BTN130634型人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶哪里买

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名称：BTN130634型人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶哪里买
产地：国产|进口
编号：BTN130634
品牌：百奥莱博
英文名：Apurinic-Apyrimidinic Endonuclease I
人源脱嘌呤/脱嘧啶(AP)核酸内切酶APE1，也称为HAP1或Ref-1，与大肠杆菌外切酶III蛋白具有同源性。APE 1水解断裂脱嘌呤/脱嘧啶位点5´端的磷酸二酯键，产生单链DNA断裂，留下3´羟基和5´脱氧核糖磷酸末端。除具有AP核酸内切酶活性外，据报道APE1还具有弱的DNA 3´二酯酶、3´到 5´外切酶和RNase H活性。除 DNA修复活性外，APE 1还能通过一种氧化还原机制，体外调控许多转录因子的DNA结合活性。作为这个功能的一部分，APE 1已被证实能刺激Fos-Jun异源二聚体、Jun-Jun同源二聚体、Hela细胞AP-1蛋白以及包括NF-kB、Myb和ATF/CREB家族成员在内的其它几种转录因子的DNA结合活性。其反应示意图如下：


产品特点：
➤ 单细胞凝胶电泳(彗星试验)，彗星试验的推荐稀释倍数1:10³；
➤ 碱洗脱；
➤ 碱解旋；
➤ 改良切刻翻译。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指在10μl总反应体系中，37℃条件下1小时，能切割20pmol含一个单独AP位点的34 mer寡核苷酸双链所需要的酶量。

AP位点的创建方法如下：37℃条件下，用1单位尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)处理20pmol含一个尿嘧啶碱基的34bp寡核苷酸双链2分钟。

欲咨询购买BTN130634型人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶哪里买，请致电北京百奥莱博科技有限公司，为您提供最全面周到的产品服务，除此之外，我公司正在促销以下产品：
PAGE不连续凝胶电泳缓冲液(5×)   500ml
CYB161030 大鼠IgG(液体-pH7.2PBS)
CYB161022 小鼠IgG(冻干粉)
2x PCR Reagent 
真菌蛋白提取试剂盒 Fungal protein extraction kit  50T|100T
BL0881 兔抗大鼠IgG免疫血清
ARB11969 大鼠c-fos ELISA检测服务 Rat c-fos ELISA KIT
BL1288 1％多聚甲醛
ARB12274 大鼠纤连蛋白(FN)酶标法分析 Rat fibronectin,fn ELISA KIT
F050308 小鼠IgG2a抗体 Mouse IgG2a
F040318 牛IgG抗原 Bovine IgG
PY02-442  改良平板计数琼脂(MPCA)  250克  
BTN130634型人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶哪里买关键词：Apurinic-Apyrimidinic Endonuclease I,BTN130634,人源脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶


·乙酰化牛血清白蛋白
编号：BTN131017
英文名称：Bovine Serum Albumin, Acetylated
规格：400μL
乙酰化牛血清白蛋白可以用作酶的稳定剂或作为一种载体蛋白。本产品为浓度为它是利用经过改良的Gonzalez等的方法制备的，并通过去离子水充分透析除去杂质，无DNA酶及RNA酶活性。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·生物素化的蛋白G
编号：BTN131098
英文名称：Biotin-Protein G
规格：0.5mg
本产品为生物素标记的蛋白G，可用于生物素化二抗的替代物。可以检测或定位位于细胞表面或组织中免疫球蛋白。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·5´末端同位素标记试剂盒
编号：BTN131036
英文名称：DNA 5´End-Labeling Kit
规格：20次
本产品为DNA 5´末端标记系统，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 对粘性末端或平末端的DNA或RNA的5´末端进行高效标记反应。原理如下：


产品特点：
1. 使用本试剂盒之前，不需要对 5´末端的磷酸基团进行去磷酸化处理，因为使用的kinase 能使5´末端的磷酸与[γ-32P]ATP的γ-磷酸进行交换。
2. 合成的单链或双寡核苷酸的5´末端游离的OH基团都能通过Kinase反应被标记(或者只是简单的磷酸化)。
3. 提供的两种反应液使交换反应和磷酸化反应都能高效进行，均能得到大于106 cpm/pmol(5´-end)的比活性。

试剂盒组份：

 

成分	规格
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	20μl
5×交换反应缓冲液	100μl
10×磷酸缓冲液	50μl
Control DNA	20μl
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、交换反应
1. 实验前需自备的试剂：7 M 醋酸铵、100%乙醇、70%乙醇等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的5´磷酸化DNA片段	14μL(≤5 pmoles的5´末端)
5×交换反应缓冲液	5μL
[γ-32P]ATP	5μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

注：5 pmoles的5´末端约等于0.17μg的长100bp的双链DNA。
3. 37℃反应30分钟。
4. 70℃加热5～10分钟使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀时使其终浓度达300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
7.离心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。
注：通过第5～8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP，如要完全将其除去时，乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*酚抽提除去蛋白质时，请在第8 步之后进行。

二、磷酸化反应标记

A. 去磷酸化反应
1. 实验前需自备的试剂：TE 饱和酚/*仿、3 M NaCl 、100%乙醇、70%乙醇、牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	133μL(≤10μg)
1M Tris-HCl，pH8.0	15μL
牛小肠碱性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL)	2μl
灭菌的超纯水	补足到150μL

3. 50℃反应30分钟。
4. 加入150μl的TE 饱和酚/*仿/异戊醇(25：24：1)，充分混匀。
5.离心，取上层(水层)移到另一个微量离心管中。
6. 重复操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(最终浓度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷无水乙醇，-20℃放置30～60分钟。
9.离心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。

B. 磷酸化反应(前反应)
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
自备的DNA片段	20.5μL(≤5 pmoles的5´末端)
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

三、合成DNA 寡核苷酸的标记
1.在微量离心管中制备下列反应液：

成分	加入的体积
Oligonucleotide DNA with free 5´-OH(5～10 pmoles)	≤3μL
10×磷酸缓冲液	2.5μL
[γ-32P]ATP	1μL
T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL)	1μL
灭菌的超纯水	补足到25μL

2. 37℃反应30分钟。
3.下面的操作与交换反应的第4-8 步操作相同。

四、合成DNA 寡核苷酸的标记
当掺入水平很低的时候，需要使用本步骤，即通过体积排阻色谱或过滤试剂盒除去未反应的标记。Sephadex G-50 层析柱(需另购)对于去除未掺入的dNTPs效果很好，它还能大幅减少小于20个碱基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的双链DNA的量。使用之前需要在70℃加热5～10分钟以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 层析柱可以用来纯化长度不小于10个碱基的寡核苷酸。

注意事项：
1.缓冲液可在室温融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混匀。
2. 5×交换反应缓冲液于-20℃冻结保存时会有白色浑浊出现，但不影响反应效果。
3.酶切得到的DNA片段需经乙醇沉淀等方法纯化。
4. 当用于交换反应的DNA在5 pmoles以上(约1,000bp以上)时，标记效率有时会低于106 cpm/pmol。
5. 如果交换反应所用 DNA低于500bp时，标记效率有时会有所降低。
6. 若不进行放射线标记，仅使用本试剂盒做5´末端磷酸化反应时，反应体系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反应时的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。

使用举例：
按照使用方法中交换反应和合成DNA 寡核苷酸的标记的实验操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通过正向磷酸化反应或交换反应标记。各DNA片段的放射自显影结果如下所示：



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