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酵母质粒提取试剂盒优惠价

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  • ¥200 - 2170
  • 百奥莱博
  • WE0165-KJO
  • 北京
  • 2025年07月08日
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      876

    • 英文名

      Yeast Plasmid Extraction Kit

    • 保质期

      长期

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    • 保存条件

      室温(15~30℃

    特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

    北京百奥莱博专业生产销*(代"售")酵母质粒提取试剂盒优惠价,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。


    名称:酵母质粒提取试剂盒优惠价
    品牌:百奥莱博
    编号:WE0165
    产地:国产|进口
    规格:50次
    英文名:Yeast Plasmid Extraction Kit
      本试剂盒在普通碱裂解法的基础上进行了改进,全新的Lyticase可以有效的破除酵母细胞壁,新型硅基质膜和缓冲液系统能高效专一的结合质粒DNA,同时可以最大限度的去除蛋白及其他杂质,整个过程方便快捷,不需使用有毒有害试剂,可以同时处理多个样品。除适用于酵母细胞外,也可用于大肠杆菌。使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验,如连接、转化、测序和文库筛选等。

    试剂盒组成

     
    组份 50次
    Buffer P1 15ml
    Buffer P2 15ml
    Buffer N3 20ml
    Buffer PS 15ml
    Buffer PB 10ml
    Buffer PW(浓缩液) 10ml
    Buffer EB 10ml
    RNase A(10 mg/ml) 150μl
    玻璃珠 2g
    吸附柱DM及收集管 50套


    自备试剂:无水乙醇,异丙醇。

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、所有组分可在干燥、室温(15~30℃)环境稳定保存1年,将吸附柱置于2~8℃可保存更长时间,加入RNase A的Buffer P1 置于2~8℃可稳定保存6个月。
    2、第一次使用前,将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中,混匀,置于2–8℃保存。
    3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer PW中加入无水乙醇。
    4、使用前请检查Buffer P2、Buffer N3是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀现象,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清。
    5、注意不要直接接触Buffer P2和Buffer N3,使用后应立即盖紧盖子。
    6、提取的质粒量与酵母菌株、质粒拷贝数、培养条件等因素有关,通常酵母质粒拷贝数都很低,通过电泳或分光光度计法都很难检测到。

    操作步骤
    1、取1-5ml酵母培养物(最多不超过5×107个酵母细胞,一般对于酿酒酵母OD600=1.0时,相当于1-2×107细胞/ml)加入离心管(自备)中,12000rpm(~~13400×g)离心30秒,收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。
    2、向菌体中加入250μl Buffer P1(请先检查是否已加入RNase A),重悬沉淀。
    3、在以上混合物中加入40 mg的玻璃珠(Glass Beads),涡旋震荡10分钟。
    4、向离心管中加入250μl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀6-8次,室温放置5-10分钟,此时菌液应变得清亮粘稠。
    注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。如果溶液未变得清亮,提示可能菌量过大,裂解不彻底,应减少菌体量。
    5、向离心管中加入350μl Buffer N3,立即温和地上下颠倒混匀6-8次,此时出现白色絮状沉淀,12000rpm离心20分钟。
    注意:Buffer N3加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。
    6、柱平衡: 向已装入收集管的吸附柱DM中加入200μl Buffer PS,12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    7、将步骤5所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中,注意不要吸出沉淀。
    注意:吸附柱的最大容积为750μl,溶液分2次过柱。
    8、12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
    9、向吸附柱加入150μl Buffer PB,12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    10、向吸附柱中加入750μl Buffer PW(请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。
    11、将吸附柱重新放回收收集管中,12000rpm离心2分钟,倒掉废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
    12、将吸附柱置于一个新的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer EB,室温放置数分钟,13000rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
    注意:
    1)为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置数分钟,13000rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。
    2)质粒拷贝数较低或>10 kb时,Buffer EB在65-70℃水浴预热,可以增加提取效率。
    3)通常酵母质粒拷贝数很低,通过电泳或者分光光度计法都很难检测到。提取的质粒如果用于下一步实验,通常建议使用量为:用作PCR模板可使用1–5μl质粒,用于转化大肠杆菌可使用5–10μl质粒。
    4)转化大肠杆菌时应使用商业化高转化效率的感受态细胞。

    储存条件:室温(15~30℃)

    欲了解更多酵母质粒提取试剂盒优惠价的品牌、产地、价格及说明书等产品信息,请致电北京百奥莱博科技有限公司,我们将竭诚为您服务,另外,以下产品正在火爆促销:

    ·细菌RNA提取试剂盒(含DNase I)
    编号:WE0199
    英文名称:RNAtiqu Bacteria RNA Extraction Kit
    规格:50次
      本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总RNA。30-40分钟内即可完成反应,提取的总RNA纯度极高,没有蛋白质和其他污染,适用于RT-PCR、Real-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。

    试剂盒组成
    组份 50次
    DNase I 1000 U
    10×Reaction Buffer 1000μl
    Buffer RL 35ml
    Buffer RW1 40ml
    Buffer RW2(浓缩液) 11ml
    RNase-Free Water 10ml
    过滤柱FL及收集管 50套
    吸附柱RM及收集管 50套
    RNase-Free离心管(1.5ml) 100个

    保存条件:DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存,其它组分室温(15~30℃)。

    自备试剂:Lysozyme(WE0214S)、β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、预防RNase污染,应注意以下几方面:
    1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
    2)配制溶液应使用无RNase的水。
    3)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
    2、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%,如1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL 4℃可保存1个月,如出现沉淀,请加热溶解后使用。
    3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。
    4、如未特殊说明,所有离心步骤均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。

    操作步骤
    1、4℃ 12000rpm(~~13400×g)离心2分钟收集菌体(菌体量最大不超过1×109),小心去除所有上清。
    注意:上清如果有残留,会影响后续的消化过程。
    2、用含有Lysozyme的100μl TE缓冲液彻底重悬菌体,室温孵育。具体配方和孵育时间如下:
      TE缓冲液中Lysozyme的终浓度 孵育时间
    G-细菌 400μg/ml 3-5分钟
    G+细菌 3 mg/ml 5-10分钟

    3、加入350μl裂解液RL(使用前请检查是否加入β-巯基乙醇),涡旋震荡混匀(此步骤可能出现不溶性沉淀),将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管的过滤柱中,12000rpm离心2分钟。
    4、向上步得到的滤液中加入250μl无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入已装入收集管的吸附柱中,12000rpm离心1分钟,弃掉废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    5、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    6、配制DNase I 混合液:取52μl RNase-Free Water,向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl),混匀, 配制成终体积为80μl的反应液。
    7、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液,20-30℃孵育15分钟。
    8、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1,12000rpm离心1分钟,弃废液,将吸附柱重新放回收集管中。
    9、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心1分钟,弃废液。
    10、重复步骤9。
    11、将吸附柱放回收集管中,12000rpm离心2分钟。
    注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
    12、将吸附柱装入新的RNase-Free的收集管中,向吸附膜的中间加入30-50μl RNase-Free Water,室温放置1分钟,12000rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
    注意:
    1)RNase-Free Water体积不应小于30μl,体积过小影响回收率。
    2)如果要提高RNA的产量,可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤12。
    3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤12。

    储存条件:室温(15~30℃)。


    酵母质粒提取试剂盒优惠价关键词:WE0165,Yeast Plasmid Extraction Kit ,酵母质粒提取试剂盒


    ·血液基因组DNA提取试剂盒
    编号:WE0176
    英文名称:BalbGen Blood DNA Kit
    规格:可处理50ml血液|可处理200ml血液
      本试剂盒提供了一种快速、灵活的方法,适用于新鲜或冷冻全血(用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的样品)提取总DNA,包括基因组DNA和线粒体DNA。本品可以灵活处理0.1-20ml的全血,采用非离心柱的方法,无需使用*酚、*仿等有机溶剂,有效去除蛋白、色素、脂类及其它抑制性杂质污染。整个过程在一个管中操作,减少了污染及样本混淆的风险。提取的DNA产量高、质量好,可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern Blot以及文库构建等实验。

    试剂盒组成
    组份 可处理50ml血液 可处理200ml血液
    Buffer FG1 2×65ml 2×260ml
    Buffer FG2 30ml 120ml
    Buffer GE 15ml 60ml
    蛋白酶K 3 mg 12.5mg
    蛋白酶K 储存液 1.25ml 1.25ml


    保存条件:Buffer FG1 2~8℃,其他组分室温(15~30℃)。

    产品特点
    1、纯度高:提取的基因组DNA可直接用于下游PCR、荧光定量PCR、酶切等各种实验。
    2、提取量大:可从0.1-20ml的全血中提取DNA,无需使用*酚、*仿等有机溶剂。
    3、兼容性强:适用于处理各种血液和细胞样本。

    自备试剂:异丙醇、70%乙醇

    实验前准备及重要注意事项/strong>:
    1、向蛋白酶K 中加入指定用量(0.3ml/1.25ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解,-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。
    2、所有离心操作均在室温下完成。
    3、血液样品反复冻融,会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。所得基因组DNA也应尽可能避免反复冻融,以免降解。如果提取冷冻血液的基因组DNA,建议37℃水浴,迅速解冻后再进行后续操作。
    4、血液样品的储存:
    1)短期保存:已加入抗凝剂的血液样品可在2~8℃储存最多10天,对于某些实验例 如Southern杂交等,需要得到完整全长的基因组DNA,请将血液样品在2~8℃储存不超过3天,此时基因组DNA的降解程度较轻。
    2)长期保存:已加入抗凝剂的血液请置于-70℃保存(如果提取的是高分子量的DNA,推荐使用EDTA作为抗凝剂)。

    操作步骤

    一、从100~900μl全血中提取基因组(以300μl血液处理量为例)
    1、取300μl全血于2ml离心管(自备)中,加入300μl(样本等体积)Buffer FG1,上下颠倒混匀5次,10000×g离心30秒,弃上清。
    2、再向离心管中加入450μl(1.5倍样本体积)Buffer FG1,涡旋震荡,使沉淀完全分散。10000g离心30秒,弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上,放置2分钟。
    注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上,可以减少管壁上清的回流。
    3、按照附表配制Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
    注意:此混合液最好现用现配.井在配好后1小时之内用完。
    4、加入150μl的Buffer FG2与蛋白酶K 的混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
    注意:
    1)如果有多个样品同时操作,加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡,不要等所有样品部加完后再震荡。
    2)通常涡旋震荡3-4次.毎次5秒,可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入30μl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液,再次混旋混匀。
    5、65℃孵育10分钟,其间颠倒混匀数次。
    注意:如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
    6、加入150μl导丙醇,上下颠倒彻底混匀直至出现丝状或簇状基因组DNA。
    注意:与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少,可能看不到DNA,则至少上下频倒高心管20次确保沉淀完全。
    7、10000×g离心5分钟。
    注意:如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或増大离心力。
    8、弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
    注意:少数时候沉淀可能贴壁不牢,注意不要吸弃沉淀。
    9、加入300μl的70%乙醇,涡旋震荡5秒,10000×g离心5分钟,弃上清。
    注意:如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或増大离心力。
    10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟,确保沉淀在管中 。
    注意:在管底可见白色的DNA沉淀,在极少情況下沉淀可能会松弛 ,所以要缓慢倒掉上清。
    11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
    注意:乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验,但避免过度干操DNA沉淀,因过度干燥会使DNA难于溶解。
    12、加入200lμl的Buffer GE,低速涡旋5秒,65℃孵育1小时溶解DNA,期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
    注意:如果DNA没有完全溶解,可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA,建议延长孵育时间。

    二、从1~5ml全血中提取基因组(以3ml血液外理量为例)
    1、取3ml全血于15ml离心管(自备)中,加入3ml(样本等体积)Buffer FG1,上下颠倒混匀5次,2500×g离心5分钟,弃上清。
    2、再向离心管中加入4.5ml(1.5倍样本体积)Buffer FG1,涡旋震荡,使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟,弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上,放置2分钟。
    注意:在极少情况下沉淀可能会松弛 ,所以要缓慢倒掉上清。将离心管倒置在吸水纸上,可以減少管壁上清的回流。
    3、按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
    注意:此混合液最好现用现配,井在配好后1h之内用完。
    4、加入1.5ml Buffer FG2/蛋白酶K 混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
    注意:
    1)如果有多个样品同时操作,加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋振荡,不要等所有样品都加完后再震荡。
    2)通常涡旋震荡3-4次,毎次5秒可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入300lμl的Buffer FG2/蛋白酶K 混合液,再次涡旋混匀。
    5、65℃孵育10~30分钟,其间颠倒混匀数次。
    注意:如果样品额色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
    6、加入1.5ml导丙醇,上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
    注意:与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要。如果样品中白细胞含量少,可能看不到DNA,则至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
    7、2500×g离心5分钟。
    注意:如果沉淀贴壁不牢,可以造当延长离心时间或増大离心力。
    8、弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
    注意:在管底可见自色的DNA沉淀,在极少情况下沉淀可能会松弛 ,所以要缓慢倒掉上清。
    9、加入1.5ml的70%乙醇,涡旋震荡5秒,2500×g离心5分钟,弃上清。
    注意:如果沉淀贴壁不牢.可以适当延长离心时间或増大离心力。
    10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟,确保沉淀在管中 。
    注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。
    11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
    注意:乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验,但避免过度干燥DNA沉淀,因过度干燥会使DNA难于溶解。
    12、加入300μl的Buffer GE,低速涡旋5秒,65℃孵育1小时溶解DNA,期间轻弹数次助溶。一20℃保存DNA。
    注意:如果DNA没有完全溶解,可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA,建议延长孵育时间。

    三、从6~20ml全血中提取基因组(以10ml血液处理量为例)
    1、取10ml全血于50ml离心管(自备)中,加入10ml Buffer FG1,上下颠倒混匀5次,2500×g离心5分钟。
    2、再向离心管中加入15ml Buffer FG1,涡旋震荡,使沉淀完全分散。2500×g离心5分钟,弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上,放置2分钟。
    注意:在极少情况下沉淀可能会松弛,所以要缓慢倒掉上清。
    3、按照附表配制缓冲液FG2与蛋白酶K 的混合液(比例100:1)。
    注意:此混合液最好现用现配,井在配好后1小时之内用完。
    4、加入5ml Buffer FG2/蛋白酶K 混合液,立即涡旋混匀至溶液无团块。
    注意:
    1)如果有多个样品同时操作,加入Buffer FG2/蛋白酶K 混合液后立即涡旋震荡,不要等所有样品都加完后再震荡。
    2)通常涡旋震荡3-4次,毎次5秒可以使沉淀充分悬浮,如果涡旋震荡后发现沉淀中含胶状物质可以再加入1ml BufferFG2/蛋白酶K 混合液,再次涡旋混匀。
    5、65℃孵育30分钟,其间颠倒混匀数次。
    注意:如果样品颜色从红色变成橄榄绿说明蛋白消化完全。
    6、加入5ml导丙醇,上下颠倒彻底混匀直至看到DNA。
    注意:与异丙醇完全混合对于沉淀DNA非常重要,应该至少上下颠倒离心管20次确保沉淀完全。
    7、2500×g离心5分钟。
    注意:如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或増大离心力。
    8、弃上清,并把离心管倒置于干净的吸水纸上吸干。
    注意:在管底可见白色的DNA沉淀,在极少情况下沉淀可能会松弛 ,所以要缓慢倒掉上清。
    9、加入5ml的70%乙醇,涡旋震荡5秒,2500×g离心5分钟,弃上清。
    注意:如果沉淀贴壁不牢,可以适当延长离心时间或増大离心力。
    10、把离心管倒置于干净的吸水纸上5分钟,确保沉淀在管中 。
    注意:在极少情况下沉淀可能会松驰 ,所以要缓慢倒掉上清。
    11、空气干燥DNA沉淀直至所有的液体挥发干净(至少5分钟)。
    注意:乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、 PCR等)实验,但避免过度干燥DNA沉淀,因过度干燥会使DNA难于溶解。
    12、加入1ml的Buffer GE,低速涡旋5秒,65℃孵育1小时溶解DNA,期间轻弹数次助溶。-20℃保存DNA。
    注意:如果DNA没有完全溶解.可室温过夜。如果使用少量的FG3溶解DNA,建议延长孵育时间。

    附表:不同体积血液所需各种缓冲液用量
    缓冲液 血液样品的体积(μl)
    100 300 1000 3000 5000 10000 20000
    Buffer FG1(μl) 250 750 2500 7500 12500 25000 50000
    Buffer FG2(μl) 50 150 500 1500 2500 5000 10000
    蛋白酶K(μl) 0.5 1.5 5 15 25 50 100
    异丙醇(μl) 50 150 500 1500 2500 5000 10000
    70%乙醇(μl) 50 150 500 1500 2500 5000 10000
    Buffer GE(μl) 100 200 200 300 500 1000 1000
    补加FG2和蛋白酶K 混合液 10 30 100 300 500 1000 1000


    储存条件:室温(15~30℃)。


    酵母质粒提取试剂盒优惠价关键词:WE0165,Yeast Plasmid Extraction Kit ,酵母质粒提取试剂盒

    59-14-3 Brdu   5-*-2"-脱氧尿苷
    ARB13397 羊布病(BrucellosIs)Elisa分析 
    地塞米松溶液(1mg/ml) Dexamethasone 1mg/ml,100× 10ml|50ml
    ARB10247 人乙*(代"胺")碘呋酮(AD)酶联免疫定量检测 Human amiodarone,ad ELISA KIT
    56-86-0 L-Glutamic acid   L-谷*酸
    9004-67-5 Methyl Cellulose  甲基纤维素
    ARB11896 人磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)Elisa定量检测 Human phospho protein kinase c,p-pkc ELISA KIT
    ARB13860 猪可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)含量分析 Porcine soluble intercellular adhesion molecule-1,sicam-1 ELISA KIT
    BL1127 细胞爬片抗原修复液(1×)
    乙酸*溶液(2mol/L,pH4.0,RNase free)   500ml
    9054-89-1 Sod 超氧化物歧化酶
    D-木酮糖 H-Lys-OMe.2HCl 551-84-8
    5-*-6*-3-吲哚-β-D-半乳糖苷 Thymol 93863-88-8
    ARB11341 人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)elisa检测操作说明书 Human placental alkaline pkosphatase,plap ELISA KIT
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