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细胞划痕实验
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实验目的:细胞划痕法检测细胞的迁移能力。
实验原理:细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。
实验仪器:超净工作台、CO2培养箱、生物倒置显微镜
实验步骤:
1.培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一 个视野)。
2.细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。
3.细胞铺满板底后,用1 ml枪头垂直于孔板制造细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法最大的缺陷。)
4.吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。
5.加入无血清培养基,拍照记录。
6.将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。
7.根据收集图片数据分析实验结果。
实验周期:收到样品1周内提交结果。
实验结果:提供实验原始数据、图片、分析结果;实验流程及完整报告一份。
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