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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
786
- 英文名:
Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")北京生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)价格,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:北京生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)价格
编号:YT031
规格:10次
品牌:百奥莱博
产地:国产|进口
本试剂盒是一种通过随机引物标记反应产生生物素标记DNA探针的试剂盒。本试剂盒标记的生物素DNA探针可以用于常规的Northern、Southern、colony或plaque hybridization、dot或slot blot、原位杂交等。
在Klenow酶(Klenow fragment,3"-5"exo-)催化下,通过随机引物标记反应(random prime labeling)可以把生物素标记的Biotin-11-dUTP掺入到新合成的DNA探针中,这样就可以产生生物素标记的DNA探针。在随机引物标记反应过程中,一些标记好的DNA探针可以被Klenow酶从模板DNA链上驱赶下来。这样在模板量较少的情况下,通过随机引物标记反应,最后可以产生比模板DNA量更多的生物素标记DNA探针,可多达1-15倍左右。
本试剂盒可以用于多种DNA模板的标记,包括DNA片段、线性化的质粒或cosmid、超螺旋DNA等。用于本试剂盒的模板DNA片段应不小于100bp,小于100bp的DNA模板可以使用百奥莱博的生物素3"末端DNA标记试剂盒(YT030)进行DNA探针标记。
用于本试剂盒的模板DNA的量应不少于10ng,推荐的模板用量为100ng-1μg。本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control DNA,可以用作检测生物素DNA探针标记效率的对照。生物素标记DNA可以使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当试剂盒进行检测。本试剂盒可以用于10个标记反应。
试剂盒组分:
| Random Primer in Buffer(5X) | 105μl |
| Klenow Fragment | 11μl |
| Biotin-Labeling Mix | 50μl |
| Ultrapure Water | 1ml |
| Biotin-Control DNA(3ng/μl) | 50μl |
| 探针标记终止液 | 100μl |
储存条件:-20℃。
使用说明:
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板,再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water,至总体积为34μl。(通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应)
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X),混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟,或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃,99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment,混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量,因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液,混匀,终止标记反应。至此标记反应已经全部完成,标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表:
| 100ng-1μgDNA模板 | xμl |
| Ultrapure Water | (34-x)μl |
| Random Primer in Buffer (5X) | 10μl |
| 100℃ 5分钟,立即冰浴冷却 | |
| Biotin-Labeling Mix | 5μl |
| Klenow Fragment | 1μl |
| 总体积 | 50μl |
| 37℃孵育过夜 | |
| 探针标记终止液 | 3μl |
| -20℃保存 | |
| 此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测 | |
11. 探针标记效率的检测:可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后,使用百奥莱博的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(YT032)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表:
| 模板DNA量 | 生物素标记DNA产量 | |
| — | 孵育1小时 | 孵育20小时 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1350ng |
| 100ng | 350ng | 1650ng |
| 300ng | 750ng | 2200ng |
| 1000ng | 1300ng | 2600ng |
| 3000ng | 1600ng | 2600ng |
注意:具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关,上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb,则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp,平均长度约为300bp左右。
北京生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)价格极具性价比,此外,我公司正火爆促销以下产品:
·兔抗TLR7抗体
编号:YT764
英文名称:TLR7 Rabbit Polyclonal Antibody
规格:50μl
本品为来源于兔的抗TLR7的多克隆抗体。
宿主:兔
克隆性:多克隆抗体
用途:WB,IHC
交叉反应性:人,小鼠,大鼠
分子量:140KDa
推荐稀释比例:WB(1:500-1:1000),IF(1:200),IHC(1:200),ICC(1:200),FC(1:100-1:200)
| About this Antibody | |
| Name | TLR7 Rabbit Polyclonal Antibody |
| Category | Polyclonal antibody(pAb); Primary antibody |
| Isotype | IgG |
| Purification | Peptide affinity purified |
| About the Immunogen | |
| Immunogen | This antibody is produced by immunizing rabbits with a synthetic peptide (KLH-coupled) corresponding to TLR7. |
| Gene ID | 51284 |
| SwissProt | Q9NYK1 |
| Synonyms | TLR7 |
| Category | Immunology and Inflammation |
| Background | Members of the Toll-like receptor (TLR) family, named for the closely related Toll receptor in Drosophila, play a pivotal role in innate immune responses. TLRs recognize conserved motifs found in various pathogens and mediate defense responses. TLR7, 8 and 9 form a group of structurally related TLR family members that are localized to intracellular endosomes . TLR7 shows highest expression in lung, placenta, and spleen. TLR7 mediates responses to a class of synthetic compounds, including imidazoquinolines, guanosine-based drugs that induce anti-viral responses. |
注意事项:
1. 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验,请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体,包括已经使用过的稀释抗体,请4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体,使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象,可以10,000g离心1-3分钟,取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况,则可以考虑废弃该抗体。
3. 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果,请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
储存条件:-20℃,有效期一年。
北京生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)价格关键词:生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法),YT031,Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)
·细胞与组织裂解液(一氧化*(代"氮")检测用)
编号:YT045
英文名称:Cell and Tissue Lysis Buffer for Nitric Oxide Assay
规格:100ml
本品是一种专门用于一氧化*(代"氮")或总一氧化*(代"氮")检测的细胞与组织裂解液。使用本裂解液裂解的样品,可以用于百奥莱博的一氧化*(代"氮")检测试剂盒(YT286)、总一氧化*(代"氮")检测试剂盒(YT287)的检测。
本裂解液裂解获得的样品中包含了细胞或组织样品中的大部分蛋白,可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036/YT037)测定蛋白浓度,并可以用于SDS-PAGE和Western印迹检测。需要注意的是本裂解液中不含蛋白酶和磷酸酯酶的抑制剂。本裂解液中添加蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂可能会干扰后续的一氧化*(代"氮")检测。
本裂解液可以耐受反复冻融。本裂解液如果用于培养于六孔板中一个孔的细胞的裂解,或者用于20mg组织的裂解液,约可以裂解500-1000个样品。
储存条件:-20℃,有效期一年。
北京生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法)价格关键词:生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法),YT031,Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)
PY02-084 改良Frey氏培养基基础 250克
磺胺噻唑 OTAC 72-14-0
5-*基水杨酸 SAHH 89-57-6
DP106 质粒小提中量试剂盒
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聚茴脑磺酸* H-Thr-OMe?HCl 55963-78-5
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L-*丙*酸甲酯盐*(代"酸")盐 PGN 7524-50-7
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文献和实验一种基于手动芯片点样仪的快捷高效的转基因植物PCR-dot-blot鉴定法
为探针进行杂交,所得X光片成像结果如图2右侧所示。成像斑点清晰,三张重复膜的结果一致,被检转基因植株全为阳性,阴性对照处未检出杂交信号,阳性对照明显。 3、讨论 PCR的方法用于检测转基因植物非常简便,但是其高灵敏度的特点容易导致假阳性结果,须经PCR产物克隆测序最终确认,如果用于鉴定大批量的转基因植物将会相当的费时费力。为此我们借助芯片点样仪样品量少、操作方便、重复性好等优点,采用快速、安全的生物素标记探针杂交法对转基因植物的PCR产物进行鉴定。为保证结果的真实性,一方面将PCR
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是:(1)Klenow片段没有5'→3'外切酶活性,反应稳定,可以获得大量的有效探针。(2)反应时对模板的要求不严格,用微量制备的质粒DNA模板也可进行反应。(3)反应产物的比活性较高,可达4×109 cpm/μg探针。(4)随机引物反应
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