BCIP/NBT显色试剂盒报价

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名称：BCIP/NBT显色试剂盒报价
编号：BTN81224
品牌：百奥莱博
规格：100mL
英文名：BCIP/NBT Chromogenic Kit
产地：国产|进口
BCIP即5-*-4-*-3-吲哚-磷酸盐(5-bromo-4-chloro-3-inodlylphosphate)。NBT即四唑淡蓝(Nitro-Blue-Tetrazolium)，为深蓝色无定形微溶物质。当二者存在时，在碱性磷酸酶作用下，NTB被还原形成不溶性的蓝色(在硝酸纤维素膜上)或紫色(在尼龙膜上)沉淀，据此颜色反应来鉴定碱性磷酸酶。该反应的示意图如下：


产品特点：
1．即开即用，省去自配溶液的麻烦。
2．条件经过优化，最低可以检测到0.5fmol的靶分子(在硝酸纤维素膜上)，并且背景低，不需要自己摸索。
3．与硝酸纤维素膜和尼龙膜兼容，也可用于琼脂糖凝胶原位杂交。
4．适用于中等灵敏度检测各种印迹膜检测，包括Southern杂交、Northern杂交、Western blot沉淀、免疫组化等。如果要高灵敏度检测，最好使用ECL 检测。
5．肉眼观察实验结果，直观简单，不需要额外的试剂和仪器。

试剂盒组成：

 

成分	规格
25×BCIP	1ml
25×NBT	1ml
AP缓冲液，10×	50ml
说明书	1份

注意：本产品可以配制100mL BCIP/NBT 显色液，具体使用次数与膜的大小密切相关。

储存条件：常温运输，4℃避光保存，有效期一年。

自备试剂：超纯水、结合有AP 标记的探针或抗体的印迹膜。

使用方法：

一、配制溶液
1．按每cm2 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液的比例计算所需显色液的用量，并按下表的配方配制的所需量的BCIP/NBT 显色液待用。说明：下表以10mL 为例，用户需要根据计算得到的所需显色液体积按比例增减各成分用量。

成分	用量
超纯水	9ml
AP缓冲液，10×	1ml
BCIP溶液	50μl
NBT溶液	50μl

注意：此溶液必须在1小时内使用。
2．用10×AP缓冲液配制跟NBT-BCIP显色液等体积的1×AP缓冲液待用。

二、显色
3．同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的1×AP缓冲液中，脱色摇床上摇晃5分钟。本方法也可以用于琼脂糖凝胶原位杂交，处理方法一样，只是把经过AP 标记探针或抗体杂交的印迹膜改成经过AP 标记探针或抗体杂交的凝胶。
4．同钝头镊子将印迹膜浸入到新鲜配制的BCIP/NBT 显色液中(每cm2 印迹膜需要0.1mL BCIP/NBT 显色液)，室温避光静置显色直到看见所需条带。在硝酸纤维素膜上，条带将呈现蓝色；在尼龙膜上，条带将呈现紫棕色。注意：显色过程中不要摇晃，否则有色沉淀物不容易聚集。高丰度的靶分子可能只需5-30分钟显色，低丰度的靶分子可能需要24小时显色。显色反应一般会在24小时结束，所以显色时间没有必要超过24小时。37℃放置可加速显色反应，缩短显色时间。
5．显色结束后，将印迹膜转移到盛有超纯水的托盘中摇晃以终止显色反应。数分钟后需要换水，共三次。
6．用吸水纸吸干膜上的水分，照相或扫描处理后避光干燥保存印迹膜。对硝酸纤维素膜，如果用二甲*将膜浸湿，则条带会增强约5倍(膜变得透明，使背景变低，条带更明显所致)。
7．如果不避光保存条，印迹膜上的条带会逐渐褪色。硝酸纤维素膜上的颜色不能脱去，如果想脱去尼龙膜上条带的颜色，可以将膜浸入到装在玻璃容器的DMF溶液中，再进行热水浴直到颜色脱去(需要在通风柜中进行)。硝酸纤维素膜上的条带不能脱去。

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乙酰丁香酮 Cytidine 2478-38-8
NF-214 羊抗人C9血清
辅羧酶 Boc-L-Glutamic acid 5-benzylester 154-87-0
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BCIP/NBT显色试剂盒报价关键词：BCIP/NBT显色试剂盒,BCIP/NBT Chromogenic Kit,BTN81224


·脂蛋白纯化试剂盒
编号：BTN130885
英文名称：Lipoprotein Purification Kit
规格：50次

·一站式GST标记蛋白质微量纯化套装
编号：BTN111116A
英文名称：One-Stop GST-Tagged Protein Miniprep Pack(A)
规格：20次
重组蛋白N端的GST谷胱甘肽S转移酶能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，其原理如下：


产品特点：
1．一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达GST 标记蛋白的细菌(酵母、杆状病毒、培养细胞)即可，非常方便。
2．专一性强，一次过柱即可获得纯度高达95%的GST-标记蛋白。
3．只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的GST 标记蛋白。
4．每次可以处理20mL的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5．提供4mL浓度为50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附5-10mg GST 标记蛋白质。
6．本介质可以反复使用多次。

试剂盒组成：

成分	20次(A)	20次(B)
谷胱甘肽-Agarose介质,50%	4ml	4ml
10×PBS缓冲液	100ml	100ml
溶液A	1ml	无
GST洗脱缓冲液成分一	25ml	25ml
GST洗脱缓冲液成分二	约80mg	约80mg
溶菌酶(20KU/mg)	无	30mg
Benzonase(2U/μL)	无	20μl
PMSF(10mg/mL)	0.5ml	0.5ml
6mL层析柱(带筛板)	1套	1套
说明书	1份	1份

储存条件：常温运输和保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需低温运输。收到货后，介质需4℃保存，溶菌酶、Benzonase和PMSF 需-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：
1．每步得到的样品最好都留存少量作为SDS-PAGE分析的对照，在下面描述中就不再提醒。
2．本实验需要用到的1×PBS缓冲液可用自备的超纯水稀释本试剂盒提供的10×PBS缓冲液而得。PBS缓冲液用超纯水稀释后极其容易长细菌，注意防止污染。
3．GST 洗脱液的配制方法是将约80mg GST 洗脱液成分二干粉全部加入到GST 洗脱液成分一溶液中，摇晃直到干粉全部溶解即得GST 洗脱液，分装成小份放-20℃保存，每次用一管。

一、重组蛋白的表达和细菌收集
1．37℃振荡培养20mL含表达质粒的细菌到OD600=0.6-0.8。
2．加IPTG 到终浓度为0.1mM，30℃振荡培养3小时或22℃振荡培养8小时(或过夜)。
3．4℃ 5000g离心10分钟收集20mL表达菌液，弃上清。
4．用1×PBS缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000g离心10分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

二、细胞裂解
5．如果用本产品A型，用1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(1mL 1×PBS缓冲液+50μl溶液A+ 25μl 10mg/mL的PMSF溶液)重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选1K-10K 频率处理15次，每次20秒，间隔1分钟(必需放置在冰上)。裂解物不能粘稠，否则会堵塞层析柱。
6．如果用本产品B型，在1mL冰浴的新鲜配制的细胞裂解液(在20mL 1×PBS缓冲液中加入所有30mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成1mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置)中加入25μl 10mg/mL的PMSF溶液和1μl Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置30分钟，得到细菌裂解物。
7．将超声或酶法细胞裂解物在13000 g 4℃离心10分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性GST 标记蛋白。

三、层析柱的制备和GST蛋白纯化
8．摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中(介质用量需要根据GST蛋白产量决定，100mL菌液一般使用200μL介质即可)。下列步骤各溶液的用量均针对200μL介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9．用5mL预冷的1×PBS缓冲液洗柱。
10．将第7 步得到的上清液(含可溶性GST标记蛋白)上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于SDS-PAGE电泳。GST和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在0.2-1mL/分钟即可。如要提高GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合30分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11．用0.5-2mL 1×PBS缓冲液洗柱，收集并保存穿透液(含杂蛋白)。
12．用0.2-1mL GST洗脱液洗柱，收集并保存穿透液(含GST 标记蛋白)。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在4℃放置，需立即用于后续处理(如浓度测定或SDS-PAGE电泳)或-80℃长期放置。
13．对收集的2种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或SDS-PAGE分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用Bradford法或OD 检测法(1 OD280 约等于0.5mg/mL蛋白)测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于GST的分子量为26 KD，所以在SDS-PAGE胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大26 KD。

附：GST柱的恢复(本试剂盒不含所需试剂)
1．用3倍体积的6M盐*(代"酸")胍处理柱子10分钟。
2．用3倍体积的超纯水处理柱子10分钟。
3．用3倍体积的缓冲液一(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH8.5)处理柱子10分钟。
4．用3倍体积的缓冲液二(0.5M NaCl，0.1M Tris·HCl，pH4.5)处理柱子10分钟。
5．再重复3-4 步两次。
6．用3倍体积的超纯水处理柱子3次。
7．用3倍体积的1×PBS缓冲液处理柱子2次。
8．堵上漏口，加3倍体积的1×PBS缓冲液待用。若长时间不用，则第7步和第8步的1×PBS改成20%的乙醇。


BCIP/NBT显色试剂盒报价关键词：BCIP/NBT显色试剂盒,BCIP/NBT Chromogenic Kit,BTN81224

ARB10248 人乙酰肝素酶(HPA)elisa检测 Human heparanase,hpa ELISA KIT
葡聚糖凝胶G-25 Sulfamerazine 9041-35-4
丽丝胺罗丹明B D-Phenylalanine methyl ester hydrochloride 3520-42-1
肌苷酸二* Floridin 4691-65-0
*化镧 2,4-D 10025-84-0
ARB12766 小鼠NA-K-ATP酶定量分析 Mouse na-k-atp ELISA KIT
邻*二甲*(代"酸")** Proclin 300 827-27-0
*化*溶液(1mol/L,无菌)   500ml
F030232 HRP标记小鼠抗猪IgG抗体 HRP*Monoclonal Mouse Anti-Pig IgG
28-表高油菜素内酯 Potassium formate 80483-89-2
苏丹黑B染色液   2×50ml|2×100ml
PY02-359  沙氏葡萄糖琼脂培养基  250克  

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