2×BaHF MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售")，产品线涵盖2×BaHF MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR)在内的分子生物学试剂产品，还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。

名称：2×BaHF MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR)
品牌：百奥莱博
英文名：2×BaHF MasterMix(With Dye)
产地：国产|进口
规格：5ml
  本品为由BaHF DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×，具有操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好的优点，可最大限度地减少人为误差和污染。该产品所含的BaHF DNA Polymerase是经过特殊处理的热启动高保真聚合酶。该聚合酶具有5"-3"DNA聚合酶活性，5"-3"核酸外切酶活性和3"-5"核酸外切酶活性，在普通PCR条件下，与BaldStar Taq DNA Polymerase相比，具有扩增效率高、错配率低的优良性能。化学修饰使该酶在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活需要在95℃下孵育10分钟，该条件可以整合入已有的PCR热循环程序。优化的缓冲体系使酶的作用发挥最大功效，实现对目的片段的高保真、高特异性、高扩增效率、高灵敏度扩增。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。适用于常规的PCR反应和对高保真性有要求的基因克隆等实验。

产品组成：

 

组份	1ml	5ml
2×BaHF MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5×1ml

注意：2×BaHF MasterMix含有BaHF DNA Polymerase,3.4 mM MgCl2和 400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；
4、2～8℃存放三个月，活性无明显改变。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×BaHF MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	94℃	30 s	30-40 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的BaHF DNA Polymerase的扩增效率为1-2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
4)本产品须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

欲了解更多2×BaHF MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR)的品牌、产地、价格及说明书等产品信息，请致电北京百奥莱博科技有限公司，我们将竭诚为您服务，另外，以下产品正在火爆促销:
(L)-2-哌*(代"啶")甲*(代"酸") DL-Cysteine HC1 3105-95-1
幽门螺旋杆菌染色液(MGG法)   2×100ml
ARB12004 大鼠S100B蛋白(S-100B)含量分析 Rat soluble protein-100b,s-100b ELISA KIT
细菌裂解液(免超声)   50ml|100ml
DNA Marker（250-10000bp） 100次
ARB10149 人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)elisa检测 Human rho-associated coiled-coil containing protein kinase 2,rock-2 ELISA KIT
Tris缓冲盐溶液(20×TBS,pH7.5)   500ml
ARB12142 大鼠白三烯B4(LTB4)elisa检测操作说明书 Rat leukotriene b4,LT-b4 ELISA KIT
十二烷基二甲基乙基*化铵 N-Benzylglycine ethyl ester 68207-00-1
ARB12902 小鼠白介素10(IL-10)血清中含量检测 Mouse interleukin 10,IL-10 ELISA KIT
L-酪*酸二*盐 Norfloxacin 69847-45-6
A8015-18 小鼠血清 100ml|500ml
普鲁士蓝染色液(中性红法)   2×50ml|2×100ml
2×BaHF MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR)关键词：含染料,WE0114,2×BaHF MasterMix(含染料),2×BaHF MasterMix(With Dye)

藻类膜蛋白提取试剂盒   50T|100T
DNA Ladder plus(100bp～10kb) 
BTN130902 酵母产孢培养基 Sporulation Medium
蜜二糖 L(+)-Tartaric acid 585-99-9
Acr-Bis(40%:2%)   500ml
F030706 BIOTIN标记兔抗牛酪蛋白抗体 Rabbit Anti-casein*BIOTIN
BL1099 原位细胞凋亡试剂盒(原装50T，分成10T)roche、分装
ARB13787 豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1RA)Elisa分析 Guinea pig interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra ELISA KIT
6055-19-2 Cyclophosphamide monohydrate 环磷酰胺
槲皮素 L-phenylglycine ethyl ester?HCl 6151-25-3
ARB12846 小鼠内皮脂肪酶(EL)尿液中含量检测 Mouse endothelial lipase,el ELISA KIT
ARB10218 人β位淀粉样前体蛋白裂解酶1(BACE1)检测服务 Human β-site app-cleaving enzyme 1，1bace1 ELISA KIT
BTN130925 鼻腔采样拭子 Nasal Swab
磷酸烯醇式丙*(代"酮")酸羧化酶 TAPS 9067-77-0
2×BaHF MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR)关键词：含染料,WE0114,2×BaHF MasterMix(含染料),2×BaHF MasterMix(With Dye)


·血块基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0185
英文名称：BloodClot Blood DNA Extraction Kit
规格：50次
  本试剂盒供了一种快速、简单、高效的从血片中提取基因组DNA的方法。既适用于未加抗凝剂的血液，也可用于加入EDTA、柠檬酸盐、肝素等抗凝剂的血液样本。样品裂解后，DNA被选择性的吸附到硅基质膜上。两步漂洗后，高质量的DNA被溶解到洗脱液中。纯化得到的DNA无酶抑制剂和其他杂质的残留，A260/A280的比值在1.5-2.3。DNA最长可达50 kb，适用于PCR，Real-time PCR、Southern blotting等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GC	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer PW2(浓缩液)	18ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DC及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇

产品特点
1、适用于凝固血液样本的高纯度总DNA分离纯化。
2、无需有机溶剂提取以及乙醇沉淀，彻底去除污染物及下游反应抑制物，快速提取高品质DNA。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer PW2中加入无水乙醇，混合均匀，并在试剂瓶标签上做好标记。
3、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GC是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GC和Buffer GTL于56℃水浴重新溶解
4、将一个水浴锅预热至56℃，另一个水浴锅预热至70℃。
5、可将洗脱缓冲液Buffer GE预热至70℃。

操作步骤：
1、向1.5ml离心管中加入20μl 蛋白酶K 溶液，然后再加入180μl Buffer GTL。
注意：若样品数量较多，蛋白酶K 和Buffer GTL可按比例混合，然后将200μl混合物加入到1.5ml的离心管中。
2、将取下的干血片放入上一步中的离心管中，剧烈涡旋混匀并短暂离心。56℃孵育30-60分钟，期间每隔10分钟将离心管涡旋10秒。
3、加入200μl Buffer GC，彻底涡旋混匀。短暂离心后，70℃孵育10分钟，期间每隔3分钟将离心管涡旋10秒。
注意：加入Buffer GC后可能会产生白色沉淀，大部分情况下，在孵育过程中，沉淀会消失，沉淀不会影响后续的实验。
4、待步骤3离心管中样品降为室温后加入100μl无水乙醇，轻轻颠倒混匀样品，室温放置5分钟。短暂离心，将管壁内壁的液体富集于离心管底。
注意：
1)需要将样品和乙醇混合均匀。
2)当室温高于25℃时，需要先将乙醇预冷。
5、将上一步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中，12000rpm(～13400×g)离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将Spin Column DC放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer PW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置2-5分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
10、将吸附柱置于一个无菌的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μl BufferGE，室温放置2-5分钟。12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用去离子水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用去离子水做洗脱液应该保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心前室温孵育5分钟可以增加产量；用另外的20-200μl Buffer GE再次洗脱可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置5 min后再次离心；若洗脱体积小于20μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或去离子水洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

我公司强烈推荐核酸扩增(PCR)系列产品，热情期待您的咨询选购2×BaHF MasterMix(含染料) 核酸扩增(PCR)。