KFS199型Caspase 3荧光法检测试剂盒(AFC)说

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名称：KFS199型Caspase 3荧光法检测试剂盒(AFC)说明书
编号：KFS199
产地：国产|进口
规格：20T|50T|100T
英文名：Caspase-3 Fluorescence Metric Assay
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-3 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3 为关键的执行分子，与DNA 断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-3 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它被激活，活化的Caspase-3 由两个大亚基和两个小亚基组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase-3 荧光检测试剂盒就是将caspase-3 序列特异性的多肽偶联至发色基团。当底物被Caspase-3 剪切后，发色基团即游离出来，可通过荧光酶标仪测定其荧光强度（激发波长=485nm,发射波长=535nm）。

注意事项
1. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-3 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-3 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织50~100mg，以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求，因为Caspase-3 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的RFU 值偏低，可以通过适当延长反应的时间，如果值还是不高，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

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·一氧化氮检测试剂盒(荧光探针法)
编号：KFS313
规格：100T
本荧光探针适合于检测细胞内的一氧化氮水平，可以进行实时检测。如果收集细胞后再装载探针，通常至少可以检测100 个样品。

DAF-FM DA 即3-Amino,4-aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate ， 也称DAF-FM diacetate 或4- Amino,5- aminomethyl-2’,7’-difluorescein, diacetate。DAF-FM DA 是最新一代用于一氧化氮定量检测的荧光探针，比以前比较常用的一氧化氮荧光检测探针DAF-2 diacetate 有多方面的改进。首先，DAF-FM DA 和DAF-2 diacetate 相比，最后和一氧化氮反应形成的荧光产物受pH 值的影响小，在pH 值大于5.5 时不受pH 值的影响。其次，DAF-FM DA 和DAF-2 diacetate 相比，前者产生的荧光更加稳定，不容易淬灭，这样更加便于检测。另外，DAF-FM DA 和DAF-2 diacetate 相比，前者对一氧化氮的检测灵敏度更高，相同条件下检测灵敏度可以提高接近2 倍，最低检测浓度可以达到3nM。

DAF-FM DA 可以穿过细胞膜(cell-permeable)，进入细胞后可以被细胞内的酯酶催化形成不能穿过细胞膜的DAF-FM 。DAF-FM 本身仅有很弱的荧光，但在和一氧化氮反应后可以产生强烈荧光，激发波长为495nm，发射波长为515nm。DAF-FM DA 检测一氧化氮的机制可以参考上图。任何可以检测fluorescein 的仪器，包括荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计或荧光酶标仪都可以用于该荧光探针的检测。右图为DAF-FM 在不同浓度一氧化氮存在时的发射荧光扫描图谱(fluorescence emissionspectra)。DAF-FM DA 的分子量为496.4，分子式为C25H18F2N2O7，HPLC 分析纯度大于98%。本DAF-FM DA 为溶解于DMSO的淡黄色溶液，浓度为5mM。


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·核转位分析试剂盒(单分子转位)(FM法)
编号：KFS101
规格：100T
NF-κB是一个多向性核转录调节因子,可调节细胞因子、趋化因子、粘附分子、生长因子、免疫受体、氧化应激相关酶、转录因子、急性时相蛋白等基因的表达,功能涉及相应的许多生理、病理过程。

DAPI 是一种蓝色核酸染料，优先染dsDNA，DAPI 表现为可集中结合在DNA 双链的AT 小沟，结合后的DAPI 荧光会发生20倍增强。同时，DAPI 也可以结合RNA，与DNA 不同，一般认为DAPI 结合于RNA 的AU 区。DAPI/RNA 的复合体（500nm）有比DAPI/dsDNA 复合体（460nm）更长的荧光波长。DAPI 是一种常用的多色荧光技术中的核复染剂。

NF-κβ作为一种广泛存在的转录因子，被激活由胞浆转入胞核，从而参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡、肿瘤发生等。可以将细胞核和NF-κβ分别用DAPI 和FITC 染色，FlowSight 可观察每个细胞是否发生NF-κβ核转位，并量化分析NFkB 核转位程度以及发生核转位细胞的比例。

储存：4℃避光，有效期12个月。


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·端粒酶活性实时定量PCR法检测试剂盒(人)
编号：KFS308
规格：20T
端粒是真核生物染色体末端特殊的DNA-蛋白结构，含多个重复序列（5’-TTAGGG-3’），端粒结构的形成和功能的维持需要端粒结合蛋白的直接或间接参与。端粒酶是细胞体内一种核糖核蛋白复合体，是由RNA 和蛋白质亚基组成的一种特殊的逆转录酶，其可以利用自身的RNA 模板合成末端DNA，并添加到染色体末端以克服末端序列的丢失，从而使细胞获得增殖能力。

端粒酶蛋白催化亚基（TERT 或TRT）具有反转录酶的主要特征，其表达在正常细胞中受到抑制，研究表明，TERT或TRT 的表达与端粒酶活性的表达一致，与端粒酶的活化程度密切相关。Wisman 等在人卵巢癌中利用逆转录PCR 检测hTERT 的mRNA 的表达，并采用TRAP 法检测端粒酶活性，结果证实二者均存在于恶性肿瘤中并且表达模式相同。基于上述原理，我司实时荧光定量PCR 端粒酶检测试剂盒通过检测TERT 的mRNA 表达水平来间接反应端粒酶的活性。

实时荧光定量PCR（SYBR Green Real-time PCR）方法以其卓越的快速性及定量性被广泛应用于科研领域，使用本试剂盒可以准确简便地进行mRNA 的表达分析。试剂盒采用SYBR Green qPCR Master Mix 为荧光实时定量PCR 和Two-Step 荧光实时定量PCR 设计的最优反应体系，并结合特异性的细胞端粒酶催化亚基基因TERT 引物，简化实验步骤和提高实验效率。Master Mix 含有Maxima Hot Start Taq DNA 聚合酶、dNTPS、进行优化处理的PCR 反应缓冲液以及SYBR Green 染料。使用Hot Start Taq DNA 聚合酶，为PCR 反应提供了更高的产量和灵敏度、特异性，能够检测低至10 个拷贝的目的基因。

本试剂盒可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对细胞基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。只需加入样品DNA 模板，反应即可进行。

备注：由于对端粒酶进行检测的所有方法都不能完全定量的检测细胞端粒酶的活性，同时TERT 基因或者蛋白的表达与端粒酶之间的间接关系准确性有待于进一步研究，望客户根据实际选择使用。

适应于大多数的Real-time PCR 扩增仪，包括Applied Biosystems，Eppendorf，Corbett，Bio-Rad，Roche，杭州博日（Line-GeneBioer）等品牌的PCR 扩增仪。

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