |
| 11573179910 | DIG-11-dUTP,Alkali-labil, Sol |
| 10633542001 | Polynucleotide Kinase, 1000 U,多聚核苷酸激酶 |
| 11209299001 | Nylon Membranes, 20 sheets,尼龙膜，20张 |
| 11585614910 | DIG High Prime Lab./Det.Kit II, |
| 10716359001 | DNA Ligase, T4, 500 units (1U/,DNA连接酶，T4 |
| 10799009001 | DNA Ligase, T4, 500 units (5U/,DNA连接酶，T4 |
| 10836800001 | pBR322 DNA (5 A260 units),pBR322质粒DNA |
| 10713023001 | Phosphatase,alkaline(AP),MB Gr,磷酸酶，碱性（AP） |
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文献和实验的 ULTRAhyb-Oligo 缓冲液（17x 缓冲液）。使用前需在 68℃ 环境中进行溶解。 ( 7 ) 用 0.5 U T4 多核苷酸激酶（PNK，Roche) 和 6 μl [γ-32P ] ATP ( 5000 Ci/mmol ) 标记 1 μmol/L DNA 寡核苷酸（约含有 10 个与目的基因互补的 DNA 寡核苷酸）。 ( 8 ) 参照 Hamilton 和 Baulcombe 的方法，在 35°C 条件下进行 RNA 印迹杂交[14]。 3. 注释 注
如下四类：直接标记法，加尾标记法，基于逆转录反应的标记方法，基于RNA克隆扩增的标记方法。 常用于RNA标记的方法按标记物性质分为： 放射性同位素标记：32P、35S、3H 非放射性标记：半抗原荧光素化学发光物质 地高辛 地高辛标记RNA常用的方法是将DIG与UTP共价结合形成DIG-UTP，以DIG-UTP、ATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶T7、SP6经体外转录合成标记RNA。此法多用于RNA探针的制备，一般每20~25个核苷酸可引入一个地高辛分子
。） 使用不同的聚合酶 通常用于体外转录的三种 RNA 聚合酶可以相互不同地转录给定的模板。当转录不能完成时，可以充分利用这种转录给定模板序列的不同能力。改变转录模板前面的聚合酶启动子序列是一种劳动密集型修复，因为它可能需要设计 PCR 引物或亚克隆。Ambion 具有可简化过程的载体和引物。pTRIPLEscript 系列载体具有串联排列的 SP6、T7 和 T3 启动子，这些载体特别适用于亚克隆转录模板。或者，Ambion 的无克隆启动子添加试剂盒 Lig'nScribe 可用于改变可 PCR 扩增
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