小鼠基因组DNA 基因结构和功能

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小鼠基因组DNA 基因结构和功能由老牌试剂供应北京百奥莱博供货并提供技术支持，本产品用于生化科研试验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多小鼠基因组DNA等基因结构和功能产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：小鼠基因组DNA 基因结构和功能
编号：BTN131033
产地：国产|进口
规格：100μg
品牌：百奥莱博
英文名：Mouse Genomic DNA
本产品为小鼠基因组DNA，是从无疾病小鼠全血中分离到的。利用脉冲电场凝胶电泳测量，90%以上的DNA的大小大于50kb。该DNA适用于Southern blot杂交,基因组分析(包括 PCR)及基因组文库构建等实验。

储存条件：低温运输、4℃保存、有效期一年。

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半二甲*(代"酚")橙 Cellulose acetate layer sheets 19329-67-0
PY02-132  硝酸盐蛋白胨水培养基  250克  
鞣花酸 Fluorescein 476-66-4
BTN130620 Poly(U)聚合酶 Poly(U) Polymerase
ARB10979 人免疫球蛋白轻链λ(λ-IgLC)ELISA检测服务 Human lambda immunoglobulin light chain,λ-iglc ELISA KIT
ARB10214 人β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)elisa检测说明书 Human β-thromboglobulin,β-tg ELISA KIT
4,4"-联吡*(代"啶") HONB 553-26-4
组织线粒体蛋白提取试剂盒   50T|100T
ARB10737 人纤维连接蛋白(FN)含量测试 Human fibronectin,fn ELISA KIT
叔丁基对*二酚 CFSE 1948-33-0
F020208 山羊抗兔IgG抗体 Goat Anti-Rabbit IgG
ARB13234 小鼠淋巴细胞因子Elisa分析 Mouse lymphocyte factor ELISA KIT
ARB13398 羊阶段特异性表面抗原-1(SSEA-1)elisa测定使用说明书 Sheep ssea-1 ELISA KIT
PY04-027  冻干血浆  0.5ml/支×10支  根据要求适量添加，用于血浆凝固酶试验
茚三酮乙醇溶液(0.1%)   100ml
ARB10066 人B细胞淋巴瘤因子3(Bcl3)尿液中含量检测 Human b-cell leukemia/lymphoma 3,bcl3 ELISA KIT
尿胆原定性检测试剂盒(改良Ehrlich法)   100T
F030418 胶体金标记兔抗猪IgG抗体 Rabbit Anti-Pig IgG*GOLD
ARB11572 人基质金属蛋白酶5(MMP-5)含量测试 Human matrix metalloproteinase 5,mmp-5 ELISA KIT
磷酸*法细胞转染试剂盒   100T
小鼠基因组DNA 基因结构和功能关键词：BTN131033,Mouse Genomic DNA,小鼠基因组DNA


·端粒酶重复片段扩增试剂盒(TRAP试剂盒)
编号：BTN111009
英文名称：Telomeric Repeat Amplification Protocol Kit
规格：50次
本品是我司在经典TRAP技术基础上改良而得，专门用于快速测定人类细胞端粒酶的相对活性(需要跟对照样品比较)。端粒酶存在于85-90%的肿瘤组织中，因此通过检测端粒酶活性就能早期诊断大多数肿瘤。目前最常用的检测端粒酶活性的方法就是TRAP，它利用端粒酶能在外加的TS模板DNA的末端添加不同数量的TTAGGG序列这一特点，通过PCR检测延伸产物而高效检测端粒酶活性。原理如下：


产品特点：
1．一站式，提供从细胞裂解到PCR的所有试剂，但不含PAGE和银染试剂。
2．一管式操作，端粒酶延伸和PCR在同一体系中完成，方便快捷。
3．提供改良的、长为150bp的内参和含8个端粒序列的合成端粒，可有效排除PCR假阴性。内参长度远大于TRAP产物，不会干扰结果分析。
4．改良的TS模板和PCR引物，极大降低了引物二聚体的形成。
5．既可用于培养细胞，也可用于实体组织。
6．灵敏度高，最低可以检测到10个肿瘤细胞中的端粒酶活性。

试剂盒组成：

 

成分	规格
TRAP细胞裂解液	10mL
PCR Mix 3.0	1.5mL
合成端粒(PC)	50μL
TS-引物混合物(含内参)	300μL
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、端粒酶的提取
注意：端粒酶是蛋白质和RNA组成的复合体，RNA极容易被降解，因此，提取端粒酶应该跟提取RNA一样，尽量在低温条件下快速操作，并且必须使用RNase-free的耗材，桌面最好用固相RNase清除剂清洁(BTN3090)清洁。
1．对冷冻的实体组织：将50-100mg冷冻组织在液氮中用预冷的研磨器研磨成粉末，再转移到预冷的玻璃匀浆器中，加入200μl预冷的TRAP细胞裂解液，温和手动匀浆数次后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次，然后直接进入第3步操作。为保证裂解效果，可在显微镜下观察。如果组织样品不足50-100mg，可以按比例降低TRAP细胞裂解液的用量。
2．对新鲜的培养细胞和组织：用自备的预冷PBS洗涤105-106个经过胰酶处理的细胞或50-100mg新鲜组织，3000g 4℃离心5分钟，弃上清；加入200μL预冷的TRAP细胞裂解液悬浮细胞或组织。对细胞：涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。对组织：在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟，每间隔数分钟涡旋振荡一次，共5-6次。如果细胞不足1×106或50-100mg，可按比例降低TRAP裂解液的用量。
3．12000-14000g 4℃离心20分钟。
4．收集160μL上清，先取部分用于测定蛋白质浓度，可通过测定215nm和225nm的光吸收得到，计算公式是蛋白质浓度(μg/μL)=0.144×(A215-A225)×稀释倍数，也可使用BCA法测定蛋白浓度。本试剂盒制备的细胞裂解物的蛋白浓度一般在10-750 ng/μL。知道各样品的蛋白浓度后，可用TRAP细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成一样便于比较，然后按10μL/管分装得到至少15管裂解物，放-80℃冷冻保存(可存放一年)。每个样品可取一管进行热灭活(95℃处理10分钟)后再放-80℃冷冻保存，此管将作为该样品的阴性对照。

二、TRAP反应
5．确定每个TRAP反应的细胞裂解物用量：为便于分析比较，每个TRAP反应所用的蛋白量(或细胞数)必须一样。由于细胞裂解物中一般都有高浓度的不明Taq DNA聚合酶抑制物(TRAP失败最常见的原因)，因此最佳结果往往是用稀释10-1000倍后的细胞裂解物得到。建议用一个样品稀释不同浓度做TRAP预实验。
6．在PCR管中按下表设置TRAP反应(50μL反应体系，以A和B两个样品为例)：

成份	A样品管	A阴性 对照管	B样品管	B阴性 对照管	实验 阴性对照	实验 阳性对照
A样品	2μl	-	-	-	-	-
A阴性对照	-	2μl	-	-	-	-
B样品	-	-	2μl	-	-	-
B阴性对照	-	-	-	2μl	-	-
TRAP细胞裂解液	-	-	-	-	2μl	-
合成端粒	-	-	-	-	-	2μl
TS引物混合物	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl	6μl
PCR Mix	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl	25μl
超纯水	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl	17μl

 注：为避免污染，最好等其他样品加完并盖上盖后再加合成端粒。
7．吹打混匀后进行PCR扩增，扩增条件(仅供参考，用户可优化)如下：

步骤	温度	时间
端粒酶延伸	30℃	30min
端粒酶灭活	95℃	5min
PCR(循环35次)	94℃	30s
	55℃	60s
	72℃	30s

三、PAGE-银染检测及结果解读(本试剂盒不含PAGE-银染检测试剂盒)
8．取5μL PCR反应液进行10%非变性PAGE电泳-银染显色实验(需另购本公司PAGE电泳套装和银染试剂盒)。如果背景高(主要是由反应体系中的蛋白成分引起)，可以先进行PCR产物纯化再进行PAGE电泳和银染。
9．跟预期结果(见下表)比较。如果结果跟下表不一致，则需要按具体情况分析原因。

现象	样品管结果	样品阴性 对照结果	实验阴性 对照结果	实验阳性 对照结果
典型TRAP条带 (条带数不限)	有则有端粒酶活性 无则无端粒酶活性	不出现	不出现	不出现
阳性对照的TRAP 条带(仅8条带)	不出现	不出现	不出现	出现
150bp内参	可出现可不出现	出现	出现	出现

 注：本试剂盒所用引物产生的典型TRAP条带最小条带为59bp。

疑难解答：
1．如果样品管有内参带，但没有TRAP条带，可能是端粒酶活性低或者失活。制备细胞裂解物时可在TRAP细胞裂解液中加入1/100体积的RNase抑制剂以抑制RNase活性，并在端粒延伸反应后增加DNA纯化一步，纯化后的DNA再用于PCR。此两步法TRAP需要用户自备DNA纯化试剂和dNTP。
2．如果样品对照管(端粒酶已经灭活)出现TRAP条带，可能是TRAP产物污染，需要使用洁净的PCR管和PCR试管架。样品制备、PCR设置和电泳需在不同房间进行。也可能是端粒酶没有彻底灭活，建议用RNase酶解法或酶解+热灭活法。
3．实验阴性对照管的实验结果中出现TRAP条带，可能是引物二聚体，可采取两步法TRAP，并且将DNA模板加入到70℃预热的PCR Mix3.0中再进行PCR。
4．实验结果不好时，可以直接采取2步法，先做端粒酶延伸和灭活，然后再纯化DNA，用纯化的DNA做PCR。此法需要用户自备dNTP。


小鼠基因组DNA 基因结构和功能关键词：BTN131033,Mouse Genomic DNA,小鼠基因组DNA


·大提柱式细菌RNA提取试剂盒
编号：BTN80905
英文名称：Bacterial RNA Column large-scale extraction kit
规格：5次
本试剂盒是在本公司柱式细菌RNA提取试剂盒(BTN80103)基础上开发的大提升级产品，用于快速从各种常见的革氏阴性和革氏阳性细菌中大量提取总RNA。跟柱式细菌RNA提取试剂盒相比，它具有下列特点:
1. 单次样品处理量大，最多可以处理 30mL细菌培养物。
2. 操作简单快速，一次提取只需要 20分钟左右。
3. 所得 RNA 纯度高，OD260/OD280一般在2.0左右。一般不含基因DNA污染。
4.适用于各种革氏阴性和革氏阳性细菌。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	50ml
大提离心吸附柱	5套
通用洗柱液	100ml
通用预洗脱液	5ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在 50mL塑料离心管中进行的大量提取的。

1.在 50mL塑料离心管中离心收集10-30mL新鲜细菌。注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用最新鲜的、处于对数生长期的细菌。
2. 吸尽液体培养基，加入10mL溶液A，用枪充分吹打细菌沉淀，确保细菌全部裂解，没有块状物。
3. 加入0.2倍体积的自备*仿(10mL溶液A需2mL*仿)，振荡器上充分振荡混均 30秒。
4. 5000-7000 rmp室温离心 3～5分钟。
5. 将上清液(约5-6mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的50mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有 DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下少许上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。
6. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。加入溶液B后，溶液为乳白色。
7. 将溶液转移到离心吸附柱中，5000-7000rpm室温离心 1分钟，弃穿透液。
8. 加 10mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心 1分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加 10mL 通用洗柱液，室温离心 1分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温 5000-7000rpm离心 2分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响 RNA的使用。
11. 加入1mL 通用预洗脱液，5000-7000rpm离心 1分钟。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入1mL RNA 洗脱液。
13.室温 5000-7000rpm离心 2分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. 重复 14-15 步一次，我司的大提离心吸附柱吸附能力较强，一般第二次洗脱还能洗脱较多的RNA。
15. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行 RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
16. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在 OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
17. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用 TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如百奥莱博的RNAload)。

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