北京现货一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)销售

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应北京现货一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)销*(代"售")，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：北京现货一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)销*(代"售")
品牌：百奥莱博
规格：50次
英文名：One Step Western Kit HRP(Mouse)
编号：WE0297
产地：国产|进口
  本试剂盒是百奥莱博研发的Western Blot检测试剂盒，1小时左右能够得到高质量的Western Blot结果，且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时
间，实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后，使用试剂盒中的封闭液孵育5 min，再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜，经洗涤三次(每次5 分钟)后，即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为鼠来源的实验系统使用。

组份	50次
Blocking Buffer	500ml
Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)	5×1ml
Dilution Buffer	500ml
Wash Buffer(10×)	500ml

注意事项：
1、客户自己准备鼠来源的一抗。
2、使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)抗体反应液(鼠)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
3、漂洗液如在2-8℃保存时出现沉淀，请恢复到室温，把沉淀溶解后正常使用，1×漂洗液可在室温保存一个月。
4、建议转膜完成后用丽春红等试剂染色，并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
5、一抗和抗体反应液HRP(鼠)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
6、抗体反应液HRP(鼠)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
7、加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力不好的抗体建议不重复回收使用。回收后抗体如在1-2天内使用放置在2～8℃，长期保存请在-20℃冻存，避免多次反复冻融。
8、如果存在较高背景的情况，请调整抗体的用量，并增加洗膜次数。
9、试剂盒内所有试剂请于2～8℃保存，避免冻融。

操作步骤：
本产品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤，以5cm×8cm 膜为例：

1、漂洗液准备：取10ml Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100ml，即为1×Wash Buffer，待用。每次洗膜用8-10ml。
2、封闭：转膜完成后，将膜浸没到10ml Blocking Buffer中，室温封闭5分钟。
3、漂洗：倒掉封闭液，加入8-10ml 1×Wash Buffer，于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
4、洗膜的同时可准备抗体孵育液：取Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)100μl到离心管中，加入鼠源一抗3-10μg，枪头吸打至充分混匀，室温孵育5分钟。加入至10ml Dilution Buffer中，充分混匀。
注意：
1)一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例，取100μl抗体反应液HRP(鼠)到EP管中，加入10μl一抗，加入到10ml 抗体稀释液中，充分混匀，室温孵育5分钟。
2)如果膜面积较小，可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
5、完成步骤3后，倒掉漂洗液，将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Mouse)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面)，在摇床上以60 rpm左右的速度室温孵育40分钟。
6、弃去(回收)抗体孵育液，用配制的1×Wash Buffer漂洗3-5次，每次3分钟。
7、进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。

应用实例：

实例一 抗原为293T细胞全裂解液
A：普通WB对照：beta-actin鼠单抗(WE0354)5μg室温孵育40 min，洗膜后二抗羊抗鼠-HRP(WE0393)1：10000稀释，室温4 0min，ECL(WE0308)曝光。
B: 一步法WB： beta-actin鼠单抗(WE0354)5μg室温孵育40 min，ECL(WE0308)曝光。
实例二 抗原为E.coli多标签蛋白裂解液
C：普通WB对照：GST鼠单抗(WE0352)2.5μg室温孵育40 min，洗膜后二抗羊抗鼠-HRP(WE0393)1：10000稀释，室温40 min，ECL(WE0308)曝光。
D：一步法WB： GST鼠单抗(WE0352)2.5ug 室温孵育40min ， ECL(WE0308)曝光。

常见问题及解决方法：

问题	可能原因	解决方案
信号太弱或者 看不到条带	蛋白上样量太少	进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。
	蛋白转膜效率太低	优化转膜时间或者电流，确保转膜时膜与胶之间没有气泡。
	一抗亲和力较低	增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗 体浓度可以增加信号
	一抗亲和力较低	对于低亲和力抗体来说，减少洗膜时间可以增加信号。由每次10 分钟，减少到每次5分钟可以增加信号。
背景偏高	一抗使用过量	减少一抗的使用量。
	一抗有非特异性结合或者 与封闭试剂有交叉反应	使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。
	洗膜时间太短	增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。
	曝光显影时间过长	减少曝光时间。如果信号和背景都高，可以等待一段时间 ，等背景信号减弱后，再进行曝光。
	容器或者试剂被污染	每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套，使用清洁的镊子处理膜。

储存条件：2～8℃保存，避免冷冻

北京现货一步法快速WB试剂盒(鼠源一抗)销*(代"售")极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·AP标记山羊抗兔IgG(H+L)
编号：WE0391
英文名称：Goat Anti-Rabbit IgG, AP Conjugated
规格：100μl
本产品为碱性磷酸酶标记的经亲和纯化的山羊抗体，特异识别兔IgG，对其他种属IgG无明显交叉反应，检测灵敏度高，本底低，可用于Western Blot和ELISA检测。AP即碱性磷酸酶，可以催化BCIP/NBT等底物显色或催化适当的化学发光试剂产生化学发光。

免疫原：兔IgG
缓冲液：0.01M Tris-HCl，0.25M NaCl，50%甘油，pH8.0
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
应用范围：WB(1：2000-10000)、ELISA(1：2000-20000)

·新型固定组织基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0172
英文名称：NewPurify FFPE DNA Extraction kit
规格：50次
  本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋组织中有效纯化基因组DNA。本品使用专门优化脱蜡剂和裂解液，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，不涉及有机试剂二甲*，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除游离DNA的福尔马林交联，有效提高DNA的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到吸附膜上，抑制剂通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。同时配置高效微量吸附柱，洗脱体积可低至20μl。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型、二代测序和药物基因组学研究等。
  从福尔马林固定、石蜡包埋样本中分离的DNA分子量通常低于新鲜或冷冻样本中的DNA。DNA片段化的程度取决于样本类型、储存时间以及固定的条件。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩)	13ml
Buffer GW2(浓缩)	15ml
Buffer EB	10ml
Buffer DS	10ml
蛋白酶K	25 mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
离心吸附柱DF及收集管	50套
离心管(L-1.5ml)	50个

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、获得样品后，要尽快将样品在4%-10%的福尔马林中固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久(＞1年)则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。
2、确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制蛋白酶K 的作用。
3、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，以免影响其活性。
4、第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于56℃水浴重新溶解。
6、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GL前加入2μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。
7、实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。

操作步骤：

石蜡包埋样本
1、用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5-10μM的薄片。
2、取约1×1cm2的切片(共约3-8片切片)置于离心管(自备)中，加入160μl Buffer DS，涡旋震荡10秒。短暂离心将样本收集到管底。56℃孵育3分钟，水浴锅中取出后静置，降至室温后进行下一步操作。
注意：如果样品表面暴露在空气中，最初的2-3片弃掉不用。
3、上述管中加入180μl Buffer GTL，涡旋震荡混匀，12000rpm离心1分钟，溶液分为两层。取20μl 蛋白酶K 加入到下层溶液中，移液器小心吹吸混匀。
4、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。12000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取下层的水相于新的离心管中。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
3)如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置2分钟。

福尔马林等固定液中的样本
1、取约20 mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μl 10mM PBS(PH7.4)，涡旋振荡，12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，弃上清，重复3次。
2、上述管中加入180μl Buffer GTL，20μl 蛋白酶K ，涡旋震荡混匀。
3、56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)此步骤的目的是修复由甲醛变性的核酸，孵育的温度过高或时间过长可能造成DNA断裂，产生DNA碎片。
2)56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
4、12000rpm离心1分钟，使用200μl枪头沿管壁小心吸取上清到新的离心管中。
注意：如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置2分钟。
5、加入200μl Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入200μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即充分混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
3)如果需要对多个样品进行操作，可以将Buffer GL和无水乙醇事先混匀后加样。
6、将步骤5所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱DF中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应。
10、将吸附柱置于一个新的1.5ml收集管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-100μlBuffer EB或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。

储存条件：室温(15～30℃)。


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BL1429 20×TBS
生理盐水(两栖动物专用,无菌)   500ml
L-谷*酸*盐 Microcosmic salt tetrahydrate 6382-01-0
9048-46-8 Albumin BovineⅤ  牛血清白蛋白Ⅴ(不含脂肪酸)
CYB162027 羊抗兔IgG(抗血清) 0.5ml
BES缓冲液(pH7.2)  1mol/L 50ml
91510-62-2 D-(+)-Galacturonic acid D-半乳糖醛酸
SJ0325 Glyphosphate 草甘膦
BTN130967 预混型丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")干粉(19:1) Premixed Acr-Bis Powder
六*异丙醇 Tetraethylammonium iodide 920-66-1
磷酸*二* D-Luciferin 3279-54-7
PY02-017  三糖铁琼脂(TSI)  250克  
*霉素 Imidazole 56-75-7
BFD069 鸡禽流感抗体检测卡
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ARB13651 兔子雌二醇(E2)定量分析 Rabbit estradiol,e2 ELISA KIT
5-*-2-脱氧胞苷 2-FDC 1022-79-3
BTN90902 细菌总蛋白质微量提取试剂盒 Bacterial Total Protein Miniprep Kit
柠檬酸* 1,3-Dihydroxynaphthalene 6132-04-3
ARB12182 大鼠白细胞介素18(IL-18)Elisa方法检测 Rat interleukin18,IL-18 ELISA KIT
邻*二甲*(代"酸")二(2-甲氧基)乙酯 5-Fluorocytosine 117-82-8
ARB12423 大鼠柠檬酸合酶(CS)ELISA代测服务 Rat citRate synthase,cs ELISA KIT
ARB10569 人再生基因蛋白IV(REG-4)elisa测定使用说明书 Human regeneRating gene Ⅳ,reg-4 ELISA KIT
硫*(代"酸")鱼精蛋白 HATU 53597-25-4
即用型姬姆萨染色液 Giemsa stain  100ml|500ml|2L
59-02-9 Vitamin E 维生素E 粉末
56-75-7 *霉素 ChloramphenicoL
ARB12450 大鼠*调磷酸酶(CAN)代做ELISA实验 Rat calcineurin,can ELISA KIT
BL1393 SABC山羊IgG-FITC kit
PY04-059  抗生素液  5ml/支×10支  每支添加于90mlCN琼脂培养基基础中，用于铜绿假单胞菌检测与计数-滤膜法
ARB11414 人结肠癌抗原(CCA)elisa检测操作说明书 Human colon cancer antigen,cca ELISA KIT
BTN130666 尿嘧啶切刻酶 Uracile Nicking Enzyme
葡萄糖检测试剂盒(邻甲**(代"胺")比色法)   100T
ARB10387 人可溶性CD40配体(sCD40L)elisa检测说明书 Human soluble cluster of differentiation 40 ligand,scd40l ELISA KIT
甘*酸叔丁酯盐*(代"酸")盐 DEPBT 27532-96-3
DAPI染色液(5ug/ml)   10ml|50ml
乙二醇双(2-*基乙基)四乙酸 N-Acetyl-L-Valine 67-42-5

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