动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol) RNA纯化

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名称：动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol) RNA纯化
规格：50次
编号：BTN71201
英文名：Animal RNA column extraction kit(Trizol)
本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 性价比高于进口的柱式RNA提取产品。

试剂盒组成：

 

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold 保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备*仿(1mL溶液A需0.2mL *仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000rpm室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
12.室温12000 rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA 最好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册)，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼*(代"酸")络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

更多有关动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol) RNA纯化的价格及使用说明等，请联*(代"系")我们的业务经理王欣女士咨询，我公司还销*(代"售")以下产品：
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动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol) RNA纯化关键词：BTN71201,动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol),Animal RNA column extraction kit(Trizol)


·Sephadex G50介质
编号：BTN130997
英文名称：Sephadex G50
规格：10mL

·植物叶绿体蛋白提取试剂盒
编号：BTN130887
英文名称：Plant Chloroplast Protein Extraction Kit
规格：15次
本试剂盒是结合植物叶绿体纯化试剂盒和细菌蛋白质提取试剂盒而推出的新兴产品，专门用于植物叶绿体蛋白的快速提取。

产品特点：
1. 即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2. 本产品足够15次提取，每次可处理30g叶片。
3. 得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、免疫印迹分析、蛋白活性测定和BCA法及Lowry法蛋白定量(不适用于Bradford法)。
4. 已经成功用于菠菜、大豆、莴笋、白菜、烟草和甜菜等植物，还可用于更多植物(可能需要优化条件)。

试剂盒组成：

成份	规格
匀浆液成分一	250mL×2
匀浆液成分二(干粉)	3g
Percoll	60mL
带柄尼龙滤膜	1个
植物叶绿体纯化试剂盒	15次
溶液A	15mL
溶液B	1.5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：叶绿体对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能，提取还需要在昏暗的光线条件下进行。

一：叶绿体的纯化
1. 实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成，否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净，再用蒸馏水淋洗，去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理，则保存时需要保持叶片湿润，即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。
2. 新鲜(实验当天)制备匀浆液：将自备的去离子水与匀浆液成分一按4：1的比例混合，然后在混合液中加入匀浆液成分二干粉到终浓度0.1%(每100mL中加入0.1 g干粉)，摇晃溶解后所得溶液即为匀浆液，冰上预冷待用。一次实验(从30 g叶片提取叶绿体)所需要的匀浆液体积跟材料不同而不同。
3. 新鲜采集植物叶片，快速去除叶脉并将叶片剪成1-3 cm2大小的碎片并浸泡在适量的预冷的匀浆液中(每克叶片加4mL匀浆液，但对烟草和大豆，每克叶片需要加6mL匀浆液)。
4. 将浸泡了叶片的匀浆液转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：除Waring匀浆机外，还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法，但这些方法的单次处理量都比较小，需分成很多小份单独匀浆，然后再汇集。
5. 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，可先将滤液收集到预冷的200mL量筒中，再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。
6.在水平转子离心机上4℃ 200 g离心3分钟(对菠菜，白菜和莴笋材料)或400 g离心1分钟(对甜菜材料)，白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。
7. 将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
8.在水平转子离心机上4℃ 1000 g离心7分钟，小心弃上清，沉淀含叶绿体，呈浅绿色。
9.在沉淀中加入1.5mL预冷的匀浆液，手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意：重悬时最好避免溶液起泡，也不要用枪头吹打，否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象，但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
10. 将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL)，得到叶绿体粗提液，可直接用于后续的SDS-PAGE，Western，ELISA和蛋白组分析。
11. 如果需要以之为材料精提叶绿体，就需要用密度梯度离心法将完整的叶绿体和其他污染物进一步分离。具体操作步骤是：在50mL塑料离心管中先加入6mL匀浆液成分一和4mL Percoll，充分混合均匀。在其液面上小心铺上叶绿体粗提液。在水平转子离心机上4℃ 1000 g离心8分钟，管底绿色沉淀为完整的叶绿体。小心将上清倒出后，用于叶绿体蛋白提取。

二：叶绿体蛋白质的提取
12. 将1mL的溶液A和100μL溶液B加入到叶绿体沉淀(约15mg湿重)中，吹打混匀。
13. 冰上放置30分钟至1小时至溶液变清。
14. 4℃ 1,2000 g离心1分钟。
15. 将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分样品到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液(终浓度为1×)，在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。


动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol) RNA纯化关键词：BTN71201,动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol),Animal RNA column extraction kit(Trizol)

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