一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)报价

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一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)报价是高品质的蛋白质研究产品，由北京百奥莱博供应，用于科研目的生化试验项目，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)等蛋白质研究产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)报价
编号：BTN81212A
品牌：百奥莱博
产地：国产|进口
英文名：One-Stop Protein Native PAGE Pack(A)
规格：30次
非变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳(Native PAGE)是目前电泳法分离活性蛋白的主要方法之一，跟SDS-PAGE根据分子量大小分离蛋白质不同，它是根据蛋白质分子大小、形状、电荷密度三个主要参数分离蛋白质。由于蛋白质的pI各不相同，所以对不同蛋白质需要选用具有不同pH的电泳体系。单独配制不同pH的Native PAGE电泳胶十分繁琐，为此本公司开发了本产品。

产品特点：
1．即开即用，不需单独准备各种成分，十分方便。还免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺
2．非变性，电泳过程中蛋白质保持天然的构象和亚基之间的相互作用，得到的蛋白质一般都具有生物活性(而SDS-PAGE得到的蛋白没有活性)。
3．可用于分析蛋白质和DNA或RNA的相互作用、蛋白修饰、蛋白构型改变、回收有活性蛋白质等试验。
4．电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
5．提供具有3种不同pH的缓冲液套装，便于客户选择最适合的缓冲液体系。

产品组成：

 

成分	规格
丙*(代"烯")酰胺干粉	60g
甲叉双丙*(代"烯")酰胺干粉	3g
TEMED	1.5ml
过硫*(代"酸")铵干粉	1g
高中低缓冲液套装选一	ABC之一(见下)
说明书	1份
高pH缓冲液套装(只有BTN81212A有此成分)
高pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
高pH分离胶配胶液(pH8.9)，4×	200ml
高pH电泳液(pH8.3)	10L(干粉)
高pH上样液，5×	1ml
中pH缓冲液套装(只有BTN81212B有此成分)
中pH浓缩胶配胶液(pH5.5)，4×	100ml
中pH分离胶配胶液(pH7.5)，4×	200ml
中pH电泳液(pH7.0)干粉A	55.2g
中pH电泳液(pH7.0)干粉B	10g
中pH上样液，5×	1ml
低pH缓冲液套装(只有BTN81212C有此成分)
低pH浓缩胶配胶液(pH6.7)，4×	100ml
低pH分离胶配胶液(pH4.3)，4×	200ml
低pH电泳液(pH4.5)	10L(干粉)
低pH上样液，5×	1ml

注：高、中和低pH缓冲液套装里面均含100mL浓缩胶配胶液、200mL分离胶配胶液、10 L电泳液(干粉)和1mL上样液，只是pH不同。

储存条件：常温运输和保存(上样液需-20℃保存)，保存期为一年。

使用方法：
如何选择缓冲液?
高pH浓缩胶，高pH分离胶，高pH电泳液和高pH上样液一定要配套使用。中pH和低pH系列也是如此，绝不能高pH的成分跟其他pH的交叉使用。选择适当pH的缓冲液(包括上样液，电泳液，配胶液等)对蛋白质非变性PAGE非常重要，缓冲液的最佳pH又跟目的蛋白质的pI值密切相关。如果pH远离pI，则蛋白质分子带电多(电荷密度大)，电泳速度快，分辨率高。但过酸过碱又容易使蛋白质结构变性，失去活性，所以最佳pH条件就是在电泳分辨率和维持活性之间寻找平衡，需要针对每种蛋白质进行摸索或通过滴定曲线来确定，没有通用的电泳缓冲体系。由于有近半数的蛋白质pI在4-6.5，所以在不知道目标蛋白的pI时，可以先选用高pH缓冲系统。

一、配制分离胶
1．确定浓度。对分子量在100Kd以上的蛋白质，可选用3-5%的胶；对分子量在20-150KD之间的蛋白质，可选用5-10%的胶；对分子量在10-80KD之间的蛋白质，可选用10-15%的胶。对未知样品，建议使用7.5%的胶。
2．配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL去离子水的比例配制10%的APS溶液，该溶液可以在4℃存放一周。
3．配制30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液:在本产品提供的装有60克丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和3g甲叉双丙*(代"烯")酰胺,充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)即得200mL 30%丙*(代"烯")酰胺(19:1)溶液。此溶液最好在一个月内用完，必须4℃避光保存。
4．配10mL分离胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入4.2mL去离子水、3.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×分离胶配胶液。
5．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除的话将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
6．加入50μL新配制的10%APS和10μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则按比例增加)，迅速摇匀后倒胶。注意：如果购买的是低pH缓冲系统，由于在低pH缓冲液中PAGE聚合速度降低，所以需要增加上述两成分的用量。
7．在胶面距离顶部1-1.5 cm的时候停止灌胶。然后覆盖一层1-5 mm厚的水，使胶顶部液面平整。由于比重不同，水和丙*(代"烯")酰胺溶液不会混合。
8．室温聚合30-60分钟后，用1×分离胶配胶液洗涤凝固的胶的顶部，待用。

二、配制浓缩胶(浓缩胶可以提高分辨率，适合于成分复杂的样品，一般使用浓度为4%。使用浓缩胶时蛋白质泳动速度主要跟其尺寸和形状相关。因浓缩胶pH跟分离胶pH不同，蛋白质可能会发生聚合和沉淀。对成分单一的样品，可以不用浓缩胶，此时蛋白的泳动速度主要跟其电荷密度，尺寸和形状相关。)
1．配10mL浓缩胶(如果配制其他体积,请按比例调节各成分用量):在一个25mL的三角瓶中，先加入6.2mL去离子水、1.3mL 30%丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺(19：1)溶液和2.5mL 4×浓缩配胶液。
2．摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制丙*(代"烯")酰胺聚合反应，不去除将影响丙*(代"烯")酰胺聚合反应)。
3．按上表用量加入50μL 10%APS和15μL TEMED(这是配制10mL胶的用量，配制更大体积的胶则用量需按比例增加)，迅速摇匀后在已经凝固的分离胶上倒胶。
4．在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
5．室温聚合30-60分钟，拔出梳子，用1×电泳液冲洗加样孔。

三、电泳
1．将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽加入足够1×电泳液。注：本产品提供10升的三种不同pH的电泳液干粉中的一种，低PH和高PH值电泳液用前需将所有干粉溶解在1 L水中得10×电泳液，可以室温放置，用时再稀释成1×电泳液。一般不需要再调节pH，但保险起见，可以用pH试纸测试一下1×电泳液。高中低pH电泳缓冲液的pH分别是8.3，7.0和4.5。
 注意：中pH值的电泳液干粉只能配1x电泳液，否则不溶解。称取中pH电泳液(pH7.0)干粉A，5.52g,中pH电泳液(pH7.0)干粉B 1g混匀，加去离子水至彻底溶解，调PH7.0，定容至1L。客户根据可实际需要量按比例增减。
2．连接电极。如果浓缩胶和分离胶的pH高于目标蛋白pI，目标蛋白将带负电荷并向阳极移动，可以按标准的SDS-PAGE方法接通电极(上阴极下阳极)；如果浓缩胶和分离胶pH低于目标蛋白pI，目标蛋白将带正电荷并向阴级移动，此时应该下阴极上阳极。
3．300V预电泳直到电流不再降低(约需要30分钟)以去除残留过硫*(代"酸")铵。
4．换电泳液。
5．在液体蛋白质样品中加入5×上样液(16μl液体样品加4μL上样液)后上样。0.75 mm厚的胶可以上10μl，1.5 mm厚的胶可以上20μl。在未用加样孔中也要加1×上样液以防有样品的空道的样品扩散。注意：如果用考染检测，每个孔的蛋白最好在50-100μg总蛋白，如果银染则只需要1ug即可。样品如果是蛋白质沉淀，可用1×上样液直接溶解蛋白质沉淀后再上样。蛋白质溶液或沉淀中不能含有能够改变上样液pH的残留成分(如蛋白质沉淀剂TCA)，用前最好用pH试纸测试一下，不在上样液的pH范围时就用酸或碱调到正常范围。大量样品可用透析法调pH。
6．上样自备的天然PAGE蛋白质标准或等电电泳的标准品(如果有的话)。
7．用15 mA(对0.75 mm厚的胶)或30mM(对1.5mm厚的胶)的电流电泳直到染料移动到分离胶底部。微型胶一般需要1-2小时。注意：电泳过程最好在冷室或有冷却系统，以免电泳产热使蛋白质变性。
8．终止电泳，取出凝胶进行后续的实验处理(如染色或酶活性检测)。

关于一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)报价的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
间*二胺 3-Pyridinesulfonic acid 108-45-2
ARB11543 人疱疹病毒6型抗体(IgM)含量分析 
98-98-6 2-吡*(代"啶")甲*(代"酸")
胰酶粉 Potassium hydrogen oxalate 8049-47-6
磺胺甲噁唑 Oxytetracycline hydrochloride 723-46-6
4-甲基伞形酮酰-α-D-吡喃糖苷 Enzyme Stabilizer AES 38597-12-5
微波辐射抗原修复试剂盒   2×100ml
ARB13433 鸡可溶性E选择素(sE-selectIn)含量分析 Chicken soluble e-selectin,se-selectin ELISA KIT
对*基二乙基**(代"胺")硫*(代"酸")盐 MBT 6283-63-2
PY01-069  β-环状糊精  250克  
ARB14190 山羊基质金属蛋白酶-9(MMP-9)免费代测 
BL0832 HRP标记人白蛋白抗体
靛蓝 Fmoc-Arg(Pbf)-OH 482-89-3
ARB13555 兔子中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)检测服务 Rabbit neutrophil elastase,ne ELISA KIT
BTN81221 HB101感受态细胞 HB101 Competent Cell
ARB12435 大鼠骨形成蛋白-2(BMP-2)代做ELISA实验 Rat bone morphogenetic protein 2,bmp-2 ELISA KIT
通用显影液   500ml
甜蜜素 Asparaginase from Escherichia coli 139-05-9
4-*甲基*甲*(代"酸")甲酯盐*(代"酸")盐 Magenta-gal 6232-11-7
ARB13209 小鼠高敏三碘甲状腺原*酸(u-T3)Elisa定量检测 Mouse ultrasensitivity tri-iodothyronine,u-t3 ELISA KIT
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·ONPG干粉
编号：BTN131108
英文名称：o-nitrophenyl-β-Dgalactopyranoside
规格：1g
ONPG是在包含β-半乳糖苷酶(β-Gal)报告酶的ELISA 应用中最经常使用的化学显色底物。该酶-底物反应生成黄色产物，在420nm 有最大吸收，且405nm处强度也很高(与常用的酶标仪滤镜设置匹配)。其反应原理如下：


储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

·Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒
编号：BTN131083
英文名称：Ribo-SPIA RNA Amplification Kit
规格：20次
血液样品和各种临床样品(包括组织检查、FFPE切片或少量细胞样品)都是基因表达分析和诊断的常见材料，但这些样品通常数量有限，质量不高，还没法进行第二次取样。所以得到足够RNA量供后续试验是一个非常棘手的瓶颈。为解决这一问题，本公司根据Ribo-SPIA技术，开发了本产品。Ribo-SPIA技术的核心是利用DNA/RNA嵌合引物，以带polyA尾巴的mRNA为模板进行逆转录并得到双链cDNA、RNase H不间断地在cDNA第1链中的RNA部分产生裂口，DNA聚合酶以此裂口为基础进行链取代聚合反应，产生cDNA单链。

产品特点：
1.高效，能线性扩增1000-10000倍，能用5-100 ng总RNA模板扩增得到5μg左右的单链cDNA(扩增的cDNA主要来源于总RNA中的mRNA)。
2. 步骤简单方便，扩增在恒温进行，只需要4个小时，不需要特殊仪器设备。
3. 保真性好，保持RNA样品中各分子的相对丰度。
4. 尤其适用于RNA产量和质量都不高的样品。
5.扩增得到的单链cDNA能直接用于各种后续试验，包括qPCR、芯片分析、杂交反应等。
6. 本产品足够做10次双链cDNA的合成，20次SPIA扩增。

试剂盒组成：

成分	规格
cDNA一链合成缓冲液	40μl
MMLV逆转录酶	10μl
cDNA二链合成缓冲液，5×	160μl
cDNA二链合成酶混合液20×	40μl
SPIA RT引物	40μl
SPIA反应液，5×	320μl
SPIA扩增引物	320μl
SPIA酶混合液	120μl
超纯水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期为1年。

使用方法：

一：样品RNA的制备
本产品不含RNA相关试剂，用于Ribo-SPIA扩增的每个批次的RNA样品最好先做一个预实验。总RNA样品的浓度必须在1-20ng/μL，一次RIBO-SPIA所需总RNA的量为1ug。也可以使用mRNA，一次Ribo-SPIA所需总mRNA的量为5-100 ng。过低则需要浓缩，过高则需要用无RNase的水稀释。RNA必须经过DNase处理，不能含DNA污染。微量提取时不能使用核酸类的助沉剂。注意：本产品只能扩增含带polyA尾巴的RNA，不能扩增DNA和不含polyA尾巴的RNA。

二：一管式双链cDNA的合成
1.在0.5mL PCR管中，按下表配制双链cDNA合成反应。
注意：最好每次实验设置一个阴性对照组，在此对照中用超纯水替代自备的mRNA或总RNA:

成分	用量
自备mRNA或总RNA	4μL mRNA(5-100ng)或4μL总RNA(1ug)
SPIA RT引物MTA3 20uM	1μl
65℃，5分钟后室温放置2分钟，短暂离心后放4℃
cDNA一链合成缓冲液	4μl
MMLV逆转录酶	1μl
轻柔吹打混匀后得到10μL的反应体系。42℃保温90分钟合成第一链cDNA。结束后70℃保温15分使酶变性，最后4℃放置，然后加入下列成分，得到80μL反应体系。
超纯水	50μl
cDNA二链合成缓冲液	16μl
cDNA二链合成酶混合液	4μl
轻柔吹打混匀后，短暂离心，16℃保温2小时合成cDNA第二链，然后75℃ 15分灭活酶，最后4℃放置待用

三：SPIA扩增
2.在0.5mL PCR管中，按下表配制20μL的SPIA反应体系。注意：最好设置两个阴性对照组，在此两个对照中分别用超纯水替代SPIA引物和cDNA双链反应液。

成分	用量
cDNA双链反应产物	40μL(来于上步)
SPIA扩增引物10uM	16μl
SPIA反应液，5×	16μl
超纯水	42μl
94℃20秒后50℃放置复性待用
SPIA酶混合液	6μl
轻柔吹打混匀后得到120μL反应体系，50℃扩增60分钟，最后4℃放置

四：SPIA扩增产物的检测
3. 取5μL SPIA扩增产物进行PAGE电泳检测。标准的反应结果是产生长度在200-2000bp之间的产物。
4. 如果产物将用于PCR定量，则可以不经过纯化直接使用，如果需要用于芯片杂交和浓度测定，则需要按常规的方法纯化cDNA以便去除残留的dNTP和引物。
5. OD检测纯度和浓度。在OD260的波长下测样品你给的光吸收。由于扩增产物是单链DNA，故1OD260=33ug/mL。
6. 所得DNA可以放-20℃长期放置。


一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH)报价关键词：BTN81212A,一站式蛋白质非变性PAGE电泳套装(高pH),One-Stop Protein Native PAGE Pack(A)


·T3体外转录试剂盒
编号：BTN91108
英文名称：T3 in vitro Transcription Kit
规格：50次
本试剂盒是基于沙门氏噬菌体T3 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒，它利用含有T3启动子的模版DNA，以NTP为底物，从T3启动子下游开始合成与模板DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需提供含T3启动子的DNA模板即可以进行体外转录实验，不需耍单独准备每一个成份。
2. 单溶液预配液，减少加样次数，避免了操作误差，增加了可重复性。
3. 模板DNA可以是线性化的质粒DNA，也可以是PCR扩增产物。
4.可以合成的RNA的最佳长度在20nt到5000nt之问。
5.产品配方经过精心优化，每μg DNA模板可以合成2-6μg RNA。
6. 得到的RNA可以用于RNA结构研究、核解生物化学、体外翻译、RNA-蛋白质相互作用、反义技术、SELEX技术和RNA干扰(RNAi)等实验。

试剂盒组成：

成分	规格
转录预配液(2×)	0.5mL
阳性对照DNA(1.3 Kb片段)	20μL(10ng/μL)
T3 RNA聚合酶混合液	50μL
RNase-free水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、制备DNA模板
PCR片段和质粒DNA都可以用作体外转录的模板，但是必须注意以下几点：
1)必须使用线性化的DNA。如果是质粒DNA，则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
2)是需要转录的DNA序列的上游必须有T3启动子。如果模板是PCR产物，则可以在设计引物时将T3启动子序列(5´AATTAACCCTCACTAAAGG 3´)加上。如果是将DNA片段克隆到载体上，则需要选择有T3启动子的载体，并且克隆位点必须位于T3启动子下游。
3)是需要转录的DNA序列的下游端最好不要是3´突出。如果是3´突出(如选择了Pst I来线性化质粒)，则最好用T4 DNA聚合酶修平。
4)是必须保证DNA模板中没有RNase。由于提取质粒DNA的过程中一般要使用大量的RNase A，因此质粒DNA一般都有严重的RNase A污染，所以在用作模板前，最好采取胶回收得方法回收质粒DNA。并且加入少量总RNA一起保温，然后电泳检测RNA是否被降解，以此判断纯化的DNA模板是否有残留RNase A。

二、体外转录反应
1.在一个RNase-free的塑料离心管中，在室温下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	备注
DNA模板	xμl	总量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建议用50ng左右；如果模板是质粒DNA，建议用1μg左右；如果用本产品提供的阳性对照，建议用4μL)
转录预配液，2×	10μl	需室温时使用
T3 RNA聚合酶混合液	1μl	本成分还含其他促进剂，所以是混合物
RNase-free水	补水到20μL

注：此为20μL反应体系的用量，对其他体积的反应体系，各成分的用量可以按比例增减。如果需要标记RNA探针，则需要定做NTP分开而不是NTP预先混合的试剂盒。如果需要得到加帽RNA，则需要加入自备的加帽修饰核苷酸(本公司有各种加帽修饰核苷酸)。
2. 37℃保温1-2小时。注意：延长保温时间并不能提高产量。
3. 70℃加热10分钟灭活T3 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL电泳检测转录效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需进一步去除DNA模板，可参考下列操作步骤，但所用试剂需另行购买，本试剂盒不提供。
1.在体外转录结束后，在反应体系中加入3-5U自备的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保温15-30分钟。
3. 补水到100μL，
4. 用自备的等体积(100μL)的Tris饱和酚-*仿抽提一次去除残留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自备的微量核酸沉淀剂(BTN50903；用前需要摇晃混匀)，振荡后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震荡10秒后15000rpm离心3～5分钟，弃上清。
7. 短暂离心数秒，用枪头吸弃上清。
8. 晾干半分钟，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃长期保存。

疑难解答：
1、没有RNA产物。最常见原因是DNA模板有RNase污染，测试方法是用纯化的RNA跟模板DNA一起保温，再检测RNA是否降解。本试剂盒缓冲液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染严重，可能需要用户补加RNase inhibitor。
2、RNA产量低。最常见的原因是DNA模板序列。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14个碱基内避免有U存在。
3、RNA长度比预期的短。可能是模板序列中有T3 RNA聚合酶的终止序列。可以改用SP6或T7体外转录试剂盒(启动子也必须改成SP6或T7启动子)。
4、RNA长度比预计的长。T3 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板又是质粒DNA，则可能是质粒DNA线性化不彻底。
5、5´单磷酸还是三磷酸。如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长(如12小时)，则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T3 RNA聚合酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5´端是单磷酸的比例将大大增加。

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