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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
774
- 英文名:
EMSA Probe Biotin Labeling Kit
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
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文献和实验的能力,如果结合了那才是真正的参与转录的转炉银子, 有的入核后却不能和DNA结合,只能等着被降解! 其实总体而言大家做试验时都希望成功,但是EMSA试验技术的独特性和复杂性决定了,要想做成功EMSA试验,拿到阳性结果可总结为一句话: 把握整体,注意细节! 我觉的EMSA的整体性包括6大点:探针制备(设计,合成,标记,纯化,退火);个人实验设计(时间剃度浓度查阅文献等);核蛋白制备;浓度测定;EMSA操作;实验时竞争设计. 这六大点都是会直接影响到EMSA试验的成功
聚丙烯酰胺凝胶电泳时迁移较慢,而没有结合蛋白的探针则较快;孵育的样本在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并转膜后,蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带,说明有蛋白与目标探针发送互作。二、实验操作步骤1、实验前准备(1)合理的实验方案根据研究目的合理设计特异性探针实验组以及非特异性探针对照组,如有必要还可以添加特异性抗体组、特异性核酸竞争组等(2)样本制备可以选择提取样本的总蛋白、核蛋白或者使用纯化好的目的蛋白。对样本蛋白进行定量,实验中等量加入蛋白。(3)探针制备根据实验要求设计不同的探针并添加标记
。 (3)探针制备 根据实验要求设计不同的探针并添加标记,可以合成核酸后自行添加,部分已知蛋白有商业化的抗体也可以直接购买。现在大多数实验室已经不再使用放射性标记,生物素使用相对较多。 2、形成蛋白-探针复合物 (1)在0.5ml离心管中按顺序将下列组份混匀: 蛋白样本(2-5μg) Xμl poly d(I-C) 1μl Binding
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