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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
17
- 供应商:
圻明
- 检测范围:
详见说明
- 检测方法:
免疫组织化学
- 应用:
病理学研究
- 适应物种:
人大小鼠兔牛
- 标记物:
HRP-SA
- 样本:
组织
- 规格:
50T-100T
免疫细胞化学染色方法
1、细胞标本置于载玻片上;
2、固定:建议使用95%乙醇或10%中性缓冲福尔马林固定液固定10分钟;
3、稍水洗,载玻片上加1%Triton X-100试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3x3分钟;
4、根据第一抗体的要求,对细胞进行相应的抗原修复;
5、如有必要,每张载玻片上加过氧化物酶阻断试剂,室温下孵育10分钟,PBS冲洗3x3分钟;
6、除去PBS,载玻片上加第一抗体,室温下孵育60分钟或4℃过夜,PBS冲洗3x3分钟;
7、除去PBS,载玻片上加检测试剂盒(按照试剂盒说明书进行操作),PBS冲洗3x3分钟;
8、除去PBS,根据检测试剂盒选择相应的显色系统,后中性树胶封固。
备注:更好的方法是通过离心或直接收集将细胞聚拢,再用蛋清或琼脂包裹后形成细胞块进行固定、脱水、包埋、切片,再按照免疫组化染色步骤进行操作。
免疫组织化学技术是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂,如酶、金属离子、同位素等,显示一定的颜色。借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化,从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的一门新兴组化技术。
在病理学研究中,免疫组化技术的作用和意义颇为重要。免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到普遍认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50-75%。
组织的固定:病理学研究和免疫组化实验中,组织的固定是非常重要的一步。将目的组织放于某些化学试剂中,使组织中的细胞物质接近于具有生命功能时的结构和形态称为固定。组织固定还要减少外源性和内源性分解酶的作用,防止细胞自溶等,从而保持组织和细胞内的抗原性,使抗原不失活。
Cochlin蛋白,COCH,免疫组化试剂盒人具有以下特点:多聚物技术,使得酶分子与二抗IgG分子直接结合形成的多聚物分子高度的敏感性、染色强度,可以避免由于生物素引起的非特异性背景显色,更适合于生物素含量较高的组织细胞的免疫组化实验;孵育时间短,只需孵育15分钟,使得免疫组化实验时间大为缩短,是医院病理科开展免疫组化实验的理想试剂盒。
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文献和实验组织化学分析。(图 C)使用Anti-Erk1/2 Mouse mAb 鼠单抗进行目的蛋白检测;(图 D) 使用p44/42 MAPK (Erk1/2)Rabbit mAb 兔单抗进行目的蛋白检测。 图 7 免疫组化实验检测Akt表达 注:使用 Anti-Akt (pan) Rabbit mAb 对正常小鼠肝组织进行免疫组织化学分析。(图 E)使用免疫组化试剂盒 M&R HRP/DAB Detection IHC Kit,抗体1:100 稀释;(图F)使用另一种试剂盒,抗体 1:100 稀释。
V-P反应 Voges-Proskauer reaction
检测某种细菌分解碳水化合物产生乙酰甲基甲醇[CH 3 CH ( OH ) COCH 3 ] 的反应。通常把细菌培养在葡萄糖蛋白胨液体培养基中,加入强碱可见显有红色。此反应用于细菌的鉴别。
。水化用梯度乙醇(由高到低)。若脱蜡和水化不全易出现局灶性反应和浸洗不全,而产生非特异性背景着色。 4、抗原修复:由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中,发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用,从而失去抗原性;通过抗原修复,使得细胞内抗原决定族重新暴露,提高抗原检测率。常用的修复方法从强到弱一般分为三种,高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种(具体的可以查阅相关资料,大量的:中性的、高 pH 的等)。我们实验室一般用微波修复中火 6 min*4 次,效果不错。注意微波修复后自然冷却 30
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