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文献和实验。 第一步:选择流式细胞仪 在下拉菜单中选择您使用的流式细胞仪,这里以美天旎10通道的MACSQuant Analyzer 10 为例。 第二步:选择靶标/抗原 在第一列中选择你需要标记的抗原;第二列中选择目标样本的物种;如果已知抗原表达水平,则可在最后一列中输入抗原表达丰度的数据,为后续的配色提供参考。指标选择完成后,即可跳出该抗体偶联荧光素的选择范围。依次在各通道选择待标记抗原的信息,点击右上方的Continue进入下一步。 第三
,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。 如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测,尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot 检测中则结合出现IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链
性免疫球蛋白产生交叉反应, 例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子(酶、荧光素、生物素等)的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况,除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法,则抗体宿主物种的影响不大,如对不含IgG 的细胞裂解物样本的western blotting检测。 尽管如此,含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot 检测中则结合
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