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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
439
- 英文名:
Biotin-labeled EMSA Probe(0.2μM)
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
本生物素标记EMSA探针已经过纯化,可以直接用于EMSA结合反应。本生物素标记EMSA探针可以和百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)配套使用。
注意事项:
1. 避免加热到40℃以上,温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于基于生物素标记的EMSA检测的详细操作可以参考百奥莱博的化学发光法EMSA试剂盒(YT190)的使用说明。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验,可以合成核酸后自行添加,部分已知蛋白有商业化的抗体也可以直接购买。现在大多数实验室已经不再使用放射性标记,生物素使用相对较多。2、形成蛋白-探针复合物(1)在0.5ml离心管中按顺序将下列组份混匀:蛋白样本(2-5μg)Xμlpoly d(I-C)1μlBinding Buffer2μlNuclease-Free ddH2OXμl总体积9μl(2)冰浴5min后,加入1μ探针。(对照组加1ul对照探针)(3)PCR仪中室温(20-23℃)温育30min。3、制备凝胶,电泳(1)制备6.5%非变性聚丙
性很强,而且半衰期为14天,所以从定购到标记再到做完试验,必须14天完成,种种制约因素导致现代科技发展非同位素EMSA试验技术,这就出现了地高辛标记为探针的非放射EMSA实验技术.在实践中没多久,地高辛标记为探针的非放射EMSA实验技术就暴露了一个严重的缺陷,标记的探真纯化后灵敏度弱,导致实验结果的信号不行,最终就出现了现在的生物素标记探真的EMSA实验技术.配合化学发光技术良好的解决了灵敏度的问题,到目前为止, 生物素标记探真的EMSA实验技术广为应用! EMSA试验成功的关键
(通常是含有转录因子结合位点的启动子序列)相互作用的调控蛋白/转录因子,获得目的基因的启动子序列后,使用该方法可以筛查48/96种常见的调控蛋白/转录因子与启动子序列结合情况。该方法利用转录因子与特定DNA序列结合的特点,针对每一种转录因子设计相应的生物素标记探针;当混合探针与核蛋白样本共同孵育时,探针与相应的转录因子结合形成转录因子/探针复合物;除去游离的探针,收集转录因子/探针复合物;分离复合物中的DNA探针,探针的量与转录因子含量呈正相关。在探针混合物中同时加入启动子片段,如果DNA序列中含有
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