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- roche
- 罗氏11719408001
- 2025年11月07日
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- 供应商：
嵘崴达
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- 英文名：
Protein A Agarose
- 规格：
2 ML
蛋白A琼脂糖
>98% (HPLC and SDS-PAGE), suspension
别名:
琼脂糖, 蛋白A
一般描述
重组蛋白A在蛋白A琼脂糖生产中的应用具有以下优点：它完全不含已知具有促有丝分裂作用的葡萄球菌肠毒素（分离自jin黄色葡萄球菌的蛋白A中的污染物） 。固定化学可在广泛的pH和缓冲条件下提供高IgG的结合能力以及防漏稳定性。根据洗脱条件，凝胶可以使用30次以上。
蛋白A泄漏：<18 ng Protein A/ml (ELISA)
Regeneration: the gel can be used approximately 30 times
Structure: recombinant Protein A (E. coli, Mr = 45,000) is covalently coupled to crosslinked 6% agarose beads: 3 mg Protein A (>98％纯度，HPLC，SDS-Page/1ml凝胶
蛋白A，固定化。
特异性
蛋白A是从特定细菌菌株中分离的细胞壁蛋白，其具有来自不同物种的某些类免疫球蛋白的特异性结合位点。蛋白A可在不同程度结合IgM、IgA、IgD和大多数IgG亚类。
应用
从腹水或细胞培养上清液中纯化小鼠单克隆抗体。蛋白A或蛋白G琼脂糖亲和基质可用于从粗细胞提取物中纯化抗体 以及蛋白质的免疫沉淀或共免疫沉淀。它还被用于光活化-核糖核苷-增强的交联免疫沉淀（PAR-CLIP）分析。
组分
Preswollen凝胶，即用型，2ml或5ml（沉淀凝胶体积）悬浮于缓冲液中的凝胶，该缓冲液中含有20％乙醇作为保藏剂，非无菌。
蛋白A含量：3mg/ml预溶胀凝胶
质量
纯度：> 98％（HPLC，SDS-PAGE）；完全不含葡萄球菌肠毒素。
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文献和实验（EP管插冰上，置水平摇床上） 4. 4℃，14000g离心15min，立即将上清转移到一个新的离心管中 5. 准备Protein A agarose，用PBS 洗两遍珠子，然后用PBS配制成50%浓度，建议减掉枪尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠 6. 每1ml总蛋白中加入100μl Protein A琼脂糖珠（50%），4℃摇晃10min（EP管插冰上，置水平摇床上），以去除非特异性杂蛋白，降低背景 7. 4℃，14000g离心15min，将上清转移到一个新的离心管中
，也可以参考以下数据：.o 多抗血清：1-5 μlo 亲和纯化的多抗：1 μgo 腹水（单抗）：0.2-1 μlo 培养上清（单抗）：20 -100 μl2. 4℃缓慢摇动孵育1h到过夜，取决于蛋白的量以及抗体的亲和力3. 同时准备Preotein A/G agarose beads。建议减掉枪尖部分，避免在涉及琼脂糖珠的操作中破坏琼脂糖珠：根据抗体类型选择合适的beads（参考附表2），如果IP抗体是IgM：不使用protein-A/G beads，直接使用Goat anti Mouse
免疫共沉淀（Co- Immunoprecipitation, Co-IP）是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法。 其基本原理是，在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体，孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的Protein A或G，若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白，就可以形成这样一种复合物：“目的蛋白—兴趣蛋白—抗兴趣蛋白抗体—Protein A或G”，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合
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