超级杂交液(不含甲酰胺)现货价格

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超级杂交液(不含甲酰胺)现货价格的品牌：百奥莱博，是优质的探针标记及检测产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多超级杂交液(不含甲酰胺)等探针标记及检测产品请联*(代"系")我司咨询订购。

名称：超级杂交液(不含甲酰胺)现货价格
规格：100mL
英文名：Super hybrid solution(formamide free)
品牌：百奥莱博
编号：BTN80915A
产地：国产|进口
核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交，由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子(靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一，应用非常广泛。由于核酸杂交效率受印迹膜种类、杂交温度、探针浓度、杂交液离子强度、杂交液pH及杂交液粘度等因素影响，用户自己摸索和优化相关条件非常繁琐，因此本公司开发了本产品，其操作流程如下：


产品特点：
1. 既可用于Southern杂交(靶分子为DNA)，也可用于和Northern杂交(靶分子为RNA)，还可以用于菌落杂交，基因芯片等杂交。
2. 既可以用于同位素探针的杂交，也可以用于非同位素探针的杂交。
3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探针，也可以使用RNA探针(包括RNA Oligo)
4.含多种能够促进杂交的聚合物，使杂交反应能在6～12小时完成，而常规杂交反应一般需要12～24小时。
5.含多种封堵剂，能阻印迹膜对探针分子的非特异性吸附，能有效降低背景信号，延长曝光时间以便检测到低拷贝的RNA(Northern)和单拷贝的基因(Southern)。
6. A型不含甲酰胺，B型含50%的甲酰胺。后者使杂交在较低温度就可以完成，适合Tm 较高的分子杂交(如RNA-RNA和RNA-DNA杂交)。
7.跟各种常用的印迹膜兼容，包括硝酸纤维素膜和尼龙膜。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。本产品属于高盐溶液，低温下产生沉淀，必须在65℃加热溶解并充分摇匀后才能使用。

使用方法：

一、根据探针和靶分子的不同，分别按下面不同情况计算杂交分子的Tm 值
1. 对DNA-DNA杂交，其Tm = 81.5 + 16.6×log10[Na+] + 0.41×GC%–500/L
说明：L是探针或靶分子的长度(用两者中最短的一个)
GC%是探针或靶分子中的GC 百分比(用两者中最短的一个)
Na+浓度是本产品中Na+的浓度，为0.75 M，16.6 ×log10[Na+]=(-2.07)
2. 对DNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高10-15℃。
3. 对RNA-RNA杂交，其Tm 值比DNA-DNA的Tm 值要高20-25℃。
4. 对Oligo探针杂交，Tm=GC 数量×4℃+AT 数量×2℃。

二、确定最佳杂交温度(预杂交温度跟杂交温度应该一样)
1. 对于大于200bp的DNA-DNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃，一般选择68℃。
2. 对RNA-RNA或DNA-RNA杂交，最佳杂交温度一般比Tm低15-25℃。如果这样计算出的杂交温度很高(如高于70℃)，则RNA容易降解，所以最好选用含甲酰胺的超级杂交液(B型本产品)，以便能在42℃完成杂交。
3. 对Oligo探针的杂交，最佳杂交温度一般比Tm低5℃。由于Oligo较短，更容易受各种因素影响(如错配率、修饰碱基比例等)，所以最佳温度需要适度摸索和优化。

三、确定洗膜温度
一般使用0.1×SSC做洗膜液，在此条件下的最佳洗膜温度比Tm低5-12℃，一般情况下可以在55℃进行洗膜。Oligo探针可以室温洗膜。

四、预杂交步骤
预杂交就是用不含探针的本产品跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附标记的探针，造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6×SSC溶液中，使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋最好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2mL超级杂交液的比例沿小口加入超级杂交液，然后用塑料封口机将口封牢。
3. 将此塑料袋浸没入温度设定在最佳杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中，保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使超级杂交液与印迹膜充分接触。

五、杂交步骤
1. 如果标记的探针是双链核酸，则需经变性处理。具体操作是将探针样品在沸水浴中加热5分钟，然后迅速置冰浴中。如果是单链DNA或RNA探针，则不需变性，直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪刀剪一小口，加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则探针的量可减少。如果是放射性探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3.在选定的杂交温度下继续保温，时间一般为6-12小时。

六、洗膜步骤。注意在下面的所有操作过程中，一定不要使印迹膜干燥。
此步是将与印迹膜非特异结合的探针分子洗去而只留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可洗掉。
1.杂交完毕，取出塑料袋，剪去一角，倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用再倒弃。
2. 剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC(含0.5%SDS)溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
3. 重复上步操作一次。
4. 将印迹膜转移至0.1×SSC(含0.1% SDS)溶液中，在计算好的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。
5. 重复上步操作一次。如果是同位素标记探针，则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
6. 将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测。

疑难解答：
问题一：高背景(有或没有杂交信号)
解决方案：将放射性探针的比活降低到2×10E6 cpm/mL以下；将非放射性探针的终浓度降低到30 ng/mL以下；将探针长度控制在200–800 核苷酸；减少杂交时间；适当提高杂交温度。
问题二：没有杂交信号或杂交信号非常弱
解决方案：杂交过程中应应该连续振荡，不应该有气泡，避免印迹膜变干。将放射性探针活性提高到>5×10E8 cpm/ng，提高非放射性标记探针的终浓度；适当降低杂交温度。

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·BCA法蛋白定量试剂盒
编号：BTN80815
英文名称：BCA Protein Assay Kit
规格：500次
本产品是基于BCA法(bicinchoninic acid，二奎啉甲*(代"酸")法)蛋白检测原理开发的蛋白质浓度测定产品，BCA法跟Lowry法的第一步完全相同，就是在碱性条件下，蓝色的Cu2+被蛋白质还原成紫色的Cu+。此反应类似Cu2+与Biuret(NH2-CO-NH-CO-NH2，双缩尿)发生的反应，故又叫Biuret反应(Biuret反应本省就可以测定蛋白质浓度，目前仍然是医院血液蛋白定量的方法)。第二步，Cu+与BCA发生反应形成水溶性的紫色化合物，通过分光在562nm处测定紫色化合物的量就可以精确定量蛋白质浓度。BCA 检测灵敏度比Biuret反应高100倍左右。


产品特点：
1．对各种常见的去污剂不敏感，但对Cu的还原剂和螯合剂比较敏感。
2．比Lowry法更加简单快捷，45分钟内完成测定。
3．试剂稳定，室温可以放置两年。工作液1 天内有效。
4．线性范围在 20～2000μg/mL。如果需要范围在0.1-10ug/mL，需要选用超敏BCA。
5．最小测量体积为1-20μL。
6．终产物稳定，变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
7．可以检测最短到双肽，而Bradford法需要一定大小的蛋白质。
8．有常规(试管)和微量(96孔板)两种检测模式。

试剂盒组成：

 

成分	规格
溶液A	100ml
溶液B	2ml
BSA标准品(2mg/mL)	1ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存(但BSA 标准品需要-20℃保存)，有效期两年。

使用方法：

一：96 板操作模式
1．取一块96孔板，先进行编号(编号可以根据样品数增加)，并按照下表加入BSA 标准，待测样品和溶解待测样品的缓冲液(可以用水替代)：

编号	BSA 标准(2ug/uL)	待测样品(μL)	样品缓冲液(μL)	总体积(μL)	蛋白含量(μg)
0	0	0	20	20	0
1	1	0	19	20	2.0
2	2	0	18	20	4.0
3	4	0	16	20	8.0
4	8	0	12	20	16.0
5	12	0	8	20	24.0
6	16	0	4	20	32.0
7	20	0	0	20	40.0
样品1	0	X	补到20	20	未知
样品N	0	Y	补到20	20	未知

2．计算BCA工作液需要量：根据样品数量(包括制备标准曲线的样品的数量)和每个样品需要0.2mL BCA工作液的比例，计算所需BCA工作液的用量，然后加上10%损耗作为实际需要配制的量。例如：计算出需要5mL工作液，实际按不少于5.5mL的量配制。
3．配制BCA工作液：按50体积溶液A加1体积溶液B(50:1)的比例将二者充分混合，所得溶液即BCA工作液。比如：5mL溶液A+100μl溶液B。
注意：取用溶液A和溶液B前需要充分摇匀，溶液B非常容易形成沉淀，需要65℃加热溶解后才能使用。当把溶液B刚加入到溶液A中时，最初会出现淡绿色沉淀，轻微晃动沉淀即会消失，工作液最后成绿色，可以室温放置12 天，但需要将容器的盖子拧紧。
4．将10倍体积(即0.2mL)的BCA工作液加入到各孔中并混匀。如果用排枪加入并混匀则更好。也可把96孔板放在振荡器上振荡30秒混匀。
5．37℃放置30分钟。
6．冷至室温，10分钟内完成后续测定，否则化学反应还在继续进行，使光吸收值慢慢升高，每10分钟会升高2.5%左右。
7．在562nm下比色测定样品的光吸收。如酶标仪没有562nm的设定，可用接近的波长检测，如570nm。
8．将编号为0号的样品(对照)的读数从其余所有样品(包括0 号样品，其读数变成零)中扣除。
9．以0-7 号样品的BSA含量(μg，见上表最右行)为横坐标，以样品的吸光值为纵坐标，绘出BSA的标准曲线。
10．再将待测样品的吸光值(减去0 号样品的读数后的值)标在标准曲线上，其在横坐标上对应的蛋白含量(μg)就是待测样品中的蛋白质含量，除以样品稀释液总体积(20μl)，乘以样品稀释倍数即为样品浓度(μg/μL)。

二：试管测定模式
1、基本操作同上，只是操作改在编号的玻璃试管中进行，同时BSA 标准品(2ug/uL)的使用量从低到高改为0、5、10、20、40、60、80、100μL，样品的总体积从20μL 改为100μL，BCA工作液的用量从每个样品0.2mL 改为2mL。

三：注意事项
1．BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。所以，如果蛋白质浓度较低，可以改在60℃孵育30分钟或更长。
2．待测样品浓度在20～2000 微克/毫升浓度范围内有较好的线性关系。
3．在一定浓度范围内BCA法测定蛋白浓度不受下列化学物质的影响：

名称	在此浓度下不受影响
Ammonium Sulfate	1.5 M
Brij-35	5.0%
CHAPS	5.0%
EDTA	10mM
Hepes	100mM
Glycine，pH2.8	100mM
Guanidine HCl	4.0 M
Tween 20、60、80	5.0%
SDS	5.0%
Sodium Acetate pH5.5	200mM
Sodium Chloride(NaCl)	1.0 M
Sucrose	40%
Sodium Hydroxide(NaOH)	0.1 M
NP-40	5.0%
Triton X-100	5.0%
Urea	3.0 M

4．本方法受样品中螯合剂和还原剂的影响，所以需确保EDTA浓度不高于10mM，二硫苏糖醇不高于1mM，β-巯基乙醇不高于1mM，没有任何EGTA，否则建议使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒(BTN80815)。

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