农杆菌EHA101感受态细胞哪里卖

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百奥莱博专业生产供应农杆菌EHA101感受态细胞哪里卖，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：农杆菌EHA101感受态细胞哪里卖
产地：国产|进口
编号：BTN161205
品牌：百奥莱博
英文名：E.coli EHA101 Rosetta Competent Cell
规格：10×100μL
 EHA101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签-利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因，vir基因是T-DNA 插入植物基因组必需的元件。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移。pEHA101(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：kan，赋予EHA101菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。

 本公司生产的EHA101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2质粒(壮观霉素抗性)检测转化效率>104cfu/μg DNA。EHA101农杆菌的基因型是：C58(rifR)TipEHA101(pTiBo542 D T-DNA)(kanR)Nopaline。

产品组成：

 

成分	规格
EHA101 农杆菌感受态细胞	0.1ml×10
pKWGF2(10ng/uL)	10μl
说明书	1份

储存条件：干冰运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂：质粒DNA、液氮等。

使用方法：

转化前准备
1. 冰水浴和37℃水浴。
2.液氮或干冰/乙醇混合物。
3. 将抗性平板在28℃培养箱中平衡至少15分钟。
转化方法
1. 取-80℃保存的农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2. 每100μL感受态加1μg(体积不大于10μL)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 加入700μL无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃振荡培养2～3小时。
4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB 平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有转化所用双元载体抗生素时，28℃培养48小时即可；平板中同时加入双元载体抗生素，20μg/ml rif时，需28℃培养60小时；如果使用的平板含有50μg/ml rif 则需要28℃培养72-90小时)。

注意事项：
1、加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2、混入质粒时应轻柔操作。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3、平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获得大的菌落，应减少质粒用量。
4、利福平浓度不应高于25μg/mL，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司EHA101感受态计算转化效率时所用平板只含有50μg/mL kan，若所用平板含有20μg/mL rif 则转化效率降低到1/2。
5、培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)。

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ARB10742 人纤溶酶抗纤溶酶复合物(PAP)酶免分析 Human plasmin-antiplasmin complex,pap ELISA KIT
pGM-T Fast连接试剂盒 
BTN100884 IPTG干粉 IPTG Powder
ARB11306 人促甲状腺素释放激素(TRH)Elisa方法检测 Human growth hormone releasing hormone,ghrh ELISA KIT
57-88-5 Cholesterol  胆固醇
BTN130526 细菌专用蛋白酶抑制剂 Protease Inhibitor for Bacteria
BTN131053 蛋白级DTT DTT,Protein Grade
8008-63-7 猪胆盐
DN3101 凝固全血基因组DNA提取系统
氧化型谷胱甘肽 DEHA 27025-41-8
葡萄糖-Tris-EDTA溶液(GTE)   100ml
ARB14099 小鼠瘦素受体(LEPR)含量分析 
人工结肠液(无菌)   500ml
PY01-004  大豆蛋白胨  1公斤  
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59-67-6 Nicotinic acid 烟酸(维生素B3)
ARB13144 小鼠总睾酮(TotAlT)含量检测 
4-甲基伞形酮酰-β-D-吡喃葡糖酸苷 Ceftazidime 18997-57-4
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·柱式植物叶绿体DNA提取试剂盒
编号：BTN120406
英文名称：Plant Chloroplast DNA column extraction kit
规格：15次
本试剂盒是结合植物叶绿体纯化试剂盒和柱式植物DNA抽提试剂盒而推出的新兴产品,专门用于植物叶绿体DNA的快速提取。

试剂盒特点：
1. 纯度高,不含污染和抑制剂,可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、 mμLtiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各种后续分子生物学实验,不会发生离心柱堵塞现象。
2.产率一般在1-2μg/1g叶片样品。OD260/280一般在1.8以上。DNA片段长度一般在40-50Kb左右。
3. 本产品足够15次提取,每次可处理30g叶片。
4. 已经成功用于菠菜,大豆,莴笋,白菜,烟草和甜菜等双子叶植物,也适用于单子叶等其他植物(可能需要优化条件)。

试剂盒组成：

成分	规格
叶绿体纯化匀浆液成分一	250mL×2
叶绿体纯化匀浆液成分二	3g
Percoll	60mL
带柄尼龙滤膜	1个
叶绿体DNA纯化溶液A	15mL
叶绿体DNA纯化溶液B	7.5mL
叶绿体DNA纯化溶液C	30mL
离心吸附柱	15套
通用洗柱液	15mL
DNA洗脱液2.0	10mL
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但匀浆液成分二长期保存时需要放4℃)，保存期限一年。

使用方法：
注意：叶绿体对温度高度敏感,所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行,所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行,离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能,提取还需要在昏暗的光线条件下进行。强烈建议用显微镜监控整个过程中叶绿体的回收情况。

一：叶绿体的纯化
1.实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成,否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净,再用蒸馏水淋洗,去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理,则保存时需要保持叶片湿润,即使如此,叶片的放置时间也不能超过一天。
2.计算实验所需叶绿体匀浆液的体积(下面简称匀浆液),本试剂盒一次实验可处理30 g叶片,对一般植物,每克叶片需要准备4mL匀浆液,则一次实验需要准备120mL匀浆液。对烟草和大豆,每克叶片需要6mL匀浆液,则一次实验需要准备180mL匀浆液。为了保险可以多配10%。
3.实验当天制备匀浆液。制备方法是：将自备的去离子水与试剂盒提供的匀浆液成分一在干净的玻璃或塑料容器中按4：1的比例混合,然后在每100mL混合液中加入匀浆液成分二干粉0.1g(终浓度为0.1%),轻柔搅拌10分钟后,所得溶液即为匀浆液。冰上预冷待用。匀浆液只能当天使用,不能放置。
4.预留1.5mL用于悬浮叶绿体,其余匀浆液转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中,再快速将新鲜植物叶片的叶脉去除,再将叶片剪成1-3cm2大小的碎片,浸泡在匀浆机里面的匀浆液中。
5.低速匀浆10秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的叶碎片按入到匀浆机底部,再低速匀浆10秒。
 注意：还可用Dounce玻璃匀浆器,Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等匀浆,但它们单次处理量小,需分成很多份处理后再汇集,非常不方便。
6.用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液,用预冷的200mL量筒收集穿透液,再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的穿透液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜洗涤干净后可反复使用。
7.在水平转子离心机上4℃ 200g离心3分钟(对菠菜,白菜和莴笋材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料),白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。其他植物材料则需要用户自己摸索最佳离心力。
8.将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
9.在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀含叶绿体。
10.在沉淀中加入1.5mL预冷的匀浆液,手弹离心管底部使叶绿体重悬。
 注意：重悬时最好避免溶液起泡,也不要用枪头吹打,否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象,但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
11.将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL),得到叶绿体粗提液。
12.如果对叶绿体DNA是否含细胞核DNA的要求不高,则叶绿体粗提液可以直接用于叶绿体DNA纯化,具体操作是在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟,小心弃上清,沉淀为叶绿体,直接用于DNA纯化(见步骤二)。
13.如果需要无细胞核DNA污染的叶绿体DNA,则按以下流程操作：在50mL塑料离心管中先加入6mL匀浆液成分一和4mL的Percoll,充分混合均匀得到40%的Percoll溶液,在其液面上小心铺上6mL的叶绿体粗提液,在水平转子离心机上4℃ 1700g离心6分钟,管底绿色沉淀为完整的叶绿体,液面的绿色部分为破碎的叶绿体。小心将上清去除后,直接将沉淀(完整叶绿体)用于叶绿体DNA纯化(见步骤二)。

二：叶绿体DNA的纯化(溶液A和溶液B容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,均需65℃溶解并摇匀后待用)
14.将600μL预热的溶液A加入到叶绿体沉淀中后充分吹打混匀。
15.加入300μL预热的溶液B,震荡混匀10-30秒。
 注意：溶液B非常粘稠,可以采取称量方法称取300mg(约等于300μL)使用或将1mL枪头剪去一截后再吸取300μL使用。
16.65℃放置3～5分钟。如果室温放置,DNA产量会降低10-20%。
17.加入200μL自备*仿,震荡混匀10-30秒。
18. 12000rpm室温离心2分钟。此时上清液将变得透明,中间层有白膜。小心转移上清液(约0.8mL)到一个新的3-5mL离心管中,避免触及中间层的白膜,可留少量上清不取。
19.加入1.5倍体积(约1.2mL)的溶液C,颠倒混匀后先转移0.7mL到离心吸附柱中,室温放置至少2分钟。12000rpm室温离心1分钟,DNA将吸附在离心吸附柱的膜上,倒弃收集管中的穿透液。
20.再将剩余的溶液按上步方法上柱。
21.将0.5mL通用洗柱液加入到吸附柱中,12000rpm室温离心1分钟,弃穿透液。重复操作一次。空甩半分钟去除残留液体。
22.将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加50-100μL DNA洗脱液2.0,室温放置3～5分钟。
23.12000rpm室温离心1分钟即得植物叶绿体DNA溶液,直接取5-10μL电泳检测,其余放冰箱备用。


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聚酰胺 Methyl Green 63428-84-2
ARB12118 大鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA检测服务 Rat soluble vascuolar cell adhesion molecule 1,svcam-1 ELISA KIT
PY02-357  1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基  250克  
9007-34-5 Collgen TypeⅡ  胶原蛋白Ⅱ型(鸡)
72-57-1 Trypan Blue 台盼蓝
高纯度质粒小提试剂盒(96孔板) 
E0202 抗凝山羊血(无菌 袋装)
ARB12913 小鼠白介素7(IL-7)Elisa方法检测 Mouse interleukin-7,IL-7 ELISA KIT
ARB13826 猪Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)含量分析 Porcine n-terminal procollagen Ⅲ proPeptide,pⅢnp ELISA KIT
ARB10939 人低密度脂蛋白(LDL)Elisa分析 Human low density lipoprotein,ldl ELISA KIT
62758-13-8 Resazurin sodiu*(代"m") salt刃天青
百里醌 Fmoc-D-Cys(Trt)-OH 490-91-5
SSC缓冲液(20×,pH7.0,RNase free)   500ml
ARB13902 猪血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)elisa测定使用说明书 Porcine vascuolar cell adhesion molecule 1,vcam-1 ELISA KIT
2,4,6-三吡*(代"啶")基三嗪 D-Tyrosine Methyl ester hydrochloride 3682-35-7
PY02-013-1  营养肉汤(GB)  250克  
ARB11090 人制瘤素M受体(OSMR)免费代测 Human oncostatin m receptor,osmr ELISA KIT
2,7-二*荧光素 Phosphoglucomutase 76-54-0
N-三(羟甲基)甲*酸-2-羟基丙磺酸*盐 3,5-Diiodo-L-tyrosine dihydrate 105140-25-8
ARB10843 人抗肺泡基底膜抗体(ABM-Ab)检测服务 Human alveoli basement membrane zone antibody,abm-ab ELISA KIT
ARB11219 人细胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)定量分析 Human cytokeRatin 18-m65,ck 18-m65ELISA KIT
ARB10316 人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA代测服务 Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin,ngal ELISA KIT

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