单孢子全基因组扩增试剂盒打折促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

百奥莱博专业生产供应单孢子全基因组扩增试剂盒打折促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：单孢子全基因组扩增试剂盒打折促销
编号：BTN100942
规格：30次
英文名：Single Spore Whole Genome Amplification Kit
本产品是用于从单个真菌孢子中扩增全基因组的试剂盒(此产品需自行分离单孢子)。

产品特点：
1.可以直接用孢子进行全基因扩增，避免了提取孢子DNA 过程中的样品损失。
2. 即开即用，不需要单独准备所需试剂。
3.基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超强链取代能力，具有高保真高产量的特点，可以扩增单个孢子基因组达上万倍。
4.适用于各种真菌孢子样品。
5.产物可用于多种后续试验，包括酶切、克隆、文库构建、测序、基因芯片分析等。

试剂盒组成：

 

成分	规格
裂解液	75μl
WGA溶液A	150μl
WGA溶液B	300μl
Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)	15μl
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、破碎真菌孢子细胞壁
1. 将单个孢子转入2.5μl裂解液中，并且在显微镜下用微型针刺破细胞壁，90℃保温10分钟。
2. 加入5μl WGA溶液A和2.5μL超纯水，即可直接用于WGA。

二、WGA反应
1.在上步得到的10μl破碎了细胞壁的孢子样品中(已经加入了5μL WGA溶液A)，加入10μL WGA溶液B，轻柔吹打混合均匀。
2. 加入0.5μl Phi 29 DNA聚合酶(10U/μL)，轻柔吹打混合均匀。
3. 30℃保温3-12小时。最好使用PCR仪进行30℃保温并打开热盖保温。如果采用30℃水浴，最好在样品管中加入30-50μl石蜡油以防水分蒸发，因为30℃长时间的水浴也能使水分蒸发到管壁，从而改变反应体系中各成分的浓度、降低WGA反应效率。如果模板DNA量比较高，WGA三小时即可检测到DNA扩增。
4. 65℃保温10分钟使phi29 DNA聚合酶灭活。注：由于phi29 DNA聚合酶有DNA外切活性，所以最好将其灭活以免干扰后续反应。
5. 立即取3-5μl WGA反应液进行电泳检测扩增效果。注意：WGA缓冲液中不含有甘油和电泳染料，所以需要先加上样缓冲液。
6.扩增的DNA可以用于后续试验或冰箱长期保存。

关于单孢子全基因组扩增试剂盒打折促销的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：

·Baker甲醛*中性固定液
编号：BTN131276
英文名称：Baker Fixative Solution
规格：250mL
本产品主要成分为中性甲醛水溶液和10%*化*。本固定液为组织和细胞化学技术中最常用的固定液之一，适合各种染色方法。本产品固定时间2～4小时，温度0～4℃。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

·KOD DNA聚合酶
编号：BTN101002
英文名称：KOD DNA Polymerase
规格：250U
KOD DNA Polymerase是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3´→ 5´外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6 kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。

产品组成：

成分	规格
KOD DNA聚合酶(5U/μL)	5μl
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	1ml
dNTP mix(10mM Each)	0.1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：1U指75℃条件下，30分钟内使10nmoles的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

使用方法：
一、建议PCR条件(以50μl反应体系为例)

成分	体积	终浓度
模板	-	＜0.5μg
正向引物(10μM)	1μl	0.2μM
反向引物(10μM)	1μl	0.2μM
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	5μL	1×
dNTPs(10mM each)	1μL	0.2mM
KOD DNA聚合酶	0.25-0.5μL(1.25-2.5U)	-
超纯水	补足到50μL	-

注：实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加KOD DNA聚合酶。最好在冰浴上混合PCR各种成分，防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。待各成分充分混匀后，离心数秒，使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。

二、关于
PCR条件的优化
1.质粒或者噬菌体模板(模板量5-20ng，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<1kb	目标DNA<2kb	目标DNA3-4kb	目标DNA5-6kb
Step 1	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 30秒
Step 3	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 30秒
Step 4	72℃ 20秒	72℃ 30秒	72℃ 40秒	72℃ 60秒
Step 5	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta=Tm－5℃

2.基因组DNA和cDNA模板(基因组DNA模板量为50-100 ng，1-2μl cDNA(起始转录用的RNA为500 ng)，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<2kb
Step 1	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20-30秒
Step 3	Ta 15-20秒
Step 4	72℃ 20-60秒
Step 5	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta= Tm - 5℃

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·尿嘧啶糖基化酶抑制剂(UGI)
编号：BTN130647
英文名称：Uracil Glycosylase Inhibitor
规格：200U
尿嘧啶-DNA糖基化酶抑制剂(UGI)分子量为9.5kDa,可以抑制大肠杆菌和其他物种的尿嘧啶-DNA糖基化酶。UGI和UDG以1:1的比例可逆结合。UGI可以分离UDG-DNA复合物。

产品组成：

成份	规格
UDI(2000U/mL)	100μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。


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