BTN130816型Real-Time PCR稀释液怎么卖

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BTN130816型Real-Time PCR稀释液怎么卖的品牌：百奥莱博，是优质的核酸扩增(PCR)产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多Real-Time PCR稀释液等核酸扩增(PCR)产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：BTN130816型Real-Time PCR稀释液怎么卖
品牌：百奥莱博
规格：1mL
编号：BTN130816
英文名：Diluent for Real-Time PCR
产地：国产|进口
本制品是制作标准曲线时用于梯度稀释DNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或模板RNA如果用水或TE稀释时，由于受Microtube的吸附作用等原因的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精度降低。使用本制品稀释DNA或RNA样品时，即使稀释至低浓度也能够准确稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

注意事项：为避免样品间的交叉污染，最好适量分装或小份后保存。

除BTN130816型Real-Time PCR稀释液怎么卖外，我公司正在打折促销以下产品：
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·RNase A干粉
编号：BTN90205
英文名称：RNase A Powder
规格：100mg
本产品是牛胰RNase A的冻干粉，可以配制成RNase A溶液用于各种分子生物学实验。

储存条件：低温运输，4℃或-20℃保存，有效期两年。

注意：RNase A非常容易吸附到玻璃表面，所以应避免与玻璃接触。

·GTP溶液(100mM)
编号：BTN120628
英文名称：GTP Solution，100mM
规格：0.25mL
本产品纯度在98%以上(HPLC检测)，不含DNA内切酶、DNA外切酶、RNA酶和磷酸酶的污染，可以直接用于体外RNA转录合成。

GTP分子式为C10H13N5O14P3Na3，分子量是589.2，消光系数为13.7×103M-1 ×cm-1(pH7.0)，λmax为253nm。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·耐热型MMLV逆转录酶(无RNase H活性)
编号：BTN131210
英文名称：Thermal Stable MMLV Reverse Transcriptase (H-)
规格：10000U
本产品为点突变型M-MLV逆转录酶(RNase H缺失)，拥有RNA和DNA聚合酶活性，但由于在RNase H结构域内进行了点突变，该酶缺少RNase H的活性，不会降解第一链CDNA 合成时形成的RNA-DNA 复合物中的RNA，从而可以从长模板中获得高产量的全长cDNA。缺失了RNase H活性的逆转录酶为长cDNA的制备及包含高比例全长cDNA的文库制备提供了更好的选择。

产品特点：
1．温度稳定性，点突变产物的热稳定性可防止与二级结构相关的问题，增强了与模板的亲和力。
2．能够在较宽的温度范围内保持活性，在42-45℃之间具有最佳活性，在温度高达55℃时仍有活性。
3．聚合酶活性增强，本产品与其它缺失突变得到的M-MLV 逆转录酶相比，具有更高的cDNA产率。
4．高产量制备全长的第一链cDNA，最长可达13kb。合成时可掺入带有修饰的核苷酸(例如 Cy3-、Cy5-、罗丹明-、*基烯丙基-、荧光素-标记的核苷酸)。
5．广泛的工作范围：提高了逆转录的性能，使得可以在更广泛的酶浓度和底物浓度的条件下工作。

产品组成：

 

成分	规格
耐热型MMLV逆转录酶(H-)，200U/μL	50μl
5×RT Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1．在无RNase的PCR管中加入如下成分：

成分	用量
▶RNA模板
Total RNA 或poly(A)RNA 或specific RNA	0.1ng-5μg 10pg-500ng 0.01 pg-0.5μg
▶引物
Oligo dT18 或随机引物 或基因特异引物	0.5μg(100pmol) 0.2μg(100 pmol) 15-20 pmol
▶RNase-free水	Up to 12.5μL

2．对富含二级结构的高GC RNA模板，65℃保温5分钟后迅速冰浴2-10分钟。
3．离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。
4．按顺序向上述反应液中加入下表各成分，反应终体积为20μL：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor	0.5μL(20U)
dNTP Mix，10mM each	2μL(终浓度1mM)
耐热型MMLV逆转录酶(H-)	1μL(200U)

 轻柔混匀，短暂离心。
5．42℃保温60分钟(Oligo dT18或基因特异引物)；如果是随机引物则先在25℃保温10分钟，然后再转移至42℃保温60分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板保温温度可以设为55℃。
6．70℃保温10分钟终止反应后置冰上冷却，得到cDNA。该产物可直接用于PCR扩增或-20℃保存。


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·KOD DNA聚合酶
编号：BTN101002
英文名称：KOD DNA Polymerase
规格：250U
KOD DNA Polymerase是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3´→ 5´外切酶活性使得其扩增保真性比Pfu DNA Polymerase更高，保真性是Taq的约50倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6 kb以内的PCR产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。

产品组成：

成分	规格
KOD DNA聚合酶(5U/μL)	5μl
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	1ml
dNTP mix(10mM Each)	0.1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存、有效期一年。

活性定义：1U指75℃条件下，30分钟内使10nmoles的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

使用方法：
一、建议PCR条件(以50μl反应体系为例)

成分	体积	终浓度
模板	-	＜0.5μg
正向引物(10μM)	1μl	0.2μM
反向引物(10μM)	1μl	0.2μM
10×KOD DNA聚合酶缓冲液	5μL	1×
dNTPs(10mM each)	1μL	0.2mM
KOD DNA聚合酶	0.25-0.5μL(1.25-2.5U)	-
超纯水	补足到50μL	-

注：实际操作中计算好需补加水的量后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加KOD DNA聚合酶。最好在冰浴上混合PCR各种成分，防止KOD DNA聚合酶降解引物和模板。待各成分充分混匀后，离心数秒，使反应混合物沉到管底。然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。

二、关于
PCR条件的优化
1.质粒或者噬菌体模板(模板量5-20ng，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<1kb	目标DNA<2kb	目标DNA3-4kb	目标DNA5-6kb
Step 1	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 20秒	94℃ 30秒
Step 3	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 20秒	Ta 30秒
Step 4	72℃ 20秒	72℃ 30秒	72℃ 40秒	72℃ 60秒
Step 5	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta=Tm－5℃

2.基因组DNA和cDNA模板(基因组DNA模板量为50-100 ng，1-2μl cDNA(起始转录用的RNA为500 ng)，循环参数如下表)

循环参数	目标DNA<2kb
Step 1	94℃ 2分钟
Step 2	94℃ 20-30秒
Step 3	Ta 15-20秒
Step 4	72℃ 20-60秒
Step 5	72℃ 5分钟
Repeat step 2-4 for 30-35个循环
Ta= Tm - 5℃

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