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- 2025年07月13日
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文献和实验1.FSC = 细胞体积大小 FSC（Forward Scatter，前向散射光），细胞散射光涉及光的折射、反射和衍射，是一个光学测量值。对FSC 影响最大的是细胞内部和外部折射率之间的差异，所以 FSC 可以辅助判断细胞的大小。但是细胞核质比、细胞颗粒的数量和类型以及细胞表面形状等因素也会影响细胞散射光。因此，不要总是认为较大的 FSC 一定等于较大的细胞体积。 2.细胞固定用的是 1％ 多聚甲醛（PFA） 多聚甲醛（PFA）是不溶于水的白色粉末，而在使用前我们需要将其配置成溶液：通过加热
入20.9g MOPs，放在磁力搅拌器上溶解。再加1.86g EDTA二水二钠，放在磁力搅拌器上溶解。用1M灭过菌的NaOH 调PH至7.0（约用NaOH 40ml），用DEPC 处理过的去离子水定容至500ml，装入棕色瓶中，写好标签，室温避光保存。4、5 × 甲醛变性胶加样缓冲液（5×loading buffer）： 配制10ml。预先配制水饱和的溴酚蓝溶液：在1.5ml 离心管中加入约0.1mg溴酚蓝，加入1ml DEPC水溶解，充分振荡溶解，离心，可见离心管底部有溴酚蓝粉末剩余，上层液体
%，70%，50%，30%各5min。入PBS（含5mmol/l MgCl 2 ,pH7.3～7.4）10min×2。入0.2n HCl 20min以进一步去除蛋白。 （3）50℃2×SSC，含5mmol/l EDTA溶液中30min。 （4）蛋白酶K（1μg/ml溶于0.1mol/l PBS中，）37℃20～25min。 （5）0.2mol/l 甘氨酸液：室温10min，中止蛋白酶反应。 （6）4%多聚甲醛（PBS新鲜配制）：室温20
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