包涵体大量纯化试剂盒价格

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包涵体大量纯化试剂盒价格是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多包涵体大量纯化试剂盒等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。

名称：包涵体大量纯化试剂盒价格
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
编号：BTN90510
规格：2次
本产品是包涵体微量纯化试剂盒的大提升级产品，用于大量，快速的提取高质量的包涵体。

产品特点：
1.大量提取，1次可处理多达5升的菌液，相当于50次中量提取。
2.适合制备级别的包涵体纯化，需在50mL以上的离心管或离心瓶中完成。
3. 能有效去除包涵体中的细胞壁和细胞膜等非重组蛋白成份，使重组蛋白在包涵体中所占比重达到60%以上。
4. 即可以选择高压裂解法，也可以采用酶学裂解法裂解细菌。
5. 得到的包涵体可以用于重折叠，也可以用于凝胶层析和动物免疫。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	100mL
溶液B	250mL×2
包涵体溶解液	100ml
溶菌酶	100mg
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(溶菌酶需要-20℃保存，包涵体溶解液可以室温保存)，有效期一年。

自备试剂：如果得到的重组蛋白确有降解则需要自备蛋白酶抑制剂混合物(BTN80808)。

使用方法：

一．细胞沉淀：
1．转移1-5升菌液到干净的、预称重量的塑料离心瓶中。如果离心瓶体积不够大，可以分多次反复离心收集。
2．5000g(相当于Sorvall GSA转头5500rpm)4℃离心15-30分钟，小心弃上清。
3．复称重量，差值就是细菌的湿重。1升的过夜培养的大肠杆菌湿重一般为3克，所以1-5升菌液一般能得到3-15克细菌。注意：后续操作的很多溶液都是按此步得到得细胞湿重添加。
4．细胞沉淀可以立即使用或存放在-80℃待用。

二．细胞裂解(下面两法中选其一)：
 高压破碎法(French Press)+超声法(推荐方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌或用Waring捣碎机匀浆(如果细菌湿重超过10克)使细菌悬浮，直到检测不到成块的细胞为止。如有必要，可以加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL。
2．让细胞通过压力为16000-18000 lb/in2的高压细胞破碎仪，收集的细胞裂解液需放冰上。
3．重复上步操作一次或多次，直到绝大部分细菌都被裂解。注意：每次处理后最好在显微镜下检查细菌裂解的比例。
4．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。
 酶法+超声法(在没有高压破碎仪器时首选方法)
1．按每克细菌湿重加入3mL的含溶菌酶的溶液A重悬细胞，可以用玻璃棒搅拌细菌沉淀使之悬浮。
2．在细菌悬浮液中加入溶菌酶干粉，使其终浓度为0.2mg/mL，搅拌混匀后37℃放置30分钟裂解细菌，其间不时需要用玻璃棒混匀。细菌释放出的DNA将使裂解物变得十分粘稠。如果不粘稠，说明裂解不充分，需要继续裂解，否则完整细菌将和包涵体一起沉淀，影响包涵体的纯度。由于处理量大，最好在显微镜下检查细菌是否充分裂解。
3．将细胞裂解液置于冰浴中，用超声破碎仪满功率下超声处理5分钟，工作状态为50%(开0.5秒，关0.5秒)。此过程中最好将细胞裂解液放冰上并用磁力搅拌器搅拌，否则产生的热量会使包涵体蛋白变性，在纯化中丢失。

三．包涵体纯化：
1．将超声处理的细胞裂解液转移到离心瓶中，22000g 4℃下高速离心60分钟(注意：转子不同其对应的离心速度不同)，小心收集上清。上清含有以可溶形式存在的重组蛋白，可以保留作为SDS-PAGE对照样品。
2. 将沉淀(主要由包涵体构成)悬浮在预冷的溶液B中。每克细菌需要5mL溶液B，1升细菌的湿重约3克，大约需要15mL溶液B，用玻璃棒或匀浆器搅拌混匀后室温放置5分钟。
3．22000g 4℃下高速离心30分钟，沉淀将出现三层，最下面的是未彻底破裂的细胞碎片，其上是包涵体，最上层的松软沉淀是细胞壁和细胞外膜。如果处理过程中使用过溶菌酶，则此层较薄。小心收集上清，可以作为包涵体第一次洗涤的对照样品。
4．重复第8-第9步直到上清变清和最上层细胞壁和细胞外膜松软沉淀消失，此过程一般需要重复洗涤2次(共3次洗涤)，小心收集上清作为包涵体第二次洗涤和第三次洗涤的对照样品。本试剂盒提供的溶液B足够一次5升规模的提取洗3次，如需更多溶液B请单独购买。
5．上步得到的沉淀即为包涵体，其中重组蛋白一般占60%重量，其余40%为其他蛋白质。此沉淀可以长期放置在-80℃冰箱待用，也可以直接用于免疫动物制备抗体，还可以直接进入下面得包涵体的溶解步骤。
6．估计重组蛋白的产率：首先需要通过预实验知道重组蛋白的表达水品，如果表达水平为1%，则1克湿重的细菌中将含有1mg重组蛋白质。此法得到的重组蛋白质的回收率一般在75%，即1mg重组蛋白质能得到0.75mg，丢失0.25mg。

四．包涵体的溶解：
1．在室温下，将包涵体溶解液加入到包涵体沉淀中，用枪头充分吹打后漩涡震荡。如果需要将溶解的包涵体直接用于凝胶过滤层析进一步纯化，则按每克原始细胞湿重加入1mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为4-5mg/mL；如果需要将溶解的包涵体直接用于蛋白质折叠，则按每克原始细胞湿重加入3mL包涵体溶解液，重组蛋白的浓度约为1-2mg/mL；注意：包涵体溶解液低温放置会产生沉淀，必须45-65℃溶化并混匀后才能使用。
2．室温放置1小时使蛋白质充分溶解。
3．100,000g 4℃离心60分钟(转速需要根据离心机转子的大小换算)，小心收集上清，保留不溶性沉淀。注意：检查离心管能否承受此离心力。SDS-PAGE检查是否大部分重组蛋白都在上清中。如果没有，说明包涵体没有完全溶解，需要用适当增加包涵体溶解液的用量。
4．将上清(溶解的包涵体)分成10-20mL一份，放于塑料离心管中(不要超过离心管容量的70%)置-80℃长期保存或直接用于复性等试验。由于不同的蛋白质有不同的最佳复性条件，需要用户自己摸索。包涵体纯化过程中引入了溶菌酶，在SDS-PAGE分析时可能有额外条带出现。

更多有关包涵体大量纯化试剂盒价格的价格及使用说明等，请联系我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
9-*基吖啶盐*(代"酸")盐一水合物 Glycyrrhizic acid ammonium salt 52417-22-8
ARB11139 人肿瘤坏死因子α转化酶(TACE)ELISA检测服务 Human tnf α converting enzyme,tace ELISA KIT
002015 肝素*抗凝兔血 100ml|500ml
ARB11678 人超氧化物歧化酶(SOD)酶免分析 Human super oxidase dimutase,sod ELISA KIT
ARB11451 人缺血修饰白蛋白(IMA)尿液中含量检测 Human ischemia modified albumin,ima ELISA KIT
PY01-180  *百里酚蓝  25克  
正己*(代"胺") 4-Methoxyazobenzene 111-26-*(代"2")
ARB14099 小鼠瘦素受体(LEPR)酶免分析 
F030837 BIOTIN标记山羊抗人IgG FC抗体 Polyclonal Goat Anti-Human IgG FC*BIOTIN
丁酰胆碱酯酶 Sephacryl S-1000 Superfine 9001-08-5
*甲*(代"酚")绿 Phosphomycin disodiu*(代"m") salt 76-60-8
ARB10041 人I型胶原吡*(代"啶")交联终肽(ICTP)酶标法分析 Human ictp ELISA KIT
ARB10378 人甘露糖凝集素受体(MBLR)含量测试 Human mannma binding lectin receptor,mblr ELISA KIT
香草酸 ACCA 121-34-6
ARB11538 人高铁血红蛋白(MHB)ELISA检测服务 Human methemoglobin,mhb ELISA KIT
5328-37-0 L-Arabinose   L-阿拉伯糖
*甲蝶呤  M-PYROL 54-62-6 
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·DNA促旋酶
编号：BTN130651
英文名称：DNA Gyrase(E.coli)
规格：100U
DNA促旋酶(E.coli)是一种II型拓扑异构酶，在ATP存在下向DNA中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个gyrA亚基(97 kDa)和两个gyrB(90kDa)亚基组成的异源四聚体。本产品主要用于向DNA引入负超螺旋。其反应原理图如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位是指在30μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内催化超过95%的0.5μg底物转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。

热灭火：65℃加热20分钟。

·20%CTAB溶液(DNA级)
编号：BTN101107
英文名称：DNA Gyrase(E.coli)
规格：250mL
DNA促旋酶(E.coli)是一种II型拓扑异构酶，在ATP存在下向DNA中引入负超螺旋。促旋酶全酶是由两个gyrA亚基(97 kDa)和两个gyrB(90kDa)亚基组成的异源四聚体。本产品主要用于向DNA引入负超螺旋。其反应原理图如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位是指在30μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内催化超过95%的0.5μg底物转变为超螺旋质粒所需的酶量。DNA超螺旋化通过不含*化乙啶的琼脂糖凝胶电泳来检测。

热灭火：65℃加热20分钟。

·利福平溶液
编号：BTN120700
英文名称：Rifampicin Solution
规格：10mL
本产品为浓度为100mg/mL的利福平溶液(溶剂为DMSO)。利福平(甲哌利福霉素；3-(4-甲基-1-哌*(代"嗪")基亚胺甲基)利福霉素SV；Rifampin；Rifamycin AMP)，分子式：C43H58N4O12，分子量：822.94，CAS号：13292-46-1。利福平是从利福霉素B得到的一种半合成抗生素，能抑制细菌DNA转录合成RNA，可抑制成熟病毒粒子DNA和蛋白质的合成，是细菌核糖核酸聚合酶的特殊抑制剂，可用于治疗结核病、肠球菌感染等。除作为抗生素应用外，在分子生物学中可用做从细菌中去除质粒的试剂利福平。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期6个月。


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7647-17-8 *化铯 Cesium choride(CsCl)
CBZ-L-*丙*酸 5"-ATP,Na2 1161-13-3
ECL化学发光法检测试剂盒"
ARB12136 大鼠甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)免费代测 Rat alpha-fetoprotein,afp ELISA KIT
ARB11783 人溶血补体(Hc)检测服务 Human hemolytic complement,hc ELISA KIT
HC0113 透析袋MD34 (  截留量7000  )
ARB12964 小鼠血管紧张素转换酶(ACE)elisa检测 Mouse angiotensin converting enzyme,ace ELISA KIT
9011-18-1 硫*(代"酸")葡聚糖 Dextran Sulfate
ARB13912 猪纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)elisa测定使用说明书 Porcine plasminogen activator inhibitor 1,pai-1 ELISA KIT
ARB13224 小鼠脱*表雄酮(DHEA)免费代测 Mouse dehydroepiandrosterone,dhea ELISA KIT
ARB14009 绵羊白介素1β(IL-1β)检测服务 Sheep interleukin 1β,IL-1β ELISA KIT
96949-21-2 中性树胶
BTN80911 蛋白酶K溶液 Proteinase K Solution
CYB162022 兔抗猴IgG(抗血清) 0.5ml
ARB11070 人轮状病毒抗体(RV-Ab)ELISA检测服务 
N,N-双(2-羟yi基)-2-*基乙磺酸*盐 N-Acetyl-L-Leucine 66992-27-6
BL1055 马铃薯葡萄糖琼脂
ARB13119 小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)elisa测定使用说明书 Mouse keyhole limpet hemocyanin,klh ELISA KIT
睾酮 Kaolin 58-22-0

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