北京现货SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/

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名称：北京现货SABC免疫组化试剂盒(小鼠IgG)(FITC荧光/DAB显色)特价促销
编号：QN1220
规格：100T-200T
英文名：SABC(Mouse IgG)- FITC(POD) Kit
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG来源的免疫组化实验.提供DAB及FITC两种显色选项。

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)—————————————10ml
Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液-—————————100ul
SABC-FITC浓缩液-————————————100ul
SABC-POD浓缩液—————————————100ul
稀释液—————————————————30ml
20×DAB显色液A—————————————1ml
20×DAB显色液B—————————————1ml
抗荧光衰减封片剂————————————10ml

操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)
1、切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC，可省掉此步)。蒸馏水洗3次。
2、热修复抗原：将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)，电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
3、滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
4、用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
5、根据使用量，用稀释液将bio-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul bio-羊抗小鼠IgG浓缩液,混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗小鼠IgG工作液，20-37℃ 处理30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。如果用荧光观察，请接步骤6、7，如果用DAB显色，请直接转至步骤8。
6、根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃，30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
7、滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
8、根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
9、DAB显色:根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B，混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10、苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞爬片：常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5%Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2(如果用FITC，刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次，下接上面第4步。
对于冰冻切片：固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。

注意事项：
1、如果用DAB染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
2、如果用FITC观察背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗涤2次，然后封片观察。
3、因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。

储存条件：-20℃

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·40%Acr/Bis(19:1)制胶液
编号：QN1087
英文名称：40% Acrylamide/Bis Solution, 19:1
规格：100mL|500mL
储存条件：4℃避光，有效期一年

·TES(三羟甲基甲胺基乙磺酸)
编号：QN0128
英文名称：TES ,Free Acid
规格：5g
本品三羟甲基甲胺基乙磺酸(TES)是生物缓冲剂。

别名：2-[(三(羟甲基)甲基)*基]-1-乙磺酸;TES
CAS号：7365-44-8
分子式：C6H15NO6S
分子量：229.25
储存条件：室温
纯度：≥99%(滴定)
性状：白色结晶性粉末
溶解性：溶于水 熔点：225℃(dec.)
有效pH范围：6.8-8.2

·羧苄青霉素*
编号：QN0101
英文名称：CarbeniClllin disodiu*(代"m")
规格：10g
本品抗菌谱为革兰氏阴性和阳性细菌，假单胞菌属，可用于配制细胞培养基。

CAS：4800-94-6
分子式：C17H16N2O6SNa2
分子量：422.37
储存条件：2～8℃
纯度：750mcg/mg
性状：白色粉末
别名：羧苄青霉素二*盐;羧苄青霉素*;羧苄青;卡比西林

种青霉素衍生物类抗生素，可以抑制革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌，现已经广泛地用于替代*苄青霉素，能够有效的减少卫星菌落的产生。同时，在植物转化中，用于在细菌与植物组织共培养之后杀灭农杆菌。推荐工作液浓度：0.1-30µg/ml。

·木瓜蛋白酶
编号：QN0495
英文名称：Papain
规格：25g
本品用于抗体Fab片段的制备以及细胞分离。水解蛋白质能力强,但几乎不能分解蛋白胨。

别名：番木瓜酶;木瓜酶
CAS号：9001-73-4
分子式：21kD
酶活：80万U/g
性状：为乳白色至微黄色粉末，具有木瓜特有的气味,稍具有吸湿性。
溶解性：易溶于水，甘油，不溶于一般的有机溶剂。
储存条件：2～8℃

单位定义：25℃，pH6.2，每分钟催化分解1μmolN-*甲酰-L－精*酸乙酯(BAEE)的酶量定义为一个酶活单位。

木瓜蛋白酶是一种能水解多肽、酰胺和酯的酶。其分子由212残基的折叠多肽键组成。微有吸湿性。对光敏感。不完全的溶于水和甘油，几乎不溶于多数有机溶剂。

酶促反应：
裂解Arg-、Lys-、Phe-、X*基酸。模型底物为*甲酰精*酸乙酯(BAEE)、N-*甲酰-L-精*酸对硝基*(代"*")胺(N-α-Bz-L-Arg-4-NA)、苄氧羰酰缬*酰甘*酰精*酸对硝基*(代"*")胺(Chromozym TRY)。

激活剂及抑制剂：
激活剂有半胱*酸(Cys)、谷胱甘肽(GSH)、EDTA、还原剂、*化物。
抑制剂有汞(Hg2+)、其他重金属、碘乙酸、N-对基顺丁烯二。


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·通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)
编号：QN0951
英文名称：Universal RT-PCR Kit(M-MLV)
规格：25T|50T|100T
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配制的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。

莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶(M-MLV RT)是一种RNA依赖的DNA聚合酶，能使mRNA(>5kb)转录为cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相对于禽成髓细胞瘤病毒反转录酶较弱，更适合用来反转录较长的mRNA。M-MLV RT应用于以RNA为模板合成cDNA的第一条链。

注意：M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反转录酶，因此要得到和用AMV 反转录酶一样产量的cDNA需加入更多单位的M-MLV反转录酶。

使用方法
1)使用方法简介以用2mg总RNA为例。在无RNase离心管中，加入0.5mg引物至含总RNA的样品中，总体积不大于15ml。70℃，5分钟打开模板链形成的二级结构。立即放于冰上降温防止二级结构恢复，随后短暂离心使液体集中在离心管底。
2)加入以下成分到已退火后的引物-模板混合物中。
注意：不要改变引物的加入比率。
M-MLV 5×Reaction Buffer——————————————————5ml
dATP，10mM——————————————————————————1.25ml
dCTP，10mM——————————————————————————1.25ml
dGTP，10mM——————————————————————————1.25ml
dTTP，10mM——————————————————————————1.25ml
Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor—————————25 units
M-MLV RT———————————————————————————200 units
无核酸水至最后体积——————————————————————25ml
3)轻轻混匀离心管，如果使用随机引物在37℃孵育60分钟，其他引物则42℃孵育。延伸温度在37～42℃之间最佳。
4)M-MLV RT 用于合成cDNA的第一链。往后的合成则需要根据需要自行设计引物再次合成。

M-MLV RT 5×Reaction Buffer组成：
250mM，Tris-HCl(PH 8.3 室温下)
375mM，KCl
15mM，MgCl2
50mM，DTT

储存条件：-20℃，避免经常冻融。


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