BTN100867型SDS-PAGE浓缩胶配胶液库存

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百奥莱博专业生产销*(代"售")BTN100867型SDS-PAGE浓缩胶配胶液库存，我公司供应的分子生物学试剂品类齐全，且具有优势价格，欢迎新老客户垂询订购。

名称：BTN100867型SDS-PAGE浓缩胶配胶液库存
英文名：SDS-PAGE Stacking Gel Buffer
产地：国产|进口
编号：BTN100867
规格：250mL
本产品专门用于配制非联续SDS-PAGE胶的浓缩胶，其浓度为4×，配胶时即开即用，非常方便。

储存条件：常温运输、4℃保存，有效期一年。

欲咨询购买BTN100867型SDS-PAGE浓缩胶配胶液库存，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：

·SB培养基
编号：BTN100822
英文名称：Super Broth Medium，Powder
规格：250g
SB培养基所含的Peptone和Yeast Extract分别比LB高220%和300%。同样培养条件下能得到更多菌体，常用于质粒制备和蛋白质表达。配制一升液体培养基需要25g本产品。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

·非冻型细菌RNA保存液
编号：BTN80601
英文名称：RNAhold Bacteria RNA non-freezing preservation solution
规格：100mL
细菌用传统的RNA提取方法提取到的细菌RNA样品用于细菌基因表达谱研究时，不可避免地会遇到的一个问题，那就是得到的RNA材料并不能准确反映取样时细菌RNA的真实表达水平，原因之一是细菌RNA的正常衰变，细菌RNA的半哀期非常短，一般只有几分钟，哪怕是经过短暂的离心弃培养基处理过程，细菌RNA水平都会发生巨大改变。另一原因是细菌对环境改变的反应非常迅速，温度、密度、离心力等条件的变动都会导致细菌基因表达的迅速改变。上述两因素的叠加就会使实际得到的RNA 表达谱与真实的RNA表达谱之间有巨大的误差，所以传统的处理方法不适合于细菌RNA表达谱研究。为解决此问题，本公司特推出本产品。

产品特点：
1. 能快速渗透到液体培养基中的细菌内，抑制 RNA分子的降解或表达谱改变。
2. 操作简单，直接将本产品和液体样品按比例混合即可。
3.适用于各种细菌(包括革氏阳性和革氏阴性)，也适用于其他微生物样品，如真菌和藻类等。
4. 重复性好，效果跟进口同类产品相当。
5.处理的样品可直接用于细菌总 RNA提取，也可以长期保存。

储存条件：常温运输及保存，有效期两年。

使用方法：
1. 计算需要处理的液体细菌的体积。
2. 标记一个干净离心管，加入1/6体积的本产品。比如：如果需要处理的液体细菌的体积为600μl，则需要加入100μL本产品到收集管中。
3.预热装有本产品的离心管，使其温度跟待处理样品一样。如果是37℃培养的细菌，则预热温度为37℃。
4.快速将样品转移到离心管中，震荡5秒钟。
5.室温放置5分钟。
6. 8000-10000g室温离心 3～5分钟，弃上清液。
7.细菌沉淀可以直接用于总 RNA提取或放-80℃长期保存。


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·核酸外切酶III
编号：BTN120420
英文名称：Exonulease III
规格：2500U
核酸外切酶 III具有从双链DNA的3´-OH末端降解生成5´-单核苷酸的3´→5´外切酶活性。本酶对双链DNA具有高度特异性，能降解平滑末端、3´凹陷末端及有切口的DNA，但是不能降解3´-突出末端。所以，可以用产生不同末端的限制酶通过双重降解后，利用Exonuclease III的3´→5´的外切酶活性，从一端降解，得到互补的单链DNA和5´-P单核苷酸。与核酸酶相比，本酶的碱基特异性较小，如在富含GC的位置上，由于反应停止的机率较低，可用于DNA的Deletion制作。

产品用途：
➤ 通过部分降解双链DNA片段，产生一部分单链DNA片段，作DNA聚合酶的底物(生成的DNA可用于双脱氧法序列分析)。
➤与单链特异性核酸酶(S1 Nuclease或Mung Bean Nuclease)合用制作DNA缺失片段。本酶对双链结构DNA具有高度特异性，对于双酶切DNA片段(例如Eco R I-Pst I Fragment)能制作单向(Eco R I方向)缺失的DNA。
➤ DNA-蛋白质相互作用分析。

产品组成：

 

成分	规格
核酸外切酶200U/μL	12.5μL
10×Buffer	1ml
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，半年以上长期保存时请在-80℃冷冻保存。

贮存Buffer：Tris-HCl(pH8.0)25mM，KCl 50mM，DTT 0.5mM，Glycerol 50%

反应Buffer(10×)：Tris-HCl(pH8.0)500mM，MgCl2 50mM，DTT 10mM。

活性定义：以限制酶处理的小牛胸腺DNA为底物，在37℃、pH8.0的条件下，30分钟内产生1nmol酸可溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

纯度
1．50U的本酶和1μg的Closed circular(RF I)pBR322 DNA在37℃下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
2．50U的本酶和1μg的pBR322-Pst I分解物在37℃下反应30分钟，DNA的电泳谱带不发生变化。


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·柱式真菌RNA提取试剂盒
编号：BTN80804
英文名称：Fungal RNA Column extraction kit
规格：50次
本试剂盒是在本公司真菌RNA提取试剂盒(BTN60305)基础上改进的柱式产品，跟真菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点：
1. 柱式操作，更加简单快捷，整个过程只需要约30分钟。
2. RNA 纯度高，OD260/280一般都在2.0左右，可直接用于RT-PCR、Norther杂交、microarray hybridization、cDNA 合成等。
3. RNA产量高，一般在 20-70μg/mL 酵母培养物(约2.0 ×107个细胞)。
4. 非酶细胞破裂法，适用于各种形态和各个种属的真菌及革兰氏阳性细菌，包括 Candida albican、Saccharomyces cerevisiae、Schizosaccharomyces pombe 、 Pichia pastoris 、Bacillus subtilis、Staphylococcusaureus等。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	20ml
溶液B	25ml
溶液C	75ml
溶液D	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 将50mg左右的干菌丝(或100mg左右的鲜菌丝、或适当数量的真菌菌落)转移到 1.5mL塑料离心管中。如果是液体真菌培养物，则直接将1-10mL液体真菌在 1.5mL塑料离心管中 12000～15000g离心 1分钟，并弃尽液体培养基(可以分多次离心)。
2. 加入0.4mL溶液A 并充分吹打混匀。如果 A溶液存放时产生沉淀，请置于65℃融化，用前充分摇晃均匀。
3. 加入0.4mL溶液B，剧烈振荡 30秒。
4. 65℃保温 5分钟。
5.室温 12000～15000g离心 3～5分钟，转移上清到一干净的1.5mL塑料离心管中。
6. 再加入0.1mL溶液B和0.1mL自备*仿，振荡混匀 30秒。
7.室温 12000～15000g离心 3～5分钟，转移上清到一自备的、干净的5mL塑料离心管中。
8. 加入相当于上清 3倍体积的溶液C(约1.2-1.5mL)和1倍体积的溶液D(约0.4-0.5mL)，充分混匀。
9. 将混合液(约2.5mL)分 3-4次转 移 到离 心 吸 附 柱中 。 每次13000-15000g室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
10. 用 0.5mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
11.一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品 OD260/280 比值不高，可以再用 0.5mL 通用洗柱液重复此步一次。
12.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响 RNA的使用。
13. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入30-100μL RNA 洗脱液。
14.室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
15. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414 ，2000)。 如 果是简 单 检 测 ，可以使 用 TAE或SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9:558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以最好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用 TBE进行 RNA电泳，因为TBE 所含硼*(代"酸")是研究多糖的经典方法----硼*(代"酸")络合法中的关键成分，硼*(代"酸")通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成 RNA分子内或RNA分子间的络合复 合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组 DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼*(代"酸")与RNA的数量比例有关，而 RNA样品中污染的其他多糖也会参与此反 应，使硼*(代"酸")对 RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对 RNA电泳的影响 没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，最好是避免使用。
16. RNA产量产率测定：
 将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/细菌用量)。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%。
17. RNA 纯度测定：
 无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/*仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用我公司的DNA Scavenger和PS Scavenger 去除。测 OD时 RNA 不能过度稀释使 OD 读数低于仪器的有效范围。

疑难解答：
Q：为何从酵母中提取的总 RNA 有 3 条小带？
A：它们分别是70bp左右的tRNA，120bp左右的5S RNA，160bp左右的5.8 S RNA。
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组 DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使 RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用 TAE或超快电泳液 SuperBuffer-2，最好不要使用 TBE缓冲液，因为TBE中的硼*(代"酸")能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用手册进行操作。

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