枸橼酸盐缓冲液 免疫检测

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北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖枸橼酸盐缓冲液 免疫检测在内的细胞生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：枸橼酸盐缓冲液 免疫检测
产地：国产|进口
品牌：百奥莱博
规格：1包
使用说明：具有可调整的适宜pH缓冲作用。可用于组化抗原修复。

除枸橼酸盐缓冲液 免疫检测外，我公司正在打折促销以下产品：
L-*甘*酸 Dicofol 2935-35-5
D-赖*酸 TG 923-27-3
甘油三酯(TG)检测试剂盒(GPO-PAP双试剂微板法)   100T
329-98-6 PMSF *甲基黄酰*
ARB12961 小鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)含量测试 Mouse angiotension i,ang-i ELISA KIT
软骨染色液(番红O法)   2×100ml
L-丝*酸 Hypoxanthine 56-45-1
5,6-二甲*并咪唑 Kieselguhr 582-60-5
SJ0222 D-Gluconate Sodium  D-葡萄糖酸*
ARB12519 大鼠热休克蛋白47(HSP47)定量分析 Rat heat shock protein,hsp47 ELISA KIT
PY02-220  改良磷酸盐缓冲液PSB  250克  
ARB12950 小鼠血清总补体(CH50)elisa检测操作说明书 Mouse 50% complement hemolysis,ch50 ELISA KIT
ARB14229 人髓鞘关联糖蛋白(MAG)ELISA检测服务 
磷酸吡哆醛 Ethylenediaminetetraacetic acid copper(II) disodiu*(代"m") salt 41468-25-1
ARB11624 人粘膜相关上皮趋化因子(MEC/CCL28)ELISA代测服务 Human mucosae associated epithelia chemokine,mec ELISA KIT
蛋白稳定剂   1ml|10ml
枸橼酸盐缓冲液 免疫检测关键词：ZN1955,枸橼酸盐缓冲液,百奥莱博

BL1307 Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
ARB12225 大鼠血红素氧合酶1(HO-1)含量检测 Rat heme oxygenase 1,ho-1 ELISA KIT
KG201 快速DNA提取扩增套装
NF-238 兔抗鼠IgG血清
SJ0719 1×pbs
PY06-008  弧菌显色培养基  1000ml，用于弧菌属细菌的快速分离与鉴别
胰蛋白酶抗原修复液   100ml
F030505 FITC标记兔抗牛血清白蛋白抗体 Rabbit Anti-BSA*FITC
BTN100301 秋水仙素溶液 Colchicine Solution
尿尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)   100T
9031-72-5 乙醇脱*酶 Alcohol Dehydrogenase
17502-048 N-2
BTN100931 ROX参考染料,低浓度型 ROX Reference Dye II
尿沉渣染色液(Sternheimer法)   50ml|100ml
三磷酸脱氧核糖核苷酸 Z-L-Alanine
β-*酚紫 Okadaic acid sodiu*(代"m") salt 7143-21-7
BTN130960 超螺旋DNA分子量标准 Supercoiled DNAMETER
ARB10494 人白介素8(IL-8)elisa测定使用说明书 Human interleukin 8,IL-8 ELISA KIT
枸橼酸盐缓冲液 免疫检测关键词：ZN1955,枸橼酸盐缓冲液,百奥莱博


·S-100A7 mRNA原位杂交试剂盒
编号：ZN1242
规格：100T
基本信息：
保存条件：4℃保存一年
工作量：100张切片。
有效期：一年。
适用种属：hμman
标记方式：3’—尾段标记
试剂盒中内容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.S-100A7 mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗地高*(代"辛") 5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
用户自备试剂：
原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用 PBS)
一．培养细胞和冰冻切片
准备工作：
固定液：4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗地高*(代"辛")：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲*透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
结果观察：
S-100A7的细胞胞浆着色呈棕黄色。
注意事项：
由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

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