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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
886
- 英文名:
p53 Mutation Probe For EMSA(10μM)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
p53 consensus oligo的序列如下:
5"-TAC AGA ACA TGT CTA AGC ATG CTG GGG ACT-3"
3"-ATG TCT TGT ACA GAT TCG TAC GAC CCC TGA-5"
EMSA突变探针-p53中p53的公认的结合位点发生了突变,从而使p53无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中,正常的标记探针和p53的结合的条带会被抑制;而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中,正常的标记探针和p53的结合的条带不会被抑制。参考下图。
一个典型的EMSA/Gel- Shift分析图
1,阴性对照反应(标记探针);
2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针);
3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记探针);
4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+标记探针100倍量的未标记突变探针);
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白+标记探针+目的转录因子的特异抗体)。
注意事项:
1. 避免加热到40℃以上,温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验Shift Assay ) 凝胶迁移实验是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术。这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理。当核转录因子与一条人工合成的特异的DNA或RNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA,从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。 发展: 从发展史来看,这项实验技术起初是用32P同位素标记人工合成的寡核苷酸形成探针,但是由于同位素的放射
技术毕竟是一门动手性很强的科学,理论还是和动手还是有一定差别的, 希望我的一些理论能给大家帮助.下面我大概的介绍一下EMSA的一些理论和自己试验的心得,以便站友学习, 另外,EMSA是一个很大的试验.我一时间也不能把所有的都罗列出来,只能等大家遇到问题,只要我有时间在线就尽力帮忙交流, 呵呵 ! 我做的最多的还是NFKB,此外还有AP-1,STAT3,STAT5,HIF等,希望能于大家交流. 简介: EMSA ( Electrophoretic Mobility Shift Assay ) 凝胶迁移
Electrophoretic Mobility Shift Assay--电泳迁移率检测
标记好的探针 1微升 总体积 10微升 突变探针的冷竞争反应: Nuclease-Free Water 4微升 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X)2微升 细胞核蛋白或纯化的转录因子 2微升 未标记的突变探针 1微升 标记好的探针 1微升 总体积 10微升 Super-shift反应: Nuclease-Free Water 4微升 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X
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